仿生型骨膜及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及生物材料技术领域，尤其是涉及一种仿生型骨膜及其制备方法和应用。


背景技术：

2.迄今为止，因外伤、肿瘤切除手术或先天性畸形引起的临界大小骨缺损的临床治疗一直面临着巨大挑战。目前多种方法，如自体骨移植、同种异体骨移植和活性生物材料组织工程等，均已被应用于缺损骨重建。但是，由于移植过程中的损伤或仿生支架设计上的疏忽，在没有骨膜的情况下，这些方法的修复能力十分有限。既往对于自体移植物的研究发现，在骨和软骨愈合的开始阶段，骨膜的再生作用约占70％。骨膜剥离与骨不连的高发生率密切相关，而保存骨膜或使用骨膜移植可显著改善骨植入物的重建效果。自体骨膜取材困难且来源有限，同种异体骨膜存在排异风险，而组织工程骨膜不仅可以辅助原生植骨或仿生骨支架，还可以直接作为天然骨膜的替代物。因此，仿生骨膜的构建成为研究热点。
3.传统观点认为骨膜结构分为两层：外层(纤维层)主要由排列致密的粗大胶原纤维束和少量弹性纤维组成，同时包括少量成纤维细胞及穿插其中的微血管；内层(生发层)主要由干细胞、骨祖细胞和成骨细胞等多种细胞组成，同时含有丰富的微血管及少量排列疏松的胶原纤维。
4.现有研究中多采用高分子膜材料替代天然骨膜。高分子膜材料主要包括合成高分子膜材料(pcl、pu、pla等)、天然高分子膜材料(胶原、明胶、透明质酸等)，以及二者的复合材料。高分子膜材料代替天然骨膜发挥的作用主要是膜引导组织/骨再生，即骨传导作用。已有研究表明，将膜材料覆盖于骨缺损区域，一方面可阻止非成骨性细胞(如成纤维细胞)向缺损区迁移，有利于骨细胞进入缺损区进行增殖或分化，以达到促进骨缺损修复的作用；另一方面，膜材料可阻隔微生物入侵，以达到减少感染等并发症的作用。然而，此类膜材料基本只具备骨传导及阻隔细胞或微生物的作用，本身不具备成骨或成血管活性。另外，单层膜材料不能模拟天然骨膜的双层纤维结构特点。
5.也有一些研究将膜材料与细胞结合，或将促成骨的细胞因子(如bmp-2、tgf-β1、fgf等)或药物加入膜中，以使膜材料同时具备骨诱导功能。但是细胞培养周期较长，耗时耗力；细胞因子半衰期短，在体内容易降解，不能满足较长的骨生长周期中的需要，而添加过量又容易扩散到周围软组织中，导致异位骨化等问题。
6.有鉴于此，特提出本发明。


技术实现要素：

7.本发明的第一目的在于提供一种仿生型骨膜，以解决上述问题中的至少一种。
8.本发明的第二目的在于提供一种仿生型骨膜的制备方法，该方法简单方便。
9.本发明的第三目的在于提供一种仿生型骨膜在制备骨修复产品中的应用。
10.第一方面，本发明提供了一种仿生型骨膜，包括叠加在一起的外层电纺丝膜和内
层电纺丝膜；
11.所述内层电纺丝膜负载外泌体。
12.作为进一步技术方案，所述内层电纺丝膜的纤维为同轴多层结构；
13.所述纤维的内层包括外泌体和水溶性高分子材料；
14.所述纤维的外层包括生物可降解聚酯和任选的非水溶性高分子材料。
15.作为进一步技术方案，所述外泌体的来源包括人脐静脉内皮细胞或大鼠骨髓间充质干细胞中的至少一种；
16.优选地，所述水溶性高分子材料包括聚乙烯醇、聚氧化乙烯、水溶性壳聚糖或透明质酸钠中的至少一种。
17.作为进一步技术方案，所述外层电纺丝膜包括生物可降解聚酯和任选的非水溶性高分子材料。
18.作为进一步技术方案，所述生物可降解聚酯包括pcl、pu、pla、plga或plla中的至少一种；
19.优选地，所述非水溶性高分子材料包括胶原、明胶或壳聚糖中的至少一种。
20.第二方面，本发明提供了一种仿生型骨膜的制备方法，包括如下步骤：
21.a.将纺丝溶液a进行静电纺丝，制备得到外层电纺丝膜；
22.b.将纺丝溶液b和纺丝溶液c进行同轴静电纺丝，制备得到内层电纺丝膜；所述纺丝溶液b和纺丝溶液c分别对应所述内层电纺丝膜的纤维的外层和内层；
