本发明属于视频添加剂领域,具体涉及一种紫菜蛋白鲜味肽及其筛选方法和应用。
背景技术:
1、紫菜中含有多种营养物质,既可生食也可制作成干制品食用,因其特殊的气味还可被制作成香精等已不具紫菜形态的产品,极大的提高了紫菜产品的附加值。紫菜具有的多种生物活性物质,例如多糖、多酚、藻胆蛋白等,具有开发为保健食品和天然色素的巨大潜力,还可预防肉制品脂质氧化,延长其保存期限。
2、目前,市场对紫菜的利用还不够全面,市面上出售的依然是紫菜的简易干制品、紫菜调味汁等,对紫菜的研究主要集中在紫菜多糖、多肽、多酚等在抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等方面,对其生物活性功能的开发也仅限于实验室阶段。紫菜中游离的鲜味氨基酸和呈味核苷酸丰富,可媲美海带,且不具有海带的腥味,加工中不需进行脱腥处理,有作为海洋来源的鲜味调味料的潜质,但至今未见对其鲜味开发的研究报道。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中鲜味调味品需要需要脱腥处理,制备工艺复杂的问题,本发明提供一种紫菜蛋白鲜味肽。
2、该紫菜蛋白鲜味肽包括序列为arevyrt、yfdra、fsdyk、ysditrpg、reyisnl、fdraavs、ycdrvaa、grvvyegl、giagarevy、driksfvl、eagyky、eygir、eylgr、yrpad、lydl、srvvvnsd、kdisf、vaegvkc、veklrgyf和lefr的多肽中的一种或多种。
3、本发明还提供了一种紫菜鲜味肽的筛选方法。
4、该紫菜蛋白鲜味肽的筛选方法包括以下步骤:
5、s1:干制坛紫菜粉碎后采用盐析法沉淀紫菜蛋白,并利用酶解法制备具有鲜味特征的鲜味肽,经过超滤、凝胶层析分离后得到初级提取物;
6、s2:步骤s1获得的初级提取物采用hplc-ms/ms系统进行多肽的氨基酸序列检测,获取多肽序列;
7、s3:采用在线预测程序对多肽序列筛选出鲜味、易溶于水、无毒性且鲜味可能性大于95%,与鲜味受体t1r1/t1r3对接,含有酸性氨基酸(e、d)且是未在uniprot数据库收录的新肽。
8、进一步地,步骤s1包括:
9、所述干制坛紫菜经高速粉碎机粉碎后过60目筛,然后进行超声粉碎,用硫酸铵沉淀紫菜蛋白,透析脱盐,冷冻干燥后得到冻干紫菜蛋白,酶解,依次经超滤膜过滤、凝胶层析得到所述初级提取物。
10、进一步地,步骤s2包括:
11、所述初级提取物经还原烷基化处理后,采用所述hplc-ms/ms系统进行多肽的氨基酸序列检测,质谱原始文件采用denovo的方法进行多肽序列解析,byonic根据原始的ms文件对蛋白质数据库进行了评估和检索。
12、进一步地,步骤s3包括:
13、用innovagen在线工具对多肽的可溶性进行预测;
14、通过在线工具toxinpred进行多肽的毒性预测;
15、通过呈味肽和呈味氨基酸数据库biopep database预测鉴定的鲜味肽的潜在的感官活性;
16、通过umpred-frl网络服务器对鲜味肽进行在线高通量鉴定;
17、借助uniprot数据库中search功能,搜索所筛选的多肽是否是未被收录的新肽。
18、进一步地,步骤s3包括:
19、通过uniprotkb数据库检索并下载t1r1和t1r3的氨基酸序列fasta文件,利用modeller 10.4软件分别对t1r1和t1r3进行序列对比,并通过ncbi网站的protein blast工具检索与t1r1蛋白序列相似度较高的模板,和与t1r3蛋白序列相似度较高的模板;
20、借助在线对接工具hdock服务器将t1r1和t1r3亚基构建的模型连接起来,形成一个完整的寡聚蛋白所述鲜味受体t1r1/t1r3,将其导入autodock tools软件进行优化。
21、本发明还提供了一种紫菜蛋白鲜味肽在制备具有减肥功效的功能性调味品中的应用。
22、进一步地,所述紫菜蛋白鲜味肽对cck、glp-1、pyy的分泌都具有促进作用。
23、本发明还提供了一种紫菜蛋白鲜味肽在制备增鲜调味品中的应用。
24、进一步地,所述紫菜蛋白鲜味肽具有与msg协同增鲜效果、与nacl的协同增咸效果或鲜味阈值在0.0625mg/ml~0.125mg/ml。
25、有益效果:
26、本发明提供的紫菜蛋白鲜味肽的筛选方法工艺简单,不涉及脱腥等工艺。
27、得到的新型鲜味肽,感官评价和电子舌结果均显示具有鲜味特征,且鲜味强度接近于鲜味评价基准物质谷氨酸钠溶液,鲜味肽的滋味轮廓相似,鲜味阈值在0.0625mg/ml~0.125mg/ml,其中p5、p9的鲜味最强;
28、将合成肽分别添加到msg溶液和nacl溶液中,发现在0.5%浓度下,合成肽对溶液的鲜味强度具有一定的提升,其中p4、p9的增鲜效果最明显,且p4对0.5%的nacl溶液还具有显著的增咸作用;
29、基于stc-1为内分泌细胞的特征,检测合成肽对细胞内胃肠道激素分泌的影响,结果显示,合成肽对cck、glp-1、pyy的分泌都具有显著的促进作用,对gip的分泌无明显的影响,表明合成肽有开发为具有减肥功效的功能性调味品的潜质。
1.一种紫菜蛋白鲜味肽,其特征在于,包括序列为arevyrt、yfdra、fsdyk、ysditrpg、reyisnl、fdraavs、ycdrvaa、grvvyegl、giagarevy、driksfvl、eagyky、eygir、eylgr、yrpad、lydl、srvvvnsd、kdisf、vaegvkc、veklrgyf和lefr的多肽中的一种或多种。
2.如权利要求1所述的紫菜蛋白鲜味肽的筛选方法,其特征在于,包括以下步骤:
3.如权利要求2所述的所述的紫菜蛋白鲜味肽的筛选方法,其特征在于,步骤s1包括:
4.如权利要求2所述的所述的紫菜蛋白鲜味肽的筛选方法,其特征在于,步骤s2包括:
5.如权利要求2所述的所述的紫菜蛋白鲜味肽的筛选方法,其特征在于,步骤s3包括:
6.如权利要求2所述的所述的紫菜蛋白鲜味肽的筛选方法,其特征在于,步骤s3包括:
7.如权利要求1所述的紫菜蛋白鲜味肽在制备具有减肥功效的功能性调味品中的应用。
8.如权利要求7所述的应用,其特征在于,所述紫菜蛋白鲜味肽对cck、glp-1、pyy的分泌都具有促进作用。
9.如权利要求1所述的紫菜蛋白鲜味肽在制备增鲜调味品中的应用。
10.如权利要求9所述的应用,其特征在于,所述紫菜蛋白鲜味肽具有与msg协同增鲜效果、与nacl的协同增咸效果或鲜味阈值在0.0625mg/ml~0.125mg/ml。
