1,4-二氢-1,6-萘啶化合物的晶型制备以及合成方法
发明领域
1.本发明涉及1,4-二氢-1,6-萘啶化合物(4s)-4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基
ꢀ‑
1,4-二氢-1,6-萘啶-4-氘-3-甲酰胺的晶型、晶型的制备以及上述化合物的合成和纯化方法。更 具体地说,本发明涉及所述的药物活性成分化合物制备的方法、包含其的药物组合物及使用 其改善血管功能的盐皮质激素(mr)受体调节剂,涉及它们潜在地在治疗和/或预防包括心血管 和代谢疾病,例如高血压、心力衰竭、慢性肾脏疾病、糖尿病性肾病、纤维化、内皮功能障 碍和肌肉萎缩等临床病症中的效用。
背景技术:
2.盐皮质激素受体(mr)是类固醇受体家族的一员,它通过调节醛固酮(aldo)对肾钠处理的影 响来调节血压。在过去的十年中,mr在心血管系统中的表达已经变得很清楚,人们对mr在 调节血管功能和促进心血管疾病中的直接作用的理解越来越感兴趣。这种兴趣来自于多项临 床研究,在这些研究中,降低mr激活的药物也会降低心脏病、中风和死亡率的发生率。在血 管平滑肌和内皮细胞中存在功能性的盐皮质激素受体已经被证实,报道的数据支持血管系统 是一个醛酮反应组织,血管mr在调节正常血管功能和促进血管疾病中有一定的作用。体外数 据、体内动物研究和人类数据均表明mr激活在促进血管氧化应激、抑制血管松弛、促进血管 炎症、纤维化和重构方面的作用。mr激活的这些有害血管效应似乎与血压变化无关,与内皮 功能障碍或损伤的存在有协同作用。因此,在有潜在心血管疾病或心血管危险因素的人群中, 血管mr激活可能促进血管老化和动脉粥样硬化,从而促进心脏病发作、中风甚至高血压的病 理生理。进一步探索mr激活有害血管效应的分子机制,将有可能发现新的治疗靶点,以预防 或治疗常见的心血管疾病。临床试验数据已经证明,mr拮抗剂在治疗肾疾病(包括糖尿病肾 病)中也有益效果(国际肾脏期刊(kidney international)2011,79,1051)。高钾血症的风险目前正 限制着mr拮抗剂的使用并且尤其排斥糖尿病患者。新颖、有效和选择性的mr拮抗剂应该可 以扩大在内皮改进和上皮来源的高钾血症之间这种治疗窗口。
3.wo2006012642涉及吡咯类化合物作为mr拮抗剂用于治疗高血压、心力衰竭和类似疾 病。
4.cn103547577涉及并环类化合物作为mr拮抗剂用于治疗肾损伤、心血管疾病如高血压等 疾病。us62018790涉及苯并噁嗪酮酰胺类化合物作为mr拮抗剂用于治疗心血管和代谢疾病 (例如高血压、心力衰竭、慢性肾脏疾病、糖尿病性肾病、糖尿病、眼部脉管系统疾病)。
5.1,4-二氢-1,6-萘啶化合物(4s)-4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6
‑ꢀ
萘啶-4-氘-3-甲酰胺可以作为盐皮质激素受体的非甾体拮抗剂,并且可用作预防和/或治疗心血 管和肾脏疾病例如心力衰竭和糖尿病肾病的药剂。
6.在有机化合物中,许多物质常具有相同的化学组成,在不同的热力学条件(温度、压力、 ph等)下却能形成不同的晶体结构,我们把这一现象称作同质多晶现象。这些不同的
晶型被 称作“多晶型物”。物质不同的多晶型物具有不同的晶格能,由此其在固态时展示出了不同的 化学和物理特性,包括化学稳定性、表观溶解度、溶解速度、熔点等等,这些性质可以直接 影响原料药和制剂的处理和生产,并且会影响原料药和制剂的稳定性、溶解度和生物利用度。 因此有必要制备更合适的晶型。
7.另外,1,4-二氢-1,6-萘啶化合物(4s)-4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二 氢-1,6-萘啶-4-氘-3-甲酰胺及其制备方法记载于公开专利cn113214248a中,其化合物(ix)的合 成是利用3-酮-丁酸甲酯和2-氰基乙醇在nbs的活化条件下反应,产率较低并且产物纯化困 难。化合物氘代醛(xiva)的合成是利用氘代dmf和锂化的碘苯反应后水解反应,合成成本较 高,并且反应温度较低,不利于大规模的工艺合成。(xiva)然后通过金属钯的催化氰基化反 应生成化合物(x)。化合物(ix)和(x)在酸性条件下缩合生成(viia)和(viib)的混合物,然后和化 合物(viii)经过缩合成环反应得到化合物(vi)。(vi)和原乙酸三乙酯反应生成(v),在通过水解 反应得到(iv),然后和氨水缩合胺化得到消旋体(r,s)-(i),此反应再现性差,收率不稳定。最 后通过sfc手性拆分得到化合物(i)。尽管sfc拆分可以得到高手性纯度化合物(i),可是在 gmp条件下sfc设备的购置和生产成本以及操作会带来很大的挑战。也有必要开发操作简 便、更具成本优势的合成路线。原路线具体反应式如下:
8.
技术实现要素:
9.本发明的发明人们在研究现有技术的基础上,开发出了(4s)-4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5
‑ꢀ
乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6-萘啶-4-氘-3-甲酰胺的高效的制备方法,可以提供稳定性好, 手性纯度高的产品,同时研究出了晶型a和晶型b,为以后的剂型研究提供了支持,从而更 有效的治疗心力衰竭和糖尿病肾病相关性疾病,满足不同的临床用药
需求。
10.本发明提供了一种如式(i)所示(4s)-4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二 氢-1,6-萘啶-4-氘-3-甲酰胺的a晶型。
[0011][0012]
本发明所得a晶型其x射线衍射图在2θ角为8.547
°
、11.400
°
、14.060
°
、15.392
°
、19.017
°
、 19.763
°
、22.939
°
、23.904
°
、25.562
°
、26.467
°
处具有峰最大值的主要特征峰。
[0013]
本发明所述的式i所示化合物的a晶型在于dsc吸热转变在254
±
2℃,在加热至150℃过程 中无失重,在255℃以上可能发生分解。
[0014]
进一步的,本发明所述的式i所示化合物a晶型tg/dsc谱图如图2所示。
[0015]
进一步的,本发明所述的式i所示化合物a晶型的红外光吸收图谱的ν
max
在3475.6、 3417.7、3364.7、2990.8、2952.2、2939.6、2229.1、1682.4、1657.2、1607.1、1574.5、1483.1、 1432.2、1324.7、1169.8、1031.3、875.3cm-1
处有峰最大值的主要特征峰。
[0016]
本发明还报道了一种制备式i所示化合物a晶型的方法,包括以下步骤:
[0017]
1)将(4s)-4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6-萘啶-4-氘-3-甲酰 胺与适量的惰性溶剂混合,在20℃-120℃的温度下搅拌;
[0018]
2)滴加适量的良性溶剂,直至固体刚好完全溶解,将溶液冷却至0-30℃,沉淀出a晶 型;
[0019]
3)过滤后,滤饼35土5℃真空干燥。
[0020]
进一步地,所述惰性溶剂包括乙酸异丙酯、正庚烷、环己烷、乙醚、甲基叔丁基醚、水、 甲苯;良性溶剂包括二甲基亚砜、甲醇、丙酮、乙二醇甲醚、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、氯 仿、乙醇、正丙醇、异丙醇、4-甲基-2-戊酮、乙酸乙酯、甲酸乙酯、甲酸丁酯、二氧六环、 乙二醇二甲醚、乙腈。
[0021]
本发明还公开了a晶型化合物制造药物的用途,该药物用于治疗心血管病症和糖尿病肾病 相关性疾病。
[0022]
