一种羟基蛋氨酸镁及其制备方法与流程

1.本发明属于细胞生物学技术领域，具体涉及一种羟基蛋氨酸镁及其制备方法。


背景技术：

2.干细胞(stemcell)是一种具有自我更新能力以及多向分化潜能的细胞。按照分化潜能，干细胞可分为三大类：全能干细胞、多能干细胞、单能干细胞。按照发育阶段，干细胞又可以分为：胚胎干细胞与成体干细胞。由于伦理学的限制，现在用于临床研究和应用的干细胞多为成体干细胞。成体干细胞来源于成年动物的许多组织和器官，包括造血干细胞、神经干细胞、脂肪干细胞、骨髓间充质干细胞、脐带干细胞、脐血干细胞等等。
3.造血干细胞是迄今为止唯一广泛应用于临床治疗的干细胞类型。造血干细胞移植技术能够治疗白血病、淋巴瘤等多种血液类疾病，甚至能够对代谢性疾病、先天性免疫缺陷、糖尿病等疾病产生疗效；据统计，世界范围内每年接受造血干细胞移植治疗的案例超过40000例，其中多数造血干细胞的供体来源于捐献者的骨髓和动员的外周血干细胞；尽管该技术取得了巨大的成功，但是由于人类白细胞抗原(hla)配型的严格配对要求，70％的患者不能获得合适的供体。
4.脐带血造血干细胞对于hla配型的要求相对较低，且免疫原性低，再加上其获取方便、来源丰富，成为造血干细胞移植供体的一大来源。自20世纪80年代首例脐带血造血干细胞移植手术成功治愈faconi男童患者后，脐带血造血干细胞移植案例逐年增加。据统计，世界范围内脐带血造血干细胞移植案例已超过30000例，且还在不断增加。目前，脐带血造血干细胞移植技术的瓶颈在于其细胞含量少，一份脐带血中所含的造血干细胞及祖细胞数量不足以快速恢复成人患者的免疫系统，造成机会性感染致死率的增高。目前暂行的策略是双份脐带血移植，即一位患者清髓后先后接受两份脐带血的移植，但这增加了供体的hla配型匹配难度，因此，亟需扩增脐带血造血干细胞的方法，以获得足量的可供移植的造血干细胞。
5.人们对于脐带血造血干细胞的体外扩增进行了大量尝试，但都没有取得理想效果。早期人们利用血液中的细胞因子来培养造血干细胞，结果导致细胞分化，而移植功能减弱。后来，人们发现骨髓造血干细胞微环境中的wnt信号分子、notch配体、视黄酸拮抗因子等能够有效扩增cd34 造血干/祖细胞。利用chir99021或者bio激活wnt信号通路维持体外培养的造血干细胞的移植能力；而在造血干细胞的培养体系中添加dll1，dsl1等，能够通过激活notch信号而适度扩增造血干细胞。另有研究发现，骨髓内皮基质细胞分泌的ptn也能够轻微扩增造血干细胞。生理状态下造血干细胞处在低氧条件下，而体外培养产生的氧胁迫会通过增高ros水平损害造血干细胞的自我更新和移植功能；人们发现，抗氧化剂的添加以及mtor的抑制能够抵消这些损害。
6.羟基蛋氨酸又名蛋氨酸羟基类似物，是一种很重要的工业原料和医药中间体，广泛应用于有机合成，药物合成及生物合成等方面，蛋氨酸羟基类似物可在动物体中转化为l-蛋氨酸，发挥蛋氨酸的生物学功能，是动物的一种最直接廉价有效的活性蛋氨酸源，是蛋
氨酸的一种更有效更经济的替代产品。早在上世纪五十年代，羟基蛋氨酸镁就就开始在畜牧业中应用，并已成为饲料业，畜牧和宠物生产企业证实是一种性能卓越的蛋氨酸源。
7.目前，现有技术并没能够显著扩增脐带血造血干细胞。偶然的发现，铜离子螯合剂tepa，sirt抑制剂nicotinamide能够显著提高造血干细胞移植水平，且在临床实验中显示初步疗效，但扩增后的细胞体内存活时间不够长，且分化谱系不够完整。近几年的高通量筛选化学小分子发现一类氮杂环化合物sr1和吲哚类似物um171能够更有效的扩增具备长期移植能力的造血干细胞。临床实验表明，sr1扩增的造血干细胞具备重建患者免疫系统的能力，但其依然没有摆脱对双份脐带血移植的依赖。总的来说，囿于人们对造血干细胞的有限认识，针对单一信号通路进行调节的方法可能不利于整体调节hsc的生理状态。
8.现有羟基蛋氨酸镁的研究从实心颗粒状往多孔颗粒状发展，如果能将多孔颗粒状的羟基蛋氨酸镁应用于扩增造血干细胞的培养体系，必将具有很好的市场前景。