23.c.将至少一层外层电纺丝膜和至少一层内层电纺丝膜叠加在一起，制备得到仿生型骨膜；
24.所述纺丝溶液a为含有0.01～0.2g/ml的生物可降解聚酯和任选的0.001～0.05g/ml非水溶性高分子材料；
25.所述纺丝溶液b为含有0.01～0.2g/ml的生物可降解聚酯和任选的0.001～0.08g/ml非水溶性高分子材料；
26.所述纺丝溶液c为含有外泌体和0.01～0.1g/ml水溶性高分子材料。
27.作为进一步技术方案，所述纺丝溶液a为含有0.04g/ml的生物可降解聚酯和0.01g/ml非水溶性高分子材料；
28.所述纺丝溶液b为含有0.035g/ml的生物可降解聚酯和0.015g/ml非水溶性高分子材料；
29.所述纺丝溶液c为含有外泌体和0.05g/ml水溶性高分子材料；
30.所述纺丝溶液a和纺丝溶液b的溶剂各自独立的包括六氟异丙醇、三氟乙醇、n,n-二甲基甲酰胺或三氯甲烷中的至少一种；
31.所述纺丝溶液c的溶剂包括水。
32.作为进一步技术方案，a步骤中，纺丝的操作参数至少满足如下一种：纺丝电压为15～30kv、接收距离为7～15cm、注射速度为0.3～1.5ml/h、纺丝时长为1～6h；
33.优选地，b步骤中，纺丝的操作参数至少满足如下一种：20～30kv，接收距离为7～15cm、纺丝溶液b注射速度为0.5～1.5ml/h、纺丝溶液c注射速度为0.1～0.3ml/h、纺丝时长为1～10h。
34.作为进一步技术方案，还包括对外层电纺丝膜和内层电纺丝膜杀菌的步骤；
35.所述杀菌的方法包括紫外照射、钴60照射或环氧乙烷灭菌中的至少一种。
36.第三方面，本发明提供了一种仿生型骨膜在制备骨修复产品中的应用。
37.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
38.本发明提供的仿生型骨膜包括叠加在一起的外层电纺丝膜和内层电纺丝膜，内层电纺丝膜负载外泌体。其中外层电纺丝膜用于模拟骨膜的纤维层，内层电纺丝膜负载外泌体，用于模拟骨膜的生发层。本发明将外层电纺丝膜和负载外泌体的内层电纺丝膜相结合，充分发挥二者的配合作用，该仿生型骨膜不但能够模拟天然骨膜的纤维结构，而且能够同时发挥骨传导和骨诱导作用，达到结构与功能均仿生的效果。
附图说明
39.为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
40.图1为电纺丝膜示意图；
41.图2为不同时间点各组的骨体积分数；
42.图3为不同时间点各组缺损区域的骨密度值。
具体实施方式
43.下面将结合实施方式和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
44.第一方面，本发明提供了一种仿生型骨膜，包括叠加在一起的外层电纺丝膜和内层电纺丝膜；
45.所述内层电纺丝膜负载外泌体。
46.本发明中，外层电纺丝膜和内层电纺丝膜为采用电纺丝技术制备得到的电纺丝膜。电纺丝膜示意图如图1所示，图1中，
①
外层电纺膜；
②
内层电纺膜；
③
内层电纺膜纤维结构(内含小颗粒为外泌体)；
①
和
②
可分别为一层或多层叠加。
47.经发明人研究发现，外泌体在体内和体外促进成骨。同时，外泌体还可作为天然纳米级载体，递送药物或生长因子，达到促进缺损骨修复的作用。因此，我们本次设计制备了一种载外泌体的双层或多层纤维膜结构，在模拟天然骨膜纤维结构的基础上，添加具有促进骨再生功能的外泌体，以达到促进缺损部位骨重建的目的。
48.本发明提供的仿生型骨膜，其外层电纺丝膜用于模拟骨膜的纤维层，内层电纺丝膜负载外泌体，用于模拟骨膜的生发层。本发明将外层电纺丝膜和负载外泌体的内层电纺丝膜相结合，充分发挥二者的配合作用，该仿生型骨膜不但能够模拟天然骨膜的纤维结构，而且能够同时发挥骨传导和骨诱导作用，达到结构与功能均仿生的效果。