本发明还提供了一种如式(i)所示(4s)-4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二 氢-1,6-萘啶-4-氘-3-甲酰胺的b晶型。
[0023]
本发明所得b晶型的x射线衍射图在2θ角为85.792
°
、10.273
°
、10.635
°
、11.267
°
、12.048
ꢀ°
、14.834
°
、21.849
°
、22.535
°
、24.171
°
、24.734
°
处具有峰最大值的主要特征峰。
[0024]
本发明所述的式i所示化合物b晶型在于dsc吸热转变在120
±
2℃和252
±
2℃,在加热至 120℃过程中有12.3%的失重,在255℃以上可能发生分解。
[0025]
本发明还公开了一种制备式i所示化合物的b晶型的方法,包括以下步骤:
[0026]
1)将(4s)-4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6-萘
啶-4-氘-3-甲酰胺 与适量的惰性溶剂混合,在20℃-120℃的温度下搅拌;
[0027]
2)滴加适量的良性溶剂,直至固体刚好完全溶解,将溶液冷却至0-30℃,沉淀出a晶型;
[0028]
3)过滤后,滤饼35土5℃真空干燥。
[0029]
进一步地,所述惰性溶剂包括乙酸异丙酯、正庚烷、环己烷、乙醚、甲基叔丁基醚、水、 甲苯;良性溶剂为四氢呋喃。
[0030]
进一步地,上述步骤2中的冷却温度优选0-5℃。
[0031]
本发明还公开了b晶型化合物制造药物的用途,该药物用于治疗心血管病症和糖尿病肾 病相关性疾病。
[0032]
式(i)的化合物及其手性提纯制备方法记载于公开专利cn113214248a中,用sfc的 waters upcc(ca-119)超临界流体色谱,色谱柱为daicelas-3(100*3mm3μm),流动相为超临界二氧化碳和甲醇(0.1%二乙胺)。尽管sfc分离能够得到相对良好的收 率和光学纯度,但是在gmp条件下这种设备的购置成本和操作比较困难。同时伴随高的成 本实现公斤级或吨级的产品生产可行性极低。
[0033]
鉴于以上的问题,本发明还提供了一种改良的方法合成化合物(ix),(x)和(r,s)-(i),使其 便于大规模操作,其中,通过一种分离对映体混合物的替代方案来制备高纯度手性化合物i, 可使用常规的中试设备(搅拌式容器/分离装置)进行操作,并不需要购置额外的特殊装置,克 服了原公开合成路线中的收率低和成本较高,难纯化,不容易大规模生产的缺陷。
[0034]
为解决上述技术问题,本发明提供的制备式(i)化合物的合成方法如下:
[0035][0036]
该合成方法包括以下步骤:
[0037]
1.化合物xi通过硼酸催化的酯交换反应制备化合物ix;
[0038]
2.起始物料通过化合物xiii金属钯的催化氰基化反应得到化合物xiv;
[0039]
3.在化合物xvi的作用下氘代化合物xiv制备化合物x;
[0040]
4.化合物ix和x通过knoevenagel脱水缩合反应得到化合物viia和化合物viib的混合物;
[0041]
5.化合物viia和化合物viib的混合物与化合物viii通过缩合环化反应制备化合物vi;
[0042]
6.化合物vi通过醚化反应得到化合物v;
[0043]
7.化合物v通过水解反应制备化合物iv;
[0044]
8.化合物iv首先在缩合剂cdi的作用下生成羰基咪唑,然后通过和hmds的酰胺化反应再 水解一锅法制备得到化合物(r,s)-i;
[0045]
9.化合物(r,s)-i通过和手性酒石酸二苯甲酸酯反应得到化合物xvii;
[0046]
10.化合物xvii通过加碱中和游离得到化合物i。
[0047]
具体地,在步骤1中,化合物xi和化合物xii在甲苯中与硼酸在外温110℃下反应得到化合 物ix。更具体地,化合物(ix)是重要的起始原料,利用化合物(xi)和(xii)在甲苯(5-8倍体积) 中加入10-20摩尔%的硼酸在110℃(外温,内温100℃)下反应12-15小时,得到化合物ix。此反 应利用硼酸催化的酯交换,副产物少,收率高,产物容易纯化,比较容易放大。
[0048]
具体地,在步骤2中,化合物xiii和六铁氰化钾(20-30摩尔%)及碳酸钠(1摩尔%)在n, n-二甲基甲酰胺(5-8倍体积)中,加入醋酸钯(0.5摩尔%)催化,120℃氮气氛下反应12-15小 时,得到化合物xiv。
[0049]
具体地,在步骤3中,首先化合物xv与原甲酸三乙酯(2.5-3当量)在乙酸(2.5倍体积)和 水(0.5倍体积)的混合溶液中,在室温下反应12-15小时,加入水(10倍体积)和四氟硼铵(1.5 当量)在室温搅拌30-50分钟,得到化合物xvi,如下式所示:
[0050][0051]
然后化合物xvi(2-4摩尔%)和化合物xiv(1当量)在甲苯(10倍体积)和氘代重水(10倍体 积)中与碳酸氢钠(1当量),在100℃(外温,内温85-90℃)氮气氛下反应5-8小时,得到化合 物x。
[0052]
化合物x是化合物i的重要中间体,本路线利用化合物(xiv)在卡宾催化剂(xvi)的作用 下和商购较容易入手的重水反应进行氘代,极大的降低了化合物(x)的和合成成本。并且卡宾 催化剂(xvi)可以利用商购易入手的原料(xv)与原甲酸三乙酯(2.5-3当量)在乙酸(2.5倍体积) 和水(0.5倍体积)的混合溶液中,反应在室温反应12-15小时,加入水(10倍体积)和四氟硼铵 (1.5当量)反应后得到。
[0053]
具体地,在步骤4中,化合物ix和化合物x在异丙醇(8-10倍体积)中与乙酸(10-20摩尔%) 和(10-20摩尔%)哌啶在室温下反应2-3h得到化合物viia和化合物viib的混合物。
[0054]
具体地,在步骤5中,化合物viia和化合物viib的混合物与化合物viii在乙醇溶液(8-10倍 体积)中,在95℃(外温,内温78-82℃)下反应得到化合物vi。
[0055]
具体地,在步骤6中,化合物vi与原乙酸三乙酯(3-5当量)在nmp中,加入浓硫酸(0.5-0.6 当量),在120℃(外温,内温105-110℃)下反应得到化合物v。
[0056]
具体地,在步骤7中,化合物v与氢氧化钠水溶液在thf/水的体积比为2:1的混合物中在 0℃下反应得到化合物iv。
[0057]
具体地,步骤8为一锅法完成,在该步骤中,化合物iv首先与碳酸二咪唑和催化量的 4—(二甲基氨基)吡啶在thf中反应生成羰基咪唑中间体;然后向反应液中加入六甲基二硅烷 生成n-硅烷酰胺;最后水解得到化合物(r,s)-i。
[0058]
更具体地,(r,s)-(i)的原制备方法是利用化合物(iv)在缩合剂hatu作用下与氨反应,此 条件不容易大规模操作并且再现性差,收率不稳定,本发明提供的改良方法是化合物(iv)在 催化量的4-(二甲基氨基)吡啶(0.1-0.2当量)存在下与(1.3-1.4当量)1,1'-二羰基咪唑在thf中 50-60℃下反应2-3小时;然后直接加入六甲基二硅氮烷(3-4当量)在85-90℃(外温,内温70-75℃) 下继续反应3-4小时;最后滴加thf和水的混合溶液在85-90℃(外温,内温70-75℃)下水解反 应1-2小时,(r,s)-(i)会变成白色固体析出,最后通过过滤并用thf和水洗涤后干燥得到纯度 较高的化合物(r,s)-(i)。
[0059]
具体地,在步骤9和步骤10中,通过使用化合物iiia或iiib将化合物(r,s)-i拆分为化合物i 和/或化合物ia。
[0060][0061]
更具体地,本发明通过使用式(iiia)的手性取代的酒石酸二苯甲酸酯
[0062][0063]
对外消旋体式(r,s)-(ii)化合物拆分,在酒精/水混合物中反应以得到式(xvii)非对映体盐,其 中具有s构型的对映体优选形成盐。近乎定量地,非对映体盐(xvii)从溶液中沉淀出,然后 其可例如通过过滤从溶液中分离,而具有r构型的对映体保留在溶液中。
