提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂及方法

1.本发明属于微生物菌剂技术领域，更具体地，本发明涉及一种提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂及方法。


背景技术：

2.烟草是我国重要的经济作物之一。烟草生产对我国财政收入的增加和地方经济发展有十分重要的作用。烟草是喜光作物，光合作用合成的有机物质是烟株产量形成的基础，光合作用影响的各项生理代谢过程是烟叶品质形成的基础。因此，在一定范围内提高烟叶光合速率，有利于烟叶同化物的积累和转化，提升烟叶产量和品质。
3.叶绿素作为植物光合作用的重要物质，其含量的多少直接影响植物光合能力的强弱，叶绿素含量越高，叶片光合能力越强。目前烟叶生产上通常以施用氮肥的方式来提高叶片叶绿素含量，从而保证烟叶正常的光合作用。但氮素的大量使用易造成植烟土壤养分失衡，烟叶内在品质下降，香型风格特色不突出等问题，不利于优质烟叶的形成和烟区的可持续发展。
4.微生物菌剂是含有活菌并用于植物的生物制剂或活菌制剂，具有提高作物产量和品质、增强作物抗逆性、提高化肥利用效率、直接或间接改良土壤、预防土传病害和维持根际微生物区系平衡等多种功能。微生物菌剂可通过固氮、溶解和释放土壤难溶性养分、分泌植物激素或抗生素类物质等方式改善土壤状况，影响作物生长。不同的微生物菌剂具有不同的促生特性，对植物的促生效应亦不同。
5.因此，寻找一种有利于提高烟草叶片中叶绿素含量的微生物菌剂非常有意义。