49.在一些优选的实施方式中，所述内层电纺丝膜的纤维为同轴多层结构；
50.所述纤维的内层包括外泌体和水溶性高分子材料；
51.所述纤维的外层包括生物可降解聚酯和任选的非水溶性高分子材料。
52.本发明中，采用可降解聚酯结合水溶性高分子制备内层膜，将外泌体负载于内层电纺丝膜的纤维的内部，该结构有利于内层电纺丝膜中外泌体的缓释和功能的发挥，使得仿生型骨膜在发挥骨传导作用的同时，还具有促进骨再生的功效。
53.需要说明的是，本发明中，“任选的”是指可以含有，也可以不含有。
54.在一些优选的实施方式中，所述外泌体的来源包括但不限于人脐静脉内皮细胞、大鼠骨髓间充质干细胞，例如还可以为人脂肪干细胞、人诱导多能干细胞、间充质干细胞和牙龈干细胞等。
55.优选地，所述水溶性高分子材料包括但不限于聚乙烯醇、聚氧化乙烯、水溶性壳聚糖或透明质酸钠，或者本领域所熟知的其他水溶性高分子材料。
56.在一些优选的实施方式中，所述外层电纺丝膜包括生物可降解聚酯和任选的非水溶性高分子材料。
57.本发明中，采用可降解聚酯结合非水溶性高分子材料制备外层膜，可阻止非骨性细胞的侵入，同时引导骨细胞迁移到骨缺损位置。
58.在一些优选的实施方式中，所述生物可降解聚酯包括但不限于pcl、pu、pla、plga或plla中的至少一种；
59.优选地，所述非水溶性高分子材料包括胶原、明胶或壳聚糖中的至少一种。
60.第二方面，本发明提供了一种仿生型骨膜的制备方法，包括如下步骤：
61.a.将纺丝溶液a进行静电纺丝，制备得到外层电纺丝膜；
62.b.将纺丝溶液b和纺丝溶液c进行同轴静电纺丝，制备得到内层电纺丝膜；所述纺丝溶液b和纺丝溶液c分别对应所述内层电纺丝膜的纤维的外层和内层；
63.c.将至少一层外层电纺丝膜和至少一层内层电纺丝膜叠加在一起，制备得到仿生型骨膜；
64.所述纺丝溶液a含有生物可降解聚酯和任选的非水溶性高分子材料，其中，生物可降解聚酯的浓度例如可以为，但不限于0.01g/ml、0.02g/ml、0.04g/ml、0.06g/ml、0.08g/ml、0.1g/ml或0.2g/ml，优选为0.04g/ml；非水溶性高分子材料的浓度例如可以为，但不限于0.001g/ml、0.005/ml、0.01g/ml、0.02g/ml、0.03g/ml、0.04g/ml或0.05g/ml，优选为0.01g/ml。
65.所述纺丝溶液b含有生物可降解聚酯任选的非水溶性高分子材料，其中，生物可降解聚酯的浓度例如可以为，但不限于0.01g/ml、0.02g/ml、0.04g/ml、0.06g/ml、0.08g/ml、0.1g/ml或0.2g/ml，优选为0.035g/ml；非水溶性高分子材料的浓度例如可以为，但不限于0.001g/ml、0.005/ml、0.01g/ml、0.02g/ml、0.03g/ml、0.04g/ml、0.05g/ml、0.06g/ml、0.07g/ml或0.08g/ml，优选为0.015g/ml。
66.所述纺丝溶液c含有外泌体和水溶性高分子材料，其中，外泌体的量根据需要进行选择；水溶性高分子材料的浓度为0.01g/ml、0.02g/ml、0.04g/ml、0.06g/ml、0.08g/ml或0.1g/ml，优选为0.05g/ml。
67.所述纺丝溶液a和纺丝溶液b的溶剂各自独立的包括但不限于六氟异丙醇、三氟乙
醇、n,n-二甲基甲酰胺或三氯甲烷，或者本领域技术人员所熟知的其他有机溶剂。
68.所述纺丝溶液c的溶剂包括水。
69.本发明提供的仿生型骨膜的制备方法简单方便，成本低，可制备得到具有不同纤维孔径、同时负载不同量外泌体的仿生型骨膜，用于骨膜结构与功能双重仿生。
70.在一些优选的实施方式中，a步骤中，纺丝的操作参数至少满足如下一种：纺丝电压为15～30kv、接收距离为7～15cm、注射速度为0.3～1.5ml/h、纺丝时长为1～6h；