[0064]
或者,以非常相似的方式,通过使外消旋体(r,s)-(ii)与通式(iiib)的酒石酸衍生物反应来 制备通式(xviia)的镜像盐,其中具有r构型的对映体优选形成盐。沉淀的非对映体盐可近乎 定量地分离出,并且在本文中所述s-对映体保留在溶液中。
[0065][0066]
化合物i具有s构型,s,s-构型的酒石酸衍生物优选用于外消旋体拆分,其和外消旋体(r,s)-(ii)混合反应优先形成s-对映体的非对映体盐。
[0067]
更具体地,手性取代的酒石酸二苯甲酸酯对于外消旋体(r,s)-(ii)的拆分,特别优选 0.50-0.55当量。
[0068]
更具体地,式(xvii)和/或式(xviia)非对映体盐的形成在由水和与水混溶的有机溶剂组成 的溶剂混合物中进行。
[0069]
更具体地,非对映体盐的形成所使用合适的有机溶剂为例如乙醇、甲醇、异丙醇、1-丙醇、 异丁醇、1-戊醇或丙酮;然而,优选使用乙醇。所述溶剂还可以可商购获得的变性形式使用, 例如通常用于乙醇的变性剂,例如甲苯、己烷,庚烷。
[0070]
更具体地,式(xvii)和/或式(xviia)非对映体盐可以通过过滤的形式分离,然后水和与水 混溶的有机溶剂组成的溶剂混合物中通过加入用碱处理非对映体盐并除去溶剂,分离提纯得 到相应的式(i)或式(ia)高纯度手性化合物。
[0071]
更具体地,处理非对映体盐所使用的碱为无机碱。优选的碱为氢氧化钠水溶液、氢氧化 锂、氢氧化钾、碳酸铵、碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、碳酸氢铵、碳酸氢钠、碳酸氢钾、磷酸 钠、磷酸钾、磷酸铵。特别优选磷酸钠或磷酸钾。
[0072]
在其它方面中,本发明还提供药物组合物,其包含药学上可接受的载体和本发明的化合 物;治疗或预防病症或病况的方法,所述病症或病况选自心血管和代谢疾病,例如高血压、 心力衰竭、慢性肾脏疾病、糖尿病性肾病、纤维化、内皮功能障碍和肌肉萎缩等临床病症中 的效用,以及涉及用于它们潜在的治疗用途的方法。
[0073]
本发明中提供的式(i)所示化合物(4s)-4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4
‑ꢀ
二氢-1,6-萘啶-4-氘-3-甲酰胺及其具体的a晶型和b晶型可以结合独立地选自以下一种或多种 其它的药剂组合使用,用于治疗心血管、代谢以及肾脏疾病:心脏治疗药、抗高血压药、利 尿药、外周血管扩张药、调脂药、抗糖尿病药、抗炎药、或抗凝血剂。
[0074]
上述心脏治疗药、抗高血压药、利尿药、外周血管扩张药、调脂药、抗糖尿病药、抗炎 药、或抗凝血剂包括但不限于洋地黄糖苷、抗心律失常剂(如胺碘酮、溴苄铵、乙胺碘呋酮)、 钙通道拮抗剂(如氨氯地平、非洛地平、硝苯地平缓释片、硝苯地平控释片、拉西地平等)、 ace抑制剂(如卡托普利,依那普利、雷米普利、培哚普利、贝那普利、福辛普利等)、血管 紧张素ii受体阻断剂(如氯沙坦、缬沙坦、厄贝沙坦、替米沙坦、奥美沙坦、坎地沙坦、奥美 沙坦酯)、内皮素受体阻断剂、β-阻断剂(如心得安,氨酰心安,美多心安,心得平,心得舒, 心得静等)、噻嗪类利尿剂(如氯噻嗪、氢氯噻嗪(双氢克尿塞)、环戊噻嗪、苄氟噻嗪及氯噻酮 等)、髓袢利尿剂(如呋塞米、依他尼酸、布美他尼、吡咯他尼,托拉塞米等)、胆固醇合成抑 制剂如他汀类(例如瑞舒伐他汀、胆固醇吸收抑制剂、胆固醇酯转移蛋白(cetp)抑
制剂、抗糖 尿病药物如胰岛素和类似物、glp-1类似物、磺胺类药物、二肽基肽酶4(dpp4)抑制剂、噻 唑烷二酮类、sglt-2抑制剂、二甲双胍和抗炎药物如nsaid和ccr2拮抗剂、低分子肝素 钙,依诺肝素,那曲肝素,低分子肝素钠,达肝素钠、凝血酶抑制剂和xa因子抑制剂(如利 伐沙班、阿哌沙班、达比加群酯)以及血小板聚集抑制剂(如替格瑞洛、依替巴肽、阿司匹林、 双嘧达莫、氯吡格雷)。
[0075]
含有本发明的化合物i或其具体的a晶型和b晶型的药物组合物可用于治疗和/或预防一种 或多种类固醇核受体介导或受它影响,或与类固醇核受体活性相关的疾病或病症,如高血压、 心力衰竭、慢性肾脏疾病、糖尿病性肾病、纤维化、内皮功能障碍和肌肉萎缩等临床病症。
[0076]
本发明化合物i、其a晶型和b晶型、其药学上可接受的盐的纯净形式或适当药物组合物 可通过任何可接受的投予起类似效用的药剂的模式投予。本发明药物组合物可通过将本发明 化合物与适当药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂组合而制成,并且可调配成固体、半固 体、液体或气体形式制剂,例如片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、溶液、注射剂、吸入剂、凝胶、 微球体和气雾剂。投予所述药物组合物的典型途径包括(但不限于)经口、局部、透皮、吸入、 不经肠、舌下、颊、直肠、和鼻内投药。如本文中所使用,术语不经肠包括皮下注射、静脉 内、肌内、胸骨内注射或输注技术。本发明药物组合物经调配,以允许在对患者投予组合物 后,其中所含活性成分是生物可利用的。将被投予个体或患者的组合物里一种或多种剂量单 位的形式,其中,例如片剂可为单剂量单位,而含气雾剂形式的本发明化合物的容器可容纳 多个剂量单位。制备所述剂型的实际方法为所属领域技术人员已知,或将为其所知悉。欲投 予的组合物在任何情况下都将含有治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐,以便 根据本发明的示教治疗所关注的疾病或病状。
[0077]
本发明药物组合物可呈固体或液体形式。一方面,载剂为微粒,以致组合物例如呈片剂 或散剂形式。载剂可为液体,而组合物为例如口服糖浆、可注射液体,或适用于例如吸入投 药的气雾剂。当欲口服时,药物组合物优选自固体或液体形式,其中半固体、半液体、悬浮 液和凝胶形式包括在本文中视为固体或液体的形式中。对于口服固体组合物,可将药物组合 物调配成散剂、颗粒剂、压缩片剂、丸剂、胶囊、咀嚼片、粉片等形式。此类固体组合物通 常含有一种或多种惰性稀释剂或可食用载剂。此外,还可存在一种或多种以下物质粘合剂, 例如羧甲基纤维素、乙基纤维素、微晶纤维素、黄瓦胶或明胶;赋形剂,例如淀粉、乳糖或 糊精;崩解剂,例如海藻酸、海藻酸纳、primogel、玉米淀粉等;润滑剂,例如硬脂酸镁或 氢化植物油(sterotex);助流剂,例如胶状二氧化硅;甜味剂,例如蔗糖或糖精;调味剂,例 如薄荷、水杨酸甲酌或甜橙调味剂;和着色剂。
[0078]
药物组合物为胶囊形式,例如为明胶胶囊时,除上述类型的物质以外,其还可含有液体 载剂,例如聚乙二醇或植物油。药物组合物可为液体形式,例如酊剂、糖浆、溶液、乳液或 悬浮液。此液体可口服,或通过注射递送,作为两个实例。当欲口服时,优选组合物除含有 本发明化合物以外,还含有甜味剂、防腐剂、染料/着色剂和风味增强剂中的一种或多种。 在打算通过注射投予的组合物中,可包括表面活性剂、防腐剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、 缓冲剂、稳定剂和等渗剂中的一种或多种。优选口服和肠胃外给药,尤其是口服给药。
附图说明
[0079]
图1:本发明a晶型化合物xrpd谱图;
[0080]
图2:本发明a晶型化合物tg/dsc谱图;
[0081]
图3:本发明a晶型化合物红外光谱谱图;
[0082]
图4:本发明b晶型化合物xrpd谱图;
[0083]
图5:本发明b晶型化合物tg/dsc谱图;
[0084]
图6:化合物(i)单晶分子球棍模型;
[0085]
图7:化合物(i)晶胞球棍模型;
[0086]