技术实现要素：

6.基于此，本发明的目的之一在于提供一种提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂，对烟草施加该微生物菌剂后，可以显著提高其中叶绿素的含量，且烟草的株高和叶片数也得到了显著增加。
7.实现上述发明目的的具体技术方案包括如下：
8.一种提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂，所述微生物菌剂的活性成分为甲基杆菌yt2019b002，所述甲基杆菌yt2019b002的保藏编号为gdmcc no：61052，所述微生物菌剂中甲基杆菌yt2019b002的浓度为0.5
×
108cfu/g～1.5
×
108cfu/g。
9.在其中一些实施例中，所述微生物菌剂中甲基杆菌yt2019b002的浓度为0.8
×
108cfu/g～1.2
×
108cfu/g。
10.在其中一些实施例中，所述微生物菌剂中甲基杆菌yt2019b002的浓度为0.95
×
108cfu/g～1.05
×
108cfu/g。
11.在其中一些实施例中，所述微生物菌剂的剂型为液体制剂、粉剂或颗粒剂。
12.本发明还提供了上述微生物菌剂的制备方法，其包括以下步骤：将甲基杆菌yt2019b002接种于ams培养基中，培养至菌浓度为0.5
×
108cfu/g～1.5
×
108cfu/g，即可。
13.本发明还提供了上述微生物菌剂在烟叶种植中的应用。
14.本发明还提供了一种提高烟叶叶绿素含量的方法。
15.实现上述发明目的的具体技术方案如下：
16.一种提高烟叶叶绿素含量的方法，所述方法包括：对烟苗施用上述微生物菌剂。
17.在其中一些实施例中，采用灌根的方式对烟苗施用上述微生物菌剂。
18.在其中一些实施例中，在烟苗移栽后第2天～第3天和移栽后第14天～第15天施用上述微生物菌剂。
19.在其中一些实施例中，所述微生物菌剂的施用量为20ml～40ml/株烟苗。
20.在其中一些实施例中，所述微生物菌剂的施用量为25ml～35ml/株烟苗。
21.在其中一些实施例中，所述微生物菌剂的施用量为29ml～31ml/株烟苗。
22.与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
23.本发明的发明人发现，将从土壤中分离获得的、具有促生作用的甲基杆菌(methylobacterium populi)yt2019b002，制作成微生物菌剂，施加于烟苗时，不仅可以显著增加烟叶的叶片数，还可以显著地提高烟草叶片中的叶绿素含量，从而促进叶片光合作用的提高，进而促进烟叶的生长，可以减少烟叶种植中化学肥料的使用，降低环境污染。
附图说明
24.图1为本发明试验例1中移栽后35d和移栽后50d各处理的spad值。
25.图2为本发明试验例2中移栽后35d各处理的农艺性状的对比图。
26.图3为本发明试验例2中移栽后50d各处理的农艺性状的对比图。
具体实施方式
27.为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明公开内容的理解更加透彻全面。
28.除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。本发明所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
29.在本发明的其中一个方面，提供了一种提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂，所述微生物菌剂的活性成分为甲基杆菌yt2019b002，所述甲基杆菌yt2019b002的保藏编号为gdmcc no：61052，所述微生物菌剂中甲基杆菌yt2019b002的浓度为0.5
×
108cfu/g～1.5
×
108cfu/g，优选浓度为0.8
×
108cfu/g～1.2
×
108cfu/g，最优选为0.95
×
108cfu/g～1.05
×
108cfu/g。
30.本发明中的甲基杆菌(methylobacterium populi)yt2019b002属于甲基杆菌属(methylobacterium)，已知甲基杆菌属(methylobacterium)可利用空气中的氮源，用于其自身的生长繁殖；一些甲基杆菌属具有溶磷的作用，可将土壤中不溶态磷转化为可溶性磷最终被植物吸收利用；且研究发现，接种甲基杆菌对拟南芥根部结构及根毛生长有不同程度的促生作用。目前，甲基杆菌属在烟草上的应用还未见报道。
31.本发明中的甲基杆菌(methylobacterium populi)yt2019b002是从土壤中分离获得的，具有促生作用，当制作成微生物菌剂施加于烟草植株时，不仅可以有效促进烟草植株的生长，改善土壤环境，而且微生物菌剂的使用可以减少化学肥料的使用，降低环境污染。
32.本发明所述的甲基杆菌yt2019b002(methylobacterium sp.)已于2020年6月9日保藏于国家知识产权局指定的保藏单位广东省微生物菌种保藏中心(简称：gdmcc，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼)，保藏日期：2020年6月9日，保藏编号：gdmcc no:61052。
33.在本发明中，所述微生物菌剂的剂型为液体制剂、粉剂或颗粒剂。
34.传统的烟草栽培以施用氮肥为提高叶片叶绿素含量的主要方式，而氮肥使用过多不利于优质烟叶的形成，且易对生态环境造成负面影响。因此，在本发明的另一方面，提供了一种提高烟叶叶绿素含量的方法，所述方法包括：对烟苗施用上述微生物菌剂，从而可以提高烟叶叶绿素含量，从而促进叶片光合作用的提高，进而促进烟草的生长。
35.在本发明中，对烟苗施用上述微生物菌剂时，采用灌根的方式施用。
36.在本发明中，在烟苗移栽后第2天～第3天和移栽后第14天～第15天施用上述微生物菌剂。
37.在本发明中，微生物菌剂的施用量为20ml～40ml/株烟苗，优选的施用量为25ml～35ml/株烟苗，更优选为29ml～31ml/株烟苗。
38.以下结合具体实施例来详细说明本发明。
39.实施例1提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂和方法
40.本实施例的提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂，所述微生物菌剂的活性成分为甲基杆菌yt2019b002在微生物菌剂中的浓度为1.0
×
108cfu/g。