技术实现要素：

9.针对现有造血干细胞移植中，扩增后的细胞体内存活时间不够长，且分化谱系不够完整的问题，本发明提供一种羟基蛋氨酸镁及其制备方法，制备得到一种多孔颗粒状的羟基蛋氨酸镁，将得到的多孔颗粒状的羟基蛋氨酸镁应用于扩增造血干细胞的培养体系，能够显著提高新鲜血样造血干细胞体外扩增所得的细胞总量。
10.本发明的目的通过以下技术方案来实现：
11.羟基蛋氨酸镁的制备方法，是一种多孔颗粒羟基蛋氨酸镁的制备方法，包括如下步骤：
12.1)将羟基蛋氨酸、碳酸镁和水混合于密闭容器中，再加入相当于水质量0.2-0.5％的甘油硬脂酸酯，进行高压反应，所述的羟基蛋氨酸与碳酸镁的摩尔比为2:(1.1-1.2)，水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸镁总质量的3-8％；高压反应的压力控制在0.2-0.5mpa，反应温度控制在100-150℃，反应时间为0.5-1.0h；
13.2)上步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；
14.3)上步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，得到多孔颗粒羟基蛋氨酸镁，多孔颗粒的粒径为200-600μm，多孔颗粒的孔隙率为50-60％。
15.本发明中：
16.步骤1)中所述的羟基蛋氨酸与碳酸镁的摩尔比为2:(1.1-1.2)，碳酸镁过量，目的是促使羟基蛋氨酸酸反应更彻底，提高羟基蛋氨酸的利用率，降低羟基蛋氨酸镁的生产成本，同时，由于羟基蛋氨酸粘度高，碳酸镁适当过量也可降低产物的粘度。
17.步骤1)中所述水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸镁总质量的3-8％，优选水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸镁总质量的5％，加入适量水，一方面，降低反应物的粘度，有利反应物混合均匀，有利于提高产率，另一方面，在密闭容器中的反应提供足够的蒸汽压，有利于的介孔的形成；如果水的添加量过低，则混合效果降低，且不能提供足够的蒸汽，水的添加量过高，降低了反应物的浓度，会降低反应速度，而且，水量过多，产生的蒸汽多，不利于反应压力的控制，更不利于后续的瞬间卸压。
18.步骤1)中所述高压反应的压力控制在0.2-0.5mpa，控制适当的压力提高反应速度，同时，有利于容器中的水形成蒸汽并进入到产物颗粒中，压力太低，蒸汽不能顺利进入
颗粒内部，压力太高，不利于形成颗粒，产物颗粒的粒径减少，降低了产物的性能，优选地，压力控制在0.2、0.3、0.4或0.5mpa。
19.步骤2)中所述将高压反应的密闭容器瞬间卸压，通过将密闭反应容器中压力瞬间卸除，使反应产物颗粒中的蒸汽瞬间冲出，由于是瞬间卸压，颗粒中中蒸汽位置没有被填充，形成介孔，从而得到多孔颗粒，如果卸压时间太长，颗粒中蒸汽不能瞬间溢出，随着反应容器中压力和温度缓慢降低，颗粒中孔洞结构坍塌，得不到多孔颗粒。
20.步骤3)所述的真空干燥，真空度为0.04-0.08mpa，温度为80-120℃，真空干燥时间为1-2h。
21.步骤3)所述的多孔颗粒羟基蛋氨酸镁，通过控制多孔颗粒的粒径为200-600μm，提高产物颗粒的粒径，有利于提高产物流动性，减少产物粘壁性，同时，能有效降低生产和使用过程中粉尘量，提供干净的劳动环境；进一步优选地，所述粒径为200-400μm；更进一步优选地，所述粒径为250-350μm。
22.本发明还涉及采用上述羟基蛋氨酸镁的制备方法得到的羟基蛋氨酸镁，是多孔颗粒羟基蛋氨酸镁，多孔颗粒的粒径为200-600μm，多孔颗粒的孔隙率为50-60％。