图8.本发明a晶型化合物在(a)偏光片下和(b)无偏光片的光学显微镜图像;
[0087]
图9:本发明化合物a晶型在醋酸脱氧皮质酮/氯化钠负荷诱导的wky大鼠肾病模型药效实 验动物尿液na
+
,k
+
变化;
[0088]
图10:本发明化合物a晶型醋酸脱氧皮质酮/氯化钠负荷诱导的wky大鼠肾病模型药效实 验中的苏木素伊红染色(he)肾小球硬化及肾小管病变组织切片评分结果。
具体实施方式
[0089]
下面通过实施例的方式进一步说明本发明,提供本技术中所述的合成实施例和生物学实施 例以说明本文所提供的化合物、药物组合物、以及方法。以下实施例仅用于对本发明进行示 例性说明,但不用于限制本发明,在本发明保护范围内所做的修改、改变、变型等都在本发 明的保护范围内。
[0090]
本文所提供的化合物可以使用下文所阐述的特定合成方案的将为本领域技术人员公知的 操作方案,由容易获得的起始物质来制备。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,按照 常规方法和条件,可以由本领域技术人员通过常规的优化程序来确定。
[0091]
下述实施例中,缩写解释:
[0092]
pe:石油醚;
[0093]
ea:乙酸乙酯;
[0094]
dmf:n,n-二甲基甲酰胺;
[0095]
dcm:二氯甲烷;
[0096]
thf:四氢呋喃
[0097]
meoh:甲醇
[0098]
k4fe(cn)6:六铁氰化钾
[0099]
pd(oac)2:醋酸钯
[0100]
hmds:六甲基二硅氮烷
[0101]
cdi:1,1
’‑
羰基二咪唑
[0102]
dmap:4-(二甲基氨基)吡啶
[0103]
cdcl3:氘代氯仿dea:二乙胺
[0104]
piperidine:哌啶
[0105]
ipa:异丙醇
[0106]
na3po4:磷酸钠
[0107]
sfc:超临界流体色谱
[0108]
ms:质谱
[0109]
esi:电喷雾电离
[0110]1h nmr:核磁共振氢谱
[0111]
tlc:薄层层析
[0112]
chiral hplc:手性高效液相色谱
[0113]
prep-hplc:高压制备液相色谱
[0114]
lc-ms:液相色谱-质谱联用
[0115]
rf:比移值;
[0116]
min:分钟
[0117]
g;克
[0118]
mg:毫克
[0119]
rt:室温
[0120]
mol:摩尔
[0121]
mmol:毫摩尔
[0122]
ml:毫升
[0123]
m:摩尔/升
[0124]
实施例1:(s)-4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6-二氮杂萘-4-氘-3-甲酰胺(化合物i)的制备:
[0125][0126]
化合物(xvi)的制备:将化合物(xv)(30.0g,78.9mmol)、原甲酸三乙酯(29.1g,
196.6mmol) 溶于乙酸(78ml)和水(18ml)的混合溶液中,反应在室温反应12小时。lcms监测反应有70% 的产物生成,还有30%的原料。反应完成后,将反应液加入到水(300ml)中,加入四氟硼铵 (9.6g,109mmol)室温搅拌30分钟,过滤,用水(300ml x 4)淋洗滤饼,得到滤饼15g。母液 用二氯甲烷(200ml x 3)萃取,合并有机相并用无水硫酸钠干燥,减压浓缩旋干后得到粗产物 (10g)。合并粗产物用甲醇:石油醚(pe:ea=5:1)(500ml)打浆。得到干净的化合物(xvi)(15g, 48.6%yield)白色固体。ms(esi):m/z 391.32[m]
+
。
[0127]
化合物(ix)的制备:将化合物(xi)(2500g,21.55mol)、化合物(xii)(1530g,21.55mol) 和硼酸(267.2g,4.31mol)溶于15l甲苯中,反应在110℃(外温,内温100℃)下反应12小时。 tlc监测hnn4-1剩余但有产物完全。反应完成后,将反应体系降至40~60℃后,用乙酸乙 酯(2l x 2)萃取水+相,合并有机相并用无水硫酸钠干燥。减压浓缩旋干得到粗产物。粗产物 经柱层析(pe:ea=5:1
–
2:1)得到化合物(ix)(2100g,62%yield)为白色固体。ms(esi):m/z215.97[m+1]+。
[0128]
化合物(xiv)的制备:将化合物(xiii)(500g,2325mmol)、六铁氰化钾(222.7g,604.5mmol) 及碳酸钠(2325mmol)加入到10l四口反应瓶中,向反应瓶中加入4l dmf(25l桶装)中,室 温搅拌,氮气置换三次,随后向反应液加入醋酸钯(2.61g,11.63mmol),氮气置换三次,反 应在120℃氮气氛下反应12小时。tlc(pe:ea=2:1)监测反应完全。三批合并处理反应完 成后,将反应体系降至40~60℃后,将反应液加入到水(12l)中,室温搅拌30分钟,垫硅藻土 过滤,用水(2l x 4)淋洗滤饼。将滤饼加到用乙酸乙酯(20l)中,室温搅拌30分钟,滤饼搅拌 液继续过滤,用乙酸乙酯(2l x 2)淋洗,合并有机相并用无水硫酸钠干燥,减压浓缩旋干后得 到粗产物(900g)。滤液分开收集,滤液(20l)用乙酸乙酯萃取(10l x 3),饱和食盐水(5l)洗涤, 合并有机相并用无水硫酸钠干燥,减压浓缩旋干后得到粗产物(450g,粗品)。合并粗产物用甲 醇:石油醚(meoh:pe=1:2)(1.5l)打浆。得到干净的产物(750g)。母液经柱层析(pe:ea=5:1) 又得到干净的产物(225g)。总计得到化合物(xiv)(975g,收率87%)为白色固体。ms(esi):m/z163.05[m+1]+;1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ3.98(s,3h),7.52-7.54(m,1h),7.79-7.83(m,2 h),9.58(s,1h)。
[0129]
化合物(x)的制备:将化合物(xiv)(550g,3416mmol)、碳酸氢钠(287g,3416mmol)加 入到20l四口反应瓶中,向反应瓶中加入重水(5500ml)和甲苯(5500ml)的混合溶液,室温 搅拌,氮气置换三次,随后向反应液加入化合物(xvi)(53.4g,136.6mmol),氮气置换三次, 反应在100℃(外温,内温85-90℃)氮气氛下反应5小时。hnmr监测反应完全。反应完成后, 将反应体系降至40~60℃后,反应液分液,用二氯甲烷(2l x 2)萃取重水相,合并有机相并用 无水硫酸钠干燥。减压浓缩将有机相旋至甲苯剩1.5l,向甲苯相中加入石油醚(3l)。降温至
ꢀ‑
60℃,溶液在-60℃下搅拌30分钟。过滤,滤饼烘干得到产物(400g)。母液经柱层析(pe:ea =2:1)又得到干净的产物(30g),总计得到固体产物(430g,78%)。ms(esi):m/z 163.05[m+1]+。
[0130]
化合物(viia)和(viib)的制备:将化合物(x)(200g,1235mmol)、哌啶(20.7g,246.9mmol) 和乙酸(14.8g,246.9mmol)加入到5l四口反应瓶中,随后加入异丙醇(1200ml)溶液,室温 搅拌,向反应瓶中加入化合物(ix)(195.2g,1259.3mmol)的异丙醇(400ml)溶液,反应在室温 下反应2小时。tlc(pe:ea=2:1)监测反应完全。反应完成后,用干冰乙醇浴将反应体系降至
ꢀ‑
60℃,向反应液中加入石油醚(2l),反应在-60℃下搅拌30分钟。减压过
滤,分别用用石油 醚(1l)、冷的异丙醇(1l)和石油醚(500ml x 3)淋洗反应液,滤饼烘干得到得到化合物(viia) 和(viib)混合物为黄色固体(320g,87%yield)。ms(esi):m/z 300.10[m+1]+。
[0131]