41.本实施例的微生物菌剂的制备方法为：将甲基杆菌接种于ams培养基中，25℃、180r/min恒温振荡培养获得浓度为1.0
×
108cfu/g的菌液。其中，ams培养基的制备：根据whittenbury et al.1970中甲基杆菌属细菌专性培养基ammonium mineral salt(ams)培养基，主要成分包括k2hpo
4 0.7 g，kh2po
4 0.54g，mgso4·
7h2o 1.0g，caci2·
2h2o 0.2g，feso4·
7h2o 4mg，nh4cl 0.5g，znso4·
7h2o 100.0mcg，mncl2·
4h2o 30.0mcg，h3bo3300.0 mcg，cocl2·
6h2o 200.0mcg，cucl2·
2h2o 10.0mcg，nicl2·
6h2o 20.0mcg，na2moo4·
2h2o 60.0mcg，蒸馏水1l，ph值6.8，121℃灭菌30min备用，灭菌后带培养基冷却至50-55℃，每100ml培养基加入1ml过滤灭菌的甲醇，混匀后倒三角瓶备用。
42.利用本实施例的微生物菌剂，提高烟叶中的叶绿素含量，包括如下步骤：在烟苗移栽后第2天和移栽后第15天，按30ml/株烟苗的量，采用灌根的方式对烟苗施用本实施例的微生物菌剂。
43.实施例2提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂和方法
44.本实施例的提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂，所述微生物菌剂的活性成分为甲基杆菌yt2019b002在微生物菌剂中的浓度为0.5
×
108cfu/g。
45.本实施例的微生物菌剂的制备方法和使用方法同实施例1。
46.实施例3提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂和方法
47.本实施例的提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂，所述微生物菌剂的活性成分为甲基杆菌yt2019b002在微生物菌剂中的浓度为0.8
×
108cfu/g。
48.本实施例的微生物菌剂的制备方法和使用方法同实施例1。
49.实施例4提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂和方法
50.本实施例的提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂，所述微生物菌剂的活性成分为甲基杆菌yt2019b002在微生物菌剂中的浓度为1.5
×
108cfu/g。
51.本实施例的微生物菌剂的制备方法和使用方法同实施例1。
52.实施例2提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂和方法
53.本实施例的提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂，所述微生物菌剂的活性成分为甲基杆菌yt2019b002在微生物菌剂中的浓度为1.2
×
108cfu/g。
54.本实施例的微生物菌剂的制备方法和使用方法同实施例1。
55.试验例1不同处理对烟草叶片叶绿素含量的影响
56.本试验例是于2021年12月在广东省科学院南繁种业研究所温室内对烟草开展了微生物菌剂接种试验，考察不同处理对烟草叶片叶绿素含量的影响。
57.试验所用烟草品种为云烟87。试验所用土壤采集于梅州烟区，土壤ph值为5.17，有机质含量为32.11g
·
kg-1
，全氮含量为1.84g
·
kg-1
，全磷含量为0.96g
·
kg-1
，全钾含量为15.60g
·
kg-1
。
58.试验为单因素处理，包括三个处理，每个处理设置6盆(直径25cm)，每盆移栽一株烟苗：
59.(1)、处理1(t1)：不施用菌剂(施用蒸馏水)
60.(2)、处理2(t2)：施用市面在售的微生物菌粉(菌护盾拜赖青霉微生物菌剂，有效活菌数≥2.0亿cfu/g，该菌具有防治土传病害，提高作物抗逆性及提高土壤磷利用率的功效)
61.(3)、处理3(t3)：施用本发明实施例1的微生物菌剂
62.具体操作如下：2021年12月9号移栽健壮且长势一致的烟苗至盆中，烟苗移栽后2天和移栽后15天，各处理以灌根的方式施入微生物菌剂，其中处理1施用100ml蒸馏水；处理2按照菌剂说明书推荐施用方法，将6g菌粉溶解至600ml，每盆施用100ml；处理3施入本发明实施例1的微生物菌剂，每盆30ml。移栽后40d，各处理施入4g复合肥(n:p2o5:k2o＝22:8:15)以维持烟株正常生长。
63.移栽后35d和50d，利用便携式叶绿素仪测定烟株叶片的spad值(叶片叶绿素含量的相对值)，测定每株烟叶从上往下数的第4～6片烟叶，每片叶子测定四个点。
64.结果如图1所示，从图1可知，移栽后35d和移栽后50d，处理3的spad值分别为23.27和36.18，显著高于处理1(19.34和33.05)和处理2(19.16和33.75)，说明施用本发明的微生物菌剂能显著提高烟叶叶片的叶绿素含量，有利于烟叶有机物质的形成。
65.试验例2不同处理对烟草农艺性状的影响
66.本试验例是于2021年12月在广东省科学院南繁种业研究所温室内对烟草开展了微生物菌剂接种试验，考察不同处理对烟草农艺性状的影响。
67.试验所用烟草品种、土壤、处理方法均同试验例1。
68.移栽后35d和50d，参照《烟草农艺性状调查测量方法yc/t 142-2010》，调查烟株农艺性状，记录株高，叶片数和最大叶长叶宽。
69.移栽后35d，烟株农艺性状的结果如表1和图2所示。
70.表1移栽后35d各处理农艺性状调查
[0071][0072]
由表1和图2可知，移栽后35d，处理2和处理3的最大叶宽大于处理1，而各处理的株高、叶片数、最大叶长均无显著差异。
[0073]
移栽后50d烟株农艺性状的结果如表2和图3所示。
[0074]
表2移栽后50d各处理农艺性状调查
[0075][0076][0077]
由表2和图3可知，移栽后50d，最大叶长和最大叶宽在三个处理之间均无显著差异，而处理3的株高和叶片数显著高于处理1和处理2。
[0078]
本试验例结果说明施用本发明中的微生物菌剂可以促进烟株株高和叶片数的增加，但对叶片的最大叶长和叶宽影响不显著。
[0079]
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0080]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