71.优选地，b步骤中，纺丝的操作参数至少满足如下一种：20～30kv，接收距离为7～15cm、纺丝溶液b注射速度为0.5～1.5ml/h、纺丝溶液c注射速度为0.1～0.3ml/h、纺丝时长为1～10h。
72.通过对外层电纺膜和内层电纺膜纺丝工艺的进一步优化和调整，提高仿生型骨膜对于骨膜的修复效果。
73.在一些优选的实施方式中，还包括对外层电纺丝膜和内层电纺丝膜杀菌的步骤，通过杀菌，提高仿生型骨膜的安全性。
74.所述杀菌的方法包括但不限于紫外照射、钴60照射或环氧乙烷灭菌，或者本领域技术人员所熟知的其他杀菌方法。
75.第三方面，本发明提供了一种仿生型骨膜在制备骨修复产品中的应用。
76.本发明提供的仿生型骨膜不但能够模拟天然骨膜的纤维结构，而且能够同时发挥骨传导和骨诱导作用，达到结构与功能均仿生的效果，因此能够用于制备骨修复产品。
77.下面通过具体的实施例和对比例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
78.实施例1
79.(一)外层电纺膜制备方案
80.制备过程：(1)用移液器吸取20ml六氟异丙醇分别加入两个50ml具塞锥形瓶中(即每瓶10ml)，标记为溶剂1和溶剂2；(2)称取1.25g plga，加入溶剂1中；称取1g胶原，加入溶剂2中；将2个溶液体系放在磁力搅拌器上搅拌6h使其完全溶解；(3)分别取8ml plga溶液和2ml胶原溶液加入新的50ml锥形瓶中，在磁力搅拌器上搅拌2h使其混合成均质纺丝溶液；(4)使用5ml注射器吸取5ml制备好的纺丝溶液，并将注射器、连通管和喷头安装在仪器的正确位置上，将纺丝参数调节电压为20kv，接收距离为15cm，注射速度为1.0ml/h，连续纺丝6h后停止。(5)将电纺膜根据实际需求进行裁剪，利用紫外照射灭菌后备用。
81.(二)外泌体提取方案
82.将不同来源于人脐静脉内皮细胞接种于添加10％胎牛血清和1％抗生素的相应培养基中培养。待细胞达到70％～80％融合后，将培养基更换为5％无外泌体血清培养基，继续培养48h。到达预定时间点后，收集细胞上清液进行差速超速离心，以提取外泌体。
83.提取步骤：(1)300g，4℃离心15min，以去除死细胞；(2)3000g，4℃离心15min，以去除细胞碎片；(3)10000g，4℃离心70min，然后再0.22μm滤器过滤，以去除其他大细胞外囊泡；(4)120000g，4℃离心120min，去除上清，沉淀即为外泌体。取适量pbs或生理盐水重悬外泌体，置于-80℃冰箱保存备用。使用前采用bca蛋白浓度试剂盒检测外泌体浓度。
84.(三)负载外泌体的核壳结构内层电纺膜制备方案
85.制备过程：(1)用移液器吸取20ml六氟异丙醇分别加入两个50ml具塞锥形瓶中(即
每瓶10ml)，标记为溶剂1和溶剂2；(2)称取1g plga加入溶剂1中，称取1g明胶加入溶剂2中，在磁力搅拌器上搅拌4h使其完全溶解；(3)取7ml plga溶液和3ml明胶溶液加入一个新的50ml锥形瓶中，在磁力搅拌器上搅拌2h使其混合成均质壳层纺丝溶液；(4)称取0.3g pva，加入5ml去离子水中，于90℃水浴中溶解约2h；(5)取200μl外泌体溶液和1ml pva溶液，加入一个50ml锥形瓶中，在磁力搅拌器上搅拌2h使其混合成均质核层纺丝溶液；(6)分别使用5ml注射器吸取5ml壳纺丝溶液和2ml核纺丝溶液，并将注射器、连通管和喷头安装在仪器的正确位置上，将纺丝参数调节电压为24kv，接收距离为15cm，壳层注射速度为0.8ml/h，核层注射速度为0.1ml/h，连续纺丝5h后停止。(7)将电纺膜根据实际需求进行裁剪，利用紫外照射灭菌后备用。
86.(四)仿生型骨膜的制备方案