23.同时，本发明还涉及上述一种羟基蛋氨酸镁的应用，具体是在扩增造血干细胞的培养体系中的应用，将得到的多孔颗粒状的羟基蛋氨酸镁应用于扩增造血干细胞的培养体系，能够显著提高新鲜血样造血干细胞体外扩增所得的细胞总量。
24.与现有技术相比，本发明具有以下优点：
25.1、本发明所述的羟基蛋氨酸镁的制备方法，通过将密闭反应容器中压力瞬间卸除，使反应产物颗粒中的蒸汽瞬间冲出，由于是瞬间卸压，颗粒中中蒸汽位置没有被填充，形成介孔，从而得到多孔颗粒，如果卸压时间太长，颗粒中蒸汽不能瞬间溢出，随着反应容器中压力和温度缓慢降低，颗粒中孔洞结构坍塌，得不到多孔颗粒。
26.2、本发明所述的羟基蛋氨酸镁的制备方法，通过在高压反应过程中加入甘油硬脂酸酯，会随着水形成蒸汽并进入到产物颗粒中，在后续瞬间卸压的过程中，甘油硬脂酸酯会进入到颗粒中，利用甘油硬脂酸酯在耐热性好、粘度高、耐水解好的特点，具有很强的乳化性能和特殊的稳定性，可以支撑产物颗粒介孔的形成，防止颗粒中孔洞结构坍塌，从而得到多孔颗粒。
27.3、本发明得到的羟基蛋氨酸镁，是多孔颗粒羟基蛋氨酸镁，在应用于扩增造血干细胞的培养体系时，使羟基蛋氨酸镁产物与溶液的接触面积增加，促进了羟基蛋氨酸镁溶解速度，有效提高了羟基蛋氨酸镁的吸收利用率；但当孔隙率过高，产物的溶解速度过快，产物在短时间内被大量吸收，然而，有机体在短时间对羟基蛋氨酸镁的利用率有限，羟基蛋氨酸镁得不到利用而浪费，同时，给细胞造成了巨大负担，因此，保持一定孔隙率，通过控制多孔颗粒的孔隙率为50-60％是适合应用于扩增造血干细胞的培养体系。
附图说明
28.图1是本发明实施例1制备得到的羟基蛋氨酸镁颗粒的介孔的放大图；
29.图2是本发明实施例2制备得到的羟基蛋氨酸镁颗粒的介孔的放大图。
具体实施方式
30.以下通过实施例进一步详细描述本发明，但这些实施例不应认为是对本发明的限制。
31.实施例1：
32.羟基蛋氨酸镁的制备方法，包括如下步骤：
33.1)将羟基蛋氨酸、碳酸镁和水混合于密闭容器中，再加入相当于水质量0.3％的甘油硬脂酸酯，进行高压反应，所述的羟基蛋氨酸与碳酸镁的摩尔比为2:1.2，水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸镁总质量的5％；高压反应的压力控制在0.3mpa，反应温度控制在120℃，反应时间为1.0h；
34.2)上步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；
35.3)上步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，真空度为0.06mpa，温度为100℃，真空干燥时间为1.5h，得到多孔颗粒羟基蛋氨酸镁，多孔颗粒的粒径为250-350μm，多孔颗粒的孔隙率为60.05％。
36.实施例2：
37.羟基蛋氨酸镁的制备方法，包括如下步骤：
38.1)将羟基蛋氨酸、碳酸镁和水混合于密闭容器中，再加入相当于水质量0.2％的甘油硬脂酸酯，进行高压反应，所述的羟基蛋氨酸与碳酸镁的摩尔比为2:1.1，水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸镁总质量的3％；高压反应的压力控制在0.2mpa，反应温度控制在100℃，反应时间为1.0h；
39.2)上步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；
40.3)上步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，真空度为0.04mpa，温度为80℃，真空干燥时间为1.5h，得到多孔颗粒羟基蛋氨酸镁，多孔颗粒的粒径为200-400μm，多孔颗粒的孔隙率为57.22％。
41.实施例3：
42.羟基蛋氨酸镁的制备方法，包括如下步骤：