化合物(vi)的制备:将化合物(viia)和(viib)混合物(600g,2007mmol)加入异丙醇(50ml) 的搅拌溶液中,加入化合物(viii)4-氨基-5-甲基吡啶-2-醇(248.9g,2007mmol)加入到10l四 口反应瓶中,向反应瓶中加入乙醇(6l)溶液,室温搅拌,氮气保护,反应在95℃(外温,内温 78-82℃)氮气氛下反应12小时。lcms、tlc监测反应完全反应完成后,将反应体系降至40~60℃后,用干冰乙醇浴将反应体系降至-60℃,向反应液中加入石油醚(5l),反应在-60℃ 下搅拌30分钟。减压过滤,分别用用冷的乙醇(1l x 2)和石油醚(2l x 2)淋洗反应液,滤饼 烘干得到产物(500g)。母液减压浓缩旋干,经柱层析纯化得到产物(120g),合并得到固体化 合物(vi)为白色固体(620g,产率76%)。lcms:m/z 406.1[m+h]
+
。
[0132]
化合物(v)的制备:将化合物(vi)(300g,740.7mmol)、原乙酸三乙酯(600g,3704mmol) 加入到5l四口反应瓶中,向反应瓶中加入nmp(1500ml)溶液,室温搅拌,氮气保护,随后 加入h2so4(45ml)反应在120℃(外温,内温105-110℃)下反应2小时。lcms、tlc监测反 应完全。反应完成后,将反应体系降至40~60℃后,0℃将向反应液中加入na2co3(135.0g) 的饱和溶液,反应在0℃下搅拌30分钟。减压过滤,分别用用冷的水(500mlx 2)和石油醚(500 ml x 2)淋洗反应液,滤饼烘干得到粗产物(255g),产物经甲醇打浆得到纯的化合物(v)(220 g)。母液用乙酸乙酯(3l x 2)萃取,有机相经饱和食盐水(500ml)洗涤,无水硫酸钠干燥,减 压浓缩旋干,粗品经甲醇打浆又得到纯产品(30.0g)。合并得到化合物(v)为白色固体(250g, 收率78%)。lcms:m/z 381.1[m+h]
+
。
[0133]
化合物(iv)的制备:将化合物(v)(200g,462mmol)加入到5l四口反应瓶中,向反应瓶 中加入thf(1200ml)和水(600ml)的混合溶液,将反应降至0℃。30分钟0℃下滴加 naoh(24.0g,600.6mmol)的水(400ml)溶液,反应在0室温下反应1.5小时。lcms、tlc监 测反应完全。停止搅拌,用甲基叔丁基醚(800ml x 2)和乙酸乙酯(800ml)萃取反应液。0℃下 用稀盐酸将ph值调制ph=7,随后加入200g nh4cl和800ml水。固体析出后,减压抽滤, 用水(500ml x 2)和石油醚(500ml x 2)淋洗反应液,滤饼烘干得到化合物(iv)(150g,91.0% yield)为白色固体。lcms:m/z 380.2[m+h]
+
。
[0134]
化合物(r,s)-(i)的制备:将化合物(iv)(150g,395mmol)、cdi(96.0g,592mmol)和 dmap(4.82g,39.5mmmol)加入到2l三口反应瓶中,室温下向反应瓶中加入thf(750ml) 溶液,氮气置换三次,反应在室温下反应1个小时。升温至50℃(外温,内温40-45℃),反应 在50℃下反应2小时。tlc(pe:ea=1:1)显示原料反应完全。随后向反应中加入hmds (318.8g,1975mmol),反应在85℃(外温,内温70-75℃)下反应3小时。lcms和tlc显示 原料反应完全。将反应降至0℃,0℃下滴加thf(300ml)和水(150ml)的混合溶液。滴加完 全后,将反应液升温至85℃(外温,内温70-75℃),反应在85℃(外温,内温70-75℃)下反应 1小时,随后将反应液降至0℃。lcms、tlc监测反应完全。减压过滤,用水(300ml x 2) 淋洗反应液,滤饼经鼓风烘箱和真空烘箱烘干得到化合物(r,s)-(i)(120g,80.2%)为白色固体。 lcms:m/z 380.2[m+h]
+
。
[0135]
化合物(xvii)的制备:将(r,s)-(i)(120g,316.6mmol)加入到5l四口反应瓶中,向反应瓶 中加入乙醇、水的混合溶液(1980ml),随后加入化合物(iiia)d+苯甲酸酒石酸酯
(62.3g,174.1 mmol)。反应在室温下搅拌30分钟,随后升温至90℃(内温75℃,以内温为准),反应在内温75℃ 下反应3小时。反应在5个小时降至室温。随后反应在室温下反应12小时。sfc监测反应完全。 过滤反应液,用乙醇:水=3:1(280ml x 2)冲洗反应液,滤饼用鼓风烘箱烘料2小时。得到化 合物(xvii)(100g,43%)为白色固体。lcms:m/z 380.2[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,dmso-d6): δ=1.06(t,3h),2.13(s,3h),2.18(s,3h),3.83(s,3h),3.99-4.07(m,2h),5,89(s,2h), 6.61-6.85(m,2h),7.15(d,1h),7.28(dd,1h),7.38(d,1h),7.56(s,1h),7,62(t,4h),7.69(s, 1h),7,76(t,2h),8,06(d,4h),12.60-15.430(br s,2h)。
[0136]
化合物(i)的制备:将酒石酸盐(xvii)(100g,135.7mmol)加入到5l四口反应瓶中,向反 应瓶中加入乙醇(200ml)水(800ml)的混合溶液(1000ml),随后20分钟内滴加无水 na3po4(33.4g,203.5mmol)的水(400ml)溶液。反应升温至65℃(内温50℃,以内温为准), 反应在内温50℃下反应4小时。反应在2个小时降至室温。sfc监测反应完全。过滤反应液, 用乙醇=1:4(400ml x 2)冲洗反应液,滤饼用鼓风烘箱烘料12小时。得到化合物(i)(45g, 87.5%)为白色固体。lcms:m/z 383.2[m+h]
+
;1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ1.03-1.07(m,3 h),2.19(s,3h),3.82(s,3h),4.00-4.02(m,2h),6.67-6.74(m,2h),7.15(d,j=8hz,1h), 7.26-7.29(m,1h),7.37(s,1h),7.55(s,1h),7.69(s,1h)。
[0137]
表1.hplc分析条件:
[0138][0139]
化合物i纯度为99.27%;
[0140]
表2.sfc分析条件:
[0141][0142]
化合物(i)的(s)体手性纯度为99.4%,光学纯度为98.8%ee。
[0143]
实施例2:(s)-4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2-甲基-8-三氘代甲基-1,4-二氢-1,6-二氮杂萘-4-氢-3-甲酰胺(i)的晶型a的制备:
[0144]
在1000ml单口瓶中,加入将化合物(i)40g样品溶于1.6l乙醇,加入6.40l的水,在1小时 内,将混合物加热至内部温度为50℃,并在该温度下搅拌4小时。将混合物在1小时内冷却至 22℃,并在该温度下搅拌20小时,静置过滤,将滤饼在真空烘箱中干燥(40℃)20小时,得类 白色固体36.5g。
[0145]
二元溶剂晶型a的制备
[0146]
在100ml单口瓶中,加入将化合物(i)4g样品溶于100ml乙醇,加入900ml的甲基叔丁 醚,并在室温下搅拌72小时,静置过滤,将滤饼在真空烘箱中干燥(40℃)20小时,得类白色 固体3.1g。
[0147]
表3.二元溶剂晶型a的制备条件汇总
[0148]
[0149][0150][0151]
单一溶剂晶型a的制备
[0152]