87.将一层外层电纺膜和一层内层电纺膜叠加在一起，制备得到仿生型骨膜。
88.实施例2
89.(一)外层电纺膜制备方案
90.与实施例1的区别在于：
91.纺丝溶液为含有0.01g/ml的pcl和0.05g/ml壳聚糖的三氟乙醇溶液；
92.纺丝工艺为：使用5ml注射器吸取5ml制备好的纺丝溶液，并将注射器、连通管和喷头安装在仪器的正确位置上，将纺丝参数调节电压为15kv，接收距离为15cm，注射速度为0.3ml/h，连续纺丝2h后停止。将电纺膜根据实际需求进行裁剪，利用紫外照射灭菌后备用。
93.(二)外泌体提取方案
94.实验步骤与实施例1相同，外泌体来源于大鼠骨髓间充质干细胞。
95.(三)负载外泌体的核壳结构内层电纺膜制备方案
96.与实施例1的区别在于：
97.壳层纺丝溶液为含有0.01g/ml的pla和0.08g/ml胶原的三氟乙醇溶液。
98.核层纺丝溶液为含有外泌体和0.01g/ml聚氧化乙烯。
99.纺丝工艺为：分别使用5ml注射器吸取5ml壳纺丝溶液和2ml核纺丝溶液，并将注射器、连通管和喷头安装在仪器的正确位置上，将纺丝参数调节电压为20kv，接收距离为15cm，壳层注射速度为0.5ml/h，核层注射速度为0.3ml/h，连续纺丝1h后停止。将电纺膜根据实际需求进行裁剪，利用紫外照射灭菌后备用。
100.(四)仿生型骨膜的制备方案
101.将二层外层电纺膜和二层内层电纺膜叠加在一起，制备得到仿生型骨膜。
102.实施例3
103.(一)外层电纺膜制备方案
104.与实施例1的区别在于：
105.纺丝溶液为含有0.2g/ml plla的n,n-二甲基甲酰胺溶液；
106.纺丝工艺为：使用5ml注射器吸取5ml制备好的纺丝溶液，并将注射器、连通管和喷头安装在仪器的正确位置上，将纺丝参数调节电压为30kv，接收距离为7cm，注射速度为1.5ml/h，连续纺丝4h后停止。将电纺膜根据实际需求进行裁剪，利用钴60照射灭菌后备用。
107.(二)外泌体提取方案
108.实验步骤与实施例1相同，外泌体来源于人脂肪干细胞。
109.(三)负载外泌体的核壳结构内层电纺膜制备方案
110.与实施例1的区别在于：
111.壳层纺丝溶液为含有0.2g/ml pu的n,n-二甲基甲酰胺溶液。
112.核层纺丝溶液为含有外泌体和0.1g/ml透明质酸钠。
113.纺丝工艺为：分别使用5ml注射器吸取5ml壳纺丝溶液和2ml核纺丝溶液，并将注射器、连通管和喷头安装在仪器的正确位置上，将纺丝参数调节电压为30kv，接收距离为7cm，壳层注射速度为1.5ml/h，核层注射速度为0.1ml/h，连续纺丝10h后停止。将电纺膜根据实际需求进行裁剪，利用钴60照射灭菌后备用。
114.(四)仿生型骨膜的制备方案
115.将二层外层电纺膜和一层内层电纺膜叠加在一起，制备得到仿生型骨膜。
116.试验例1
117.为了研究仿生骨膜的促骨修复作用，进行如下分组：空白手术组(con)，外层膜组(ext，按实施例1提供的方法制备得到的外层电纺丝膜，厚度与bio组相同)，载外泌体内层膜组(inn，按实施例1提供的方法制备得到的内层电纺丝膜，厚度与bio组相同)，仿生型骨膜组(bio，实施例1提供的仿生型骨膜)。采用大鼠颅骨缺损模型，于术后4周、8周分别取材，比较各组之间的骨再生情况。结果如图2和图3所示。
118.通过图2(图中bv/tv为骨体积分数)、图3可知，与空白手术组相比，植入纤维膜可以促进骨再生；与单层纤维膜相比，本发明的仿生型骨膜具有更显著的促进骨缺损修复的效果。
119.最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

技术特征：