43.1)将羟基蛋氨酸、碳酸镁和水混合于密闭容器中，再加入相当于水质量0.5％的甘油硬脂酸酯，进行高压反应，所述的羟基蛋氨酸与碳酸镁的摩尔比为2:1.2，水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸镁总质量的8％；高压反应的压力控制在0.4mpa，反应温度控制在130℃，反应时间为0.6h；
44.2)上步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；
45.3)上步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，真空度为0.08mpa，温度为120℃，真空干燥时间为2h，得到多孔颗粒羟基蛋氨酸镁，多孔颗粒的粒径为200-600μm，多孔颗粒的孔隙率为55.69％。
46.实施例4：
47.羟基蛋氨酸镁的制备方法，包括如下步骤：
48.1)将羟基蛋氨酸、碳酸镁和水混合于密闭容器中，再加入相当于水质量0.4％的甘油硬脂酸酯，进行高压反应，所述的羟基蛋氨酸与碳酸镁的摩尔比为2:1.1，水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸镁总质量的6％；高压反应的压力控制在0.5mpa，反应温度控制在150℃，反应时间为0.5h；
49.2)上步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；
50.3)上步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，真空度为0.05mpa，温度为110℃，真空干燥时间为1h，得到多孔颗粒羟基蛋氨酸镁，多孔颗粒的粒径为200-600μm，多孔颗粒的孔隙率为50.37％。
51.对比例1：
52.现有常规羟基蛋氨酸镁(粒径200-600μm的实心颗粒)。
53.对比例2：
54.和实施例1相比，步骤1)中没有加入甘油硬脂酸酯，其他同实施例1。
55.实验例：
56.首先，对本发明实施例中出现的英文词汇及涉及的试剂材料作出说明：
57.stemspan sfem ii是无血清培养基，生产厂商为stemcell technologies，货号为09655；
58.重组人干细胞因子rhscf(recombined human stem cell factor)，生产厂商为stemimmune llc，货号为hhm-sf-1000；
59.重组人血小板生成素rhtpo(recombined human thrombopoietin)，生产厂商为stemimmune llc，货号为hhm-tp-0100；
60.重组人fms样酪氨酸激酶3配体rhflt3l(recombined human fms-like tyrosine kinase 3ligand)，生产厂商为stemimmune llc，货号为hhm-ft-1000；
61.实施例1得到的羟基蛋氨酸镁、对比例1的常规羟基蛋氨酸镁、对比例2得到的羟基蛋氨酸镁；
62.外周血单个核细胞pbmc(peripheral blood mononuclear cell)
63.macs：磁珠分选；
64.dmso：二甲亚砜；
65.pbs:磷酸盐缓冲液；
66.methoculttm gf h4435，是半固体培养基；
67.cfu-e全称conoly forming unit of erythrocyte，中文名为红细胞集落形成单位；
68.cfu-g全称conoly forming unit of granulocyte，中文名为粒细胞集落形成单位；
69.cfu-m全称conoly forming unit of macrophage，中文名为巨噬细胞集落形成单位；
70.cfu-gm全称conoly forming unit of granulocyte-macrophage，中文名为粒细胞-巨噬细胞集落形成单位；
71.cfu-gemm全称conolyforming unit of granulocyte,erythrocyte,