在100ml单口瓶中,加入将化合物(i)4g样品溶于100ml乙醇,减压浓缩至四分之一体 积,并在室温下搅拌20小时,静置过滤,将滤饼在真空烘箱中干燥(40℃)20小时,得类白
色 固体3.5g。
[0153]
表4.单一溶剂晶型a的制备条件汇总
[0154]
样品量(mg)溶剂体积(ml)温度(℃)结果19.8乙醇0.850
→
rta晶型19.5正丙醇1.050
→
rt
→
0a晶型19.9异丙醇1.850
→
rt
→
0a晶型19.6乙酸乙酯1.850
→
rt
→
0a晶型20.1乙腈1.050
→
rta晶型19.9二氧六环0.650
→
rt
→
0a晶型
[0155]
通过上述方法制得的a晶型的红外光吸收图谱如图3所示,ν
max
在3475.6、3417.7、3364.7、 2990.8、2952.2、2939.6、2229.1、1682.4、1657.2、1607.1、1574.5、1483.1、1432.2、1324.7、 1169.8、1031.3、875.3cm-1
处有峰最大值的主要特征峰。
[0156]
实施例3:(s)-4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2-甲基-8-三氘代甲基-1,4-二氢-1,6-二氮杂萘-4-氢-3-甲酰胺(i)的晶型b的制备
[0157]
在1000ml单口瓶中,加入将化合物(i)2g样品溶于200ml四氢呋喃,减压浓缩至十分之 一体积,并在室温下搅拌20小时,静置过滤,将滤饼在真空烘箱中干燥(40℃)20小时,得类 白色固体1.5g。
[0158]
二元溶剂晶型b的制备包括以下步骤:
[0159]
s1.将化合物i与惰性溶剂混合,在20℃-120℃的温度下搅拌;
[0160]
s2.滴加良性溶剂,直至固体刚好完全溶解,将溶液冷却至0-30℃,沉淀出b晶型;
[0161]
s3.过滤后,滤饼在35
±
5℃下真空干燥。
[0162]
上述惰性溶剂包括乙酸异丙酯、正庚烷、环己烷、乙醚、甲基叔丁基醚、水、甲苯;良性 溶剂为四氢呋喃。优选地,步骤s2的溶液冷却温度为0℃-5℃。
[0163]
实施例4:吸湿性影响因素实验
[0164]
动态水分吸脱附分析采用dvs intrinsic(sms,uk)进行测定。测试采用梯度模式,湿度 变化为50%-95%-0%-50%,在0%至90%范围内每个梯度的湿度变化量为10%,梯度终点采 用dm/dt方式进行判断,以dm/dt小于0.002%并维持10min为梯度终点。测试完成后,对样 品晶型进行xrpd分析确认固体形态是否发生变化。a晶型在95%湿度下吸湿增重1.73%, 在0%湿度下失重0.09%,在80%湿度下吸湿增重0.40%,表明a晶型略有引湿性,xrpd结 果显示dvs测试后的样品并未发生晶型改变。
[0165]
固态稳定性影响因素实验:
[0166]
xrpd结果显示,a晶型在高温(60℃)、高湿、光照、加速条件下15天均稳定,没有发 生晶型转变,其中光照条件下白色样品颜色略变黄。
[0167]
表5.影响因素实验结果
[0168]
晶型条件7天结果15天结果a高温60℃无变化无变化 高湿25℃/92.5%rh无变化无变化 光照25℃/4500luxxfpd无变化,样品变黄xfpd无变化,样品变黄 加速40℃/75%rh无变化无变化
[0169]
表6.影响因素实验结果
[0170][0171]
通过对化合物(i)测定的数据进行分析发现,该化合物在影响因素实验和加速实验中,a 晶型性状、含量无明显变化,最大单杂几乎没有增多。
[0172]
实施例5:a晶型生物介质和水溶解度测试
[0173]
生物介质的配制过程如下所示。称取一定量样品加入4.0ml生物介质或水中,在37℃ 恒温震荡24h,分别于0.5h,2h和24h取样,将取样的溶液用0.22μm水系滤膜过滤,对 部分浓度较高的样品用稀释剂进行适当稀释,用hplc测量溶液的信号峰面积,最后根据峰 面积、原料的hplc标准曲线和稀释倍数计算溶液中化合物的浓度。此外,取24h上清液测 试其ph值,对剩余固体进行xrpd测试。
[0174]
表7.生物介质的配置
[0175][0176]
结果显示,在生物介质中,a晶型的24h溶解度排序为fassgf》fessif》fassif≈水, 在fassgf中溶解度远高于其他介质。溶解度测试后剩余固体的xrpd结果显示a晶型在生 物介质和水中均稳定,没有发生晶型转变。此外,a晶型在fassgf中振荡24小时后介质的 ph值升高。
[0177]
表8生物介质和水中的动态溶解度测试
[0178][0179]
实施例6:热重分析(tga)
[0180]
热重分析仪的型号为ta discovery 55(ta,us)。将2-5mg a晶型和b晶型的样品分布 置于已平衡的开口铝制样品盘中,在tga加热炉内自动称量。样品以10℃/min的速率加热 至最终温度,样品处氮气吹扫速度为60ml/min,天平处氮气吹扫速度为40ml/min。tga 结果显示a晶型在加热至150℃过程中无失重,在255℃以上可能发生分解,a晶型化合物 的tg/dsc谱图见图2,b晶型化合物的tg/dsc谱图见图5。
[0181]
实施例7:差式扫描量热分析(dsc)
[0182]
差示扫描量热分析仪的型号为ta discovery 2500(ta,us)。1-2mga晶型样品经精确称 重后置于扎孔的dsc tzero样品盘中,以10℃/min的速率加热至最终温度,炉内氮气吹扫速 度为50ml/min。dsc结果显示a晶型在254℃左右有熔融吸热峰。nmr结果与参考图谱 一致。综上所述,a晶型为无水晶型(图2)。
[0183]
实施例8:x射线粉末衍射(xrpd)
[0184]
实施例2和实施例3制得的晶型样品用x射线粉末衍射仪bruker d8 advance(bruker, ger)进行分析。2θ扫描角度从3
°
到45
°
,扫描步长为0.02
°
,曝光时间为0.08秒。测试样 品时光管电压和电流分别为40kv和40ma,样品盘为零背景样品盘。xrpd结果显示a晶 型和b晶型均为结晶性好的固体。a晶型的x射线衍射图如图1所示,其2θ角的主要特征 峰见表9;b晶型的x射线衍射图如图4所示,其2θ角的主要特征峰见表10。
[0185]
表9 a晶型xrpd主要特征峰列表
[0186]
[0187][0188]
表10 b晶型xrpd主要特征峰列表
[0189]
[0190][0191]
实施例9:偏光显微镜分析
[0192]
偏光显微镜分析(plm)偏光显微镜的型号为nikon ci-pol(nikon,jp)。将少量a晶型样 品放置在载玻片上,选择合适的镜头观察样品形貌,结果见图8。解析结构与化合物i的预测 结构一致。
[0193]
实施例10:化合物(i)的单晶培养及结构解析,并进行结构确证
[0194]
本实验目的是对化合物(i)展开单晶培养及结构解析,并进行结构确证。称取约5mg化合 物(i)样品溶解于1.0ml甲醇/水(v:v 1:1)中,过滤以获得澄清溶液,用瓶盖密封装有澄清溶液的 小瓶,放置在室温下扎一孔缓慢挥发。6天后,得到棒状晶体。使用bruker smart apex ii单 晶x射线衍射仪进行晶体结构解析。
[0195]
表11.单晶结构解析数据
[0196][0197]
化合物(i)单晶属于正交晶系,空间群为p212121,晶胞参数:化合物(i)单晶属于正交晶系,空间群为p212121,晶胞参数:α=β=γ=90.00
°
(结果见图6)。晶胞中氢键,分别是分子间氢键n(1)-h(1a)
‑‑‑
o(1) 和分子内氢键n(1)-h(1b)
‑‑‑
o(2),晶体分子间主要通过氢键和范德华力维系其在空间的稳定 排列。化合物(i)单晶一个晶胞中包含4个化合物(i)分子(结果见图7)。化合物(i)单晶解析结构 与预测结构一致。
[0198]