1.一种仿生型骨膜，其特征在于，包括叠加在一起的外层电纺丝膜和内层电纺丝膜；所述内层电纺丝膜负载外泌体。2.根据权利要求1所述的仿生型骨膜，其特征在于，所述内层电纺丝膜的纤维为同轴多层结构；所述纤维的内层包括外泌体和水溶性高分子材料；所述纤维的外层包括生物可降解聚酯和任选的非水溶性高分子材料。3.根据权利要求2所述的仿生型骨膜，其特征在于，所述外泌体的来源包括人脐静脉内皮细胞或大鼠骨髓间充质干细胞中的至少一种；优选地，所述水溶性高分子材料包括聚乙烯醇、聚氧化乙烯、水溶性壳聚糖或透明质酸钠中的至少一种。4.根据权利要求1所述的仿生型骨膜，其特征在于，所述外层电纺丝膜包括生物可降解聚酯和任选的非水溶性高分子材料。5.根据权利要求2或4所述的仿生型骨膜，其特征在于，所述生物可降解聚酯包括pcl、pu、pla、plga或plla中的至少一种；优选地，所述非水溶性高分子材料包括胶原、明胶或壳聚糖中的至少一种。6.权利要求1-5任一项所述的仿生型骨膜的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：a.将纺丝溶液a进行静电纺丝，制备得到外层电纺丝膜；b.将纺丝溶液b和纺丝溶液c进行同轴静电纺丝，制备得到内层电纺丝膜；所述纺丝溶液b和纺丝溶液c分别对应所述内层电纺丝膜的纤维的外层和内层；c.将至少一层外层电纺丝膜和至少一层内层电纺丝膜叠加在一起，制备得到仿生型骨膜；所述纺丝溶液a为含有0.01～0.2g/ml的生物可降解聚酯和任选的0.001～0.05g/ml非水溶性高分子材料；所述纺丝溶液b为含有0.01～0.2g/ml的生物可降解聚酯和任选的0.001～0.08g/ml非水溶性高分子材料；所述纺丝溶液c为含有外泌体和0.01～0.1g/ml水溶性高分子材料。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述纺丝溶液a为含有0.04g/ml的生物可降解聚酯和0.01g/ml非水溶性高分子材料；所述纺丝溶液b为含有0.035g/ml的生物可降解聚酯和0.015g/ml非水溶性高分子材料；所述纺丝溶液c为含有外泌体和0.05g/ml水溶性高分子材料；所述纺丝溶液a和纺丝溶液b的溶剂各自独立的包括六氟异丙醇、三氟乙醇、n,n-二甲基甲酰胺或三氯甲烷中的至少一种；所述纺丝溶液c的溶剂包括水。8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，a步骤中，纺丝的操作参数至少满足如下一种：纺丝电压为15～30kv、接收距离为7～15cm、注射速度为0.3～1.5ml/h、纺丝时长为1～6h；优选地，b步骤中，纺丝的操作参数至少满足如下一种：20～30kv，接收距离为7～15cm、纺丝溶液b注射速度为0.5～1.5ml/h、纺丝溶液c注射速度为0.1～0.3ml/h、纺丝时长为1～
10h。9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，还包括对外层电纺丝膜和内层电纺丝膜杀菌的步骤；所述杀菌的方法包括紫外照射、钴60照射或环氧乙烷灭菌中的至少一种。10.权利要求1-5任一项所述的仿生型骨膜或采用权利要求6-9任一项所述的制备方法制备得到的仿生型骨膜在制备骨修复产品中的应用。

技术总结
本发明提供了一种仿生型骨膜及其制备方法和应用，涉及生物材料技术领域。本发明提供的仿生型骨膜包括叠加在一起的外层电纺丝膜和内层电纺丝膜，内层电纺丝膜负载外泌体。其中外层电纺丝膜用于模拟骨膜的纤维层，内层电纺丝膜负载外泌体，用于模拟骨膜的生发层。本发明将外层电纺丝膜和负载外泌体的内层电纺丝膜相结合，充分发挥二者的配合作用，该仿生型骨膜不但能够模拟天然骨膜的纤维结构，而且能够同时发挥骨传导和骨诱导作用，达到结构与功能均仿生的效果。功能均仿生的效果。功能均仿生的效果。


技术研发人员：石锐 张静爽
受保护的技术使用者：北京市创伤骨科研究所
技术研发日：2022.03.17
技术公布日：2022/5/25