技术特征：
1.一种提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂的活性成分为甲基杆菌yt2019b002，所述甲基杆菌yt2019b002的保藏编号为gdmcc no：61052，所述微生物菌剂中甲基杆菌yt2019b002的浓度为0.5
×
108cfu/g～1.5
×
108cfu/g。2.根据权利要求1所述的提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂中甲基杆菌yt2019b002的浓度为0.8
×
108cfu/g～1.2
×
108cfu/g。3.根据权利要求2所述的提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂中甲基杆菌yt2019b002的浓度为0.95
×
108cfu/g～1.05
×
108cfu/g。4.根据权利要求1～3任一项所述的提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂的剂型为液体制剂、粉剂或颗粒剂。5.权利要求1～4任一项所述的提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将甲基杆菌yt2019b002接种于ams培养基中，培养至菌浓度为0.5
×
108cfu/g～1.5
×
108cfu/g，即可。6.权利要求1～4任一项所述的提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂在烟叶种植中的应用。7.一种提高烟叶叶绿素含量的方法，其特征在于，所述方法包括：对烟苗施用权利要求1～4任一项所述的微生物菌剂。8.根据权利要求7所述的提高烟叶叶绿素含量的方法，其特征在于，采用灌根的方式对烟苗施用微生物菌剂。9.根据权利要求7所述的提高烟叶叶绿素含量的方法，其特征在于，在烟苗移栽后第2天～第3天和移栽后第14天～第15天施用微生物菌剂。10.根据权利要求7～9任一项所述的提高烟叶叶绿素含量的方法，其特征在于，所述微生物菌剂的施用量为20ml～40ml/株烟苗。

技术总结
本发明公开了一种提高烟叶叶绿素含量的微生物菌剂及方法，所述微生物菌剂的活性成分为甲基杆菌YT2019B002所述微生物菌剂中甲基杆菌YT2019B002的浓度为0.5


技术研发人员：权利要求书1页说明书5页附图2页
受保护的技术使用者：广东省科学院南繁种业研究所
技术研发日：2022.03.22
技术公布日：2022/5/25