表12.化合物(i)单晶各个原子的各向异性温度因子值
[0199]
atomu11u22u33u23u13u12o10.0554(8)0.1039(12)0.0372(7)0.0162(7)0.0066(6)-0.0078(8)o20.0341(5)0.0465(6)0.0568(7)-0.0114(5)-0.0074(5)0.0041(5)o30.0554(7)0.0561(7)0.0401(6)0.0100(5)-0.0026(5)0.0179(6)n10.0435(8)0.0538(8)0.0468(8)-0.0016(7)0.0114(6)-0.0034(7)n20.0453(7)0.0479(7)0.0348(6)0.0067(6)0.0049(6)0.0165(6)n30.0566(9)0.0630(9)0.0395(7)0.0157(7)0.0060(6)0.0081(8)n40.0778(12)0.0531(11)0.0825(12)-0.0320(10)-0.0178(10)0.0098(9)c10.0459(8)0.0383(8)0.0355(8)-0.0030(6)0.0040(7)-0.0094(7)c20.0403(7)0.0302(7)0.0280(7)-0.0026(5)0.0000(6)-0.0031(6)c30.0330(7)0.0321(7)0.0306(6)-0.0023(6)-0.0007(6)0.0000(6)c40.0382(8)0.0328(7)0.0286(7)-0.0010(5)-0.0007(6)0.0008(6)c50.0441(8)0.0416(8)0.0336(7)0.0023(6)-0.0024(6)0.0026(7)c60.0543(10)0.0669(11)0.0390(8)0.0098(8)0.0151(8)0.0077(9)c70.0451(9)0.0491(9)0.0382(8)0.0004(7)0.0076(7)0.0059(8)c80.0417(8)0.0362(7)0.0304(7)0.0005(6)0.0010(6)0.0028(6)c90.0468(8)0.0328(7)0.0286(7)-0.0003(6)-0.0007(6)0.0001(6)c100.0627(10)0.0401(8)0.0374(8)0.0060(7)-0.0013(7)0.0095(8)c110.0350(7)0.0312(7)0.0288(6)0.0003(5)0.0013(5)0.0008(6)c120.0339(7)0.0359(7)0.0327(7)0.0000(6)0.0008(6)0.0007(6)c130.0412(7)0.0338(7)0.0397(7)-0.0014(6)0.0018(6)0.0066(6)
c140.0512(9)0.0320(7)0.0357(7)-0.0033(6)-0.0005(6)-0.0007(7)c150.0421(8)0.0411(8)0.0426(8)-0.0045(7)-0.0085(7)-0.0039(7)c160.0356(7)0.0360(7)0.0389(7)0.0002(6)-0.0043(6)0.0032(6)c170.0568(11)0.0428(10)0.0528(10)-0.0075(8)-0.0085(8)0.0019(8)c180.0417(10)0.0781(15)0.1074(19)-0.0295(14)-0.0240(12)0.0184(10)c190.0619(11)0.0494(9)0.0460(9)0.0114(8)-0.0104(8)0.0113(9)c200.0868(16)0.0718(13)0.0687(13)0.0025(12)-0.0268(13)0.0008(13)c210.0594(12)0.0844(15)0.0541(11)0.0106(10)0.0222(10)0.0254(11)
[0200]
表13.单晶结构解析数据原子坐标参数(x 104)和等价温度因子值
[0201]
atomxyzu(eq)o(1)6218(2)1583(2)10019(1)66(1)o(2)3740(1)4386(1)8480(1)46(1)o(3)6130(2)4258(1)7308(1)51(1)n(1)4193(2)2227(1)9347(1)48(1)n(2)9608(2)1651(1)8384(1)43(1)n(3)8616(2)3760(2)6794(1)53(1)n(4)6639(3)7871(2)10199(1)71(1)c(1)5807(2)1935(1)9472(1)40(1)c(2)7022(2)2071(1)8919(1)33(1)c(3)6601(2)2982(1)8417(1)32(1)c(4)7848(2)2989(1)7852(1)33(1)c(5)7578(2)3667(1)7298(1)40(1)c(6)10018(3)3127(2)6821(1)53(1)c(7)10442(2)2417(2)7324(1)44(1)c(8)9307(2)2355(1)7857(1)36(1)c(9)8477(2)1489(1)8893(1)36(1)c(10)9093(3)629(2)9377(1)47(1)c(11)6576(2)4110(1)8772(1)32(1)c(12)5129(2)4782(1)8799(1)34(1)c(13)5145(2)5770(1)9158(1)38(1)c(14)6608(2)6085(1)9489(1)40(1)c(15)8050(2)5437(1)9464(1)42(1)c(16)8011(2)4456(1)9107(1)37(1)c(17)6612(3)7091(2)9882(1)51(1)c(18)2295(3)5068(2)8448(2)76(1)c(19)5615(3)4818(2)6715(1)52(1)c(20)4880(4)4051(2)6223(1)76(1)c(21)12039(3)1735(2)7309(1)66(1)h(1a)34412167965158
h(1b)39162472896458h(2a)105491294839551d(3b)54732837823838h(6a)107613175646764h(10a)8275538972270h(10b)10145870956470h(10c)9254-70915470h(13a)41876217917746h(15a)90255657968350h(16a)89754014909044h(18a)142046858212114h(18b)256757518225114h(18c)191452338887114h(19a)65845190652263h(19b)47895386682563h(20a)455444665839114h(20b)390836916408114h(20c)570134996103114h(21a)126441889690999h(21b)11761956732799h(21c)127291927768199
[0202]
实施例11:醋酸脱氧皮质酮/氯化钠负荷诱导的wky大鼠肾病模型药效实验
[0203]
本研究的目的是在醋酸脱氧皮质酮(doca)/氯化钠负荷诱导的wky大鼠肾病模型中评 价化合物的药效。
[0204]
试剂:
[0205]
醋酸脱氧皮质酮:上海麦克林生化科技有限公司,货号:d830008
[0206]
羧甲基纤维素:sigma-aldrich,货号:c4888
[0207]
蒸馏水:屈臣氏
[0208]
组织固定液:无锡市江原实业技贸总公司,批号:201127
[0209]
高钠盐饲料:上海普路腾生物科技有限公司,批号:20210608-071、20210809-100