72.macrophage/monocyte,megakaryocyte，混合集落，其中文名为粒细胞，红细胞，巨噬/单核细胞，巨核细胞集落形成单位；
73.bfu-e全称burst forming unit of erythrocyte，中文名为爆发式红细胞集落形成单位。
74.实验方法：
75.stemspan sfem ii培养基可从stemcell technologies公司购买，rhscf，rhtpo，rhflt3l购自stemimmune llc公司；尽管本发明的优先用于人类，其还可用于实验室动物，例如小鼠等；人类造血干细胞可来源于骨髓、外周血、脐带血和胎盘血，在本发明中，以脐带血造血干细胞为例，其中，脐带血采自健康产妇孕婴，经检测乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒、艾滋病、巨细胞病毒、torch检测、支原体、衣原体、g-6pd和地贫均为阴性，人脐带血造血干细胞表达如下几种膜分子：白细胞分化抗原cd45、白细胞分化抗原cd34、白细胞分化抗原cd90、白细胞分化抗原cd49f。
76.1)获取外周血单个核细胞；
77.(1)用一次性血袋(含肝素钠等抗凝剂)采集脐带血80-120ml，将脐带血由血袋转移至500ml培养瓶中，加生理盐水稀释2-3倍，混匀后逐滴加入0.4倍体积淋巴细胞分离液中，注意不要破坏界面；
78.(2)使用1500-2000rpm/min离心20min，因密度不同离心管中由上到下分为四层：第一层为血浆层、第二层为环状乳白色单个核细胞层(pbmc)、第三层为透明分离液层、第四层为红细胞层；
79.(3)用吸管小心吸取第二层环状乳白色单个核细胞层(pbmc)到另一50ml离心管中，补加生理盐水，再次使用1500-2000rpm/min离心5-10min；
80.(4)弃上清加生理盐水重悬，最后使用1500-2000rpm/min离心5-10min，再次弃上清，得到pbmc细胞团块。
81.2)利用macs从上述pbmc中获得cd34 脐带血造血干细胞；
82.(1)每份脐带血pbmc采用50ul人cd34 磁珠和50ul fcr blocker reagent及150ul 0.5％bsa的混合液重悬，4℃孵育30min；
83.(2)与此同时，将磁铁和磁力架至于超净台中紫外线照射30min；
84.(3)加入10ml无菌pbs，混匀后，使用1500-2000rpm/min离心5-10min后弃上清；
85.(4)将macs专用吸附柱放进磁铁中，加入500ul 0.5％bsa润洗，流出的液体用15mltube接住；
86.(5)500ul 0.5％bsa重悬获取外周血单个核细胞的步骤3)中pbmc团块，混匀后转移到macs专用吸附柱中，待液体完全流出；
87.(6)500ul 0.5％bsa洗涤3次，取下吸附柱，置于15ml tube中；
88.(7)加入1ml 0.5％bsa，用活塞把液体推入15ml tube中，所得液体即含cd34 脐带血造血干细胞；
89.(8)稀释，计数，如要必要，用冻存保护剂dmso将上述冻存于液氮中。
90.3)将所述cd34 脐带血造血干细胞悬浮接种于步骤2中得到的细胞培养基中进行培养，采用stemspan sfem ii无血清培养基，添加scf至scf的浓度为80ng/ml，添加flt3至flt3的浓度为90ng/ml，添加tpo至tpo的浓度为30ng/ml；24孔板中细胞接种密度为1x104/孔，分别添加实施例1得到的羟基蛋氨酸镁添加50μm、对比例1的常规羟基蛋氨酸镁添加50μm、对比例2得到的羟基蛋氨酸镁添加50μm，置于37℃，5％co2培养箱培养。
91.4)根据细胞培养状态，每隔2天补加步骤2中得到的细胞培养基500μl，7-10天可获得数量较多的造血干细胞，扩增倍数约为4-20倍。
92.将上述实验例培养的脐带血造血干细胞，分别对第7天的不同浓度的实施例1得到
的羟基蛋氨酸镁培养的细胞进行计数。
93.表1：cb cd34 细胞培养第7天各组条件细胞数目统计表
[0094][0095]
结果：
[0096]
1、通过实施例1和对比例1的比较，说明本发明得到的羟基蛋氨酸镁，是多孔颗粒羟基蛋氨酸镁，在应用于扩增造血干细胞的培养体系时，使羟基蛋氨酸镁产物与溶液的接触面积增加，促进了羟基蛋氨酸镁溶解速度，有效提高了羟基蛋氨酸镁的吸收利用率，进而显著提高了脐带血造血干细胞体外扩增所得的细胞总量，扩增后的造血干细胞含有更高比例的cd34 cd90 细胞群，表明这些造血干细胞更加原始，具有更强的重建血液系统的分化潜能，可以更有效地支持临床治疗需要。
[0097]
1、通过实施例1和对比例2的比较，说明本发明在制备羟基蛋氨酸镁的过程中，通过在高压反应过程中加入甘油硬脂酸酯，会随着水形成蒸汽并进入到产物颗粒中，在后续瞬间卸压的过程中，甘油硬脂酸酯会进入到颗粒中，利用甘油硬脂酸酯在耐热性好、粘度高、耐水解好的特点，具有很强的乳化性能和特殊的稳定性，可以支撑产物颗粒介孔的形成，防止颗粒中孔洞结构坍塌，从而得到多孔颗粒，将得到羟基蛋氨酸镁作为原料应用于扩增造血干细胞的培养体系，能够显著提高了新鲜血样造血干细胞体外扩增所得的细胞总量。
[0098]
通过实施例和对比例的基本性能的比较，说明实施例的制备方法明显优于对比例。

技术特征：
1.羟基蛋氨酸镁的制备方法，其特征在于：是一种多孔颗粒羟基蛋氨酸镁的制备方法，包括如下步骤：1)将羟基蛋氨酸、碳酸镁和水混合于密闭容器中，再加入相当于水质量0.2-0.5％的甘油硬脂酸酯，进行高压反应，所述的羟基蛋氨酸与碳酸镁的摩尔比为2:(1.1-1.2)，水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸镁总质量的3-8％；高压反应的压力控制在0.2-0.5mpa，反应温度控制在100-150℃，反应时间为0.5-1.0h；2)上步骤的高压反应完成后，将高压反应的密闭容器瞬间卸压，时间为1-3s；3)上步骤的卸压后，将得到的物料进行真空干燥，得到多孔颗粒羟基蛋氨酸镁，多孔颗粒的粒径为200-600μm，多孔颗粒的孔隙率为50-60％。2.根据权利要求1所述的羟基蛋氨酸镁的制备方法，其特征在于：步骤1)中所述水的添加量为羟基蛋氨酸和碳酸镁总质量的5％。3.根据权利要求1所述的羟基蛋氨酸镁的制备方法，其特征在于：步骤1)中所述高压反应，压力控制在0.2、0.3、0.4或0.5mpa。4.根据权利要求1所述的羟基蛋氨酸镁的制备方法，其特征在于：步骤3)所述的真空干燥，真空度为0.04-0.08mpa，温度为80-120℃，真空干燥时间为1-2h。5.根据权利要求1所述的羟基蛋氨酸镁的制备方法，其特征在于：步骤3)所述的多孔颗粒羟基蛋氨酸镁，粒径为200-400μm。6.根据权利要求5所述的羟基蛋氨酸镁的制备方法，其特征在于：步骤3)所述的多孔颗粒羟基蛋氨酸镁，粒径为250-350μm。7.一种羟基蛋氨酸镁，其特征在于：采用权利要求1-5任一项所述的羟基蛋氨酸镁的制备方法得到，是一种多孔颗粒羟基蛋氨酸镁，多孔颗粒的粒径为200-600μm，多孔颗粒的孔隙率为50-60％。8.权利要求7所述的一种羟基蛋氨酸镁的应用，其特征在于：所述羟基蛋氨酸镁在扩增造血干细胞的培养体系中的应用。

技术总结
本发明公开了一种羟基蛋氨酸镁及其制备方法，得到多孔颗粒羟基蛋氨酸镁，多孔颗粒的粒径为200-600μm，多孔颗粒的孔隙率为50-60％。所述羟基蛋氨酸镁应用到扩增造血干细胞的培养体系，能够显著提高了新鲜血样造血干细胞体外扩增所得的细胞总量。胞体外扩增所得的细胞总量。胞体外扩增所得的细胞总量。


技术研发人员：洪双胜 夏飞辉 蓸颠峰 江中秀 桑诚诚 彭红星
受保护的技术使用者：昕嘉生物技术（长沙）有限公司
技术研发日：2022.04.11
技术公布日：2022/5/25