[0210]
微量白蛋白elisa检测试剂盒:elabscience,货号:e-el-r0362c
[0211]
设备:
[0212]
血压计:kent,型号:coda monitor-cm2228b
[0213]
电子天平:赛多利斯,型号:quintix124-1cn
[0214]
电子称:上海越平科学仪器有限公司,型号:yp10001
[0215]
超声波清洗器:昆山市超声仪器有限公司,型号:kq3200e
[0216]
振荡器:其林贝尔,型号:01-00x-1012
[0217]
高速匀浆机:ika,型号:t10 basic
[0218]
麻醉机:mip,型号:50318
加入50ml 0.5%羧甲基纤维素溶液,涡旋超声配制均匀混悬液。
[0239]
测试化合物(根据实际动物数和体重配置,4℃存放,以每组40ml为例):
[0240]
③
溶媒:1%羧甲基纤维素钠溶液(10mg/ml,100ml):称取1.0g羧甲基纤维素于200ml 玻璃瓶中,加入100ml纯净水,搅拌配制澄清溶液。
[0241]
④
finerenone(0.2mg/ml):称取8.0mg finerenone于60ml玻璃瓶中,加入40ml溶媒, 涡旋超声配制成均匀混悬液。
[0242]
⑤
化合物(i)的a晶型(0.4mg/ml)高剂量:称取28.0mg化合物(i)的a晶型于120ml玻 璃瓶中,加入70ml溶媒,涡旋超声配制成均匀混悬液。
[0243]
⑥
化合物(i)的a晶型(0.2mg/ml)中剂量:吸取0.4mg/ml的化合物(i)的a晶型混悬液30 ml加入60ml玻璃瓶中,加入30ml溶媒,涡旋超声配制成均匀混悬液。
[0244]
⑦
化合物i的a晶型(0.1mg/ml)低剂量:吸取0.2mg/ml的化合物(i)的a晶型混悬液 20ml加入60ml玻璃瓶中,加入20ml溶媒,涡旋超声配制成均匀混悬液。
[0245]
表16.动物分组:
[0246][0247][0248]
动物造模及给药治疗:
[0249]
实验造模当天,按照体重将所有动物分为6组,每组10只动物。除正常组外,对wky 大鼠进行单侧肾切除术。一周后,模型组所有大鼠自由喂食给予含有4%氯化钠的饮食(含有 4%nacl的普通饲料),并且每周一次皮下注射doca。注射doca 4周后,按照表16连续 给药4周。给药4周后(15周龄),解剖所有动物。在7、11、13和15周龄时,使用代谢笼进 行24小时尿液收集。
[0250]
评价指标如下:
[0251]
①
体重和肾重:适应1周后分组前测量体重。给药后每天监测体重,实验终点测体重和 肾重,计算肾脏重量/体重。
[0252]
②
血压:动物11周及15周龄时测量血压。
[0253]
③
尿液:动物15周龄时,用elisa方法检测尿白蛋白,全自动生化分析仪测尿肌酐; 动物7、11、13、15周龄时,用全自动生化分析仪测尿蛋白浓度;动物11、13、15周龄时, 用全自动生化分析仪测量尿液钠、钾离子浓度。
[0254]
④
肾脏病理学改变:h&e染色:肾小球硬化和肾小管病症评分。
[0255]
表17.大鼠的体重肾脏重量数据
[0256]
组别动物数终点体重(g)肾脏质量(mg)肾脏系数g110329.6
±
4.31268.2
±
27.50.003847
±
0.000057g210318.2
±
4.12333.6
±
90.30.007321
±
0.000227g310316.3
±
4.02132.6
±
25.00.006747
±
0.000079
g410312.4
±
7.01990
±
97.80.006398
±
0.000359g510314.8
±
3.82009.5
±
33.70.006382
±
0.000057g610307.7
±
5.91931.6
±
520.006274
±
0.000095
[0257]
表18.大鼠尿白蛋白、尿肌酐含量测定结果
[0258][0259][0260]
表19.大鼠血压测定结果
[0261][0262]
表20.大鼠尿液中na
+
、k
+
含量测定
[0263]
[0264]
表21.大鼠肾脏h&e病理学评分
[0265] g1g2g3g4g5g6肾小球硬化指数1.88
±
0.122.75
±
0.052.43
±
0.092.34
±
0.212.33
±
0.212.27
±
0.20肾小管损伤数1.06
±
0.041.65
±
0.071.65
±
0.091.53
±
0.271.09
±
0.071.19
±
0.14
[0266]
给药治疗4周之后,finerenone和化合物(i)的a晶型高中低三个剂量都有改善血压的趋 势,finerenone和中剂量化合物(i)的a晶型能够显著改善doca和4%高盐饲料诱导的wky 大鼠肾病中的血压升高。治疗4周后,化合物(i)的a晶型高中低三个剂量显著增强了大鼠排 钠保钾能力,在一定程度上维持了大鼠体内na/k平衡(结果见图9),并显著降低了尿蛋白水 平及白蛋白尿肌酐比率。与正常组大鼠比,模型组大鼠肾小球硬化数量及程度显著增加。与 模型组相比,g3、g6治疗组,显著下降了doca与高钠饲料所致大鼠肾小球的硬化程度, g4、g5组均有改善趋势。与正常组大鼠比,模型组大鼠肾小管损伤程度显著增加,与模型 组相比,g5、g6治疗组显著改善了doca与高钠饲料所致的肾小管损伤,均优于对照组及 参照化合物finerenone治疗组g3的治疗效果(肾脏组织切片图片见附件图10)。以上醋酸脱氧 皮质酮(doca)/氯化钠负荷诱导的wky大鼠肾病模型药效实验结果表明化合物(i)的a晶型 较finerenone在治疗wky大鼠肾脏病症方面有非劣的效果,具有潜在临床价值。
[0267]
本说明书中列举的所有专利、专利申请和文献参考均在此以其全部内容引入作为参考。在 不一致的情况下,包括定义的本公开将是有说服力的。
技术特征:
1.一种如式i所示的化合物i(4s)-4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6-萘啶-4-氘-3-甲酰胺的a晶型,其特征在于:所述化合物i的a晶型x射线衍射图在2θ角为8.547
°
、11.400
°
、14.060
°
、15.392
°
、19.017
°
、19.763
°
、22.939
°
、23.904
°
、25.562
°
、26.467
°
处具有峰最大值的主要特征峰。2.根据权利要求1所述的a晶型,其特征在于:所述化合物的a晶型红外光谱图(ν
max
)在3475.6、3417.7、3364.7、2990.8、2952.2、2939.6、2229.1、1682.4、1657.2、1607.1、1574.5、1483.1、1432.2、1324.7、1169.8、1031.3、875.3cm-1
处有峰最大值的主要特征峰。3.制备如权利要求1所述的化合物i的a晶型的方法,其特征在于,包括以下步骤:s1.将化合物i与惰性溶剂混合,在20℃-120℃的温度下搅拌;s2.滴加良性溶剂,直至固体刚好完全溶解,将溶液冷却至0-30℃,沉淀出a晶型;s3.过滤后,滤饼在35
±
5℃下真空干燥;所述良性溶剂包括二甲基亚砜、甲醇、丙酮、乙二醇甲醚、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、氯仿、乙醇、正丙醇、异丙醇、4-甲基-2-戊酮、乙酸乙酯、甲酸乙酯、甲酸丁酯、二氧六环、乙二醇二甲醚、乙腈。4.如权利要求3所述的方法,其特征在于:所述惰性溶剂包括乙酸异丙酯、正庚烷、环己烷、乙醚、甲基叔丁基醚、水、甲苯。5.如权利要求3所述的方法,其特征在于:步骤s1中的化合物i为一种或多种多晶型物或其溶剂合物。6.一种化合物i的b晶型,其特征在于:所述化合物i的b晶型的x射线衍射图在2θ角为5.792
°
、10.273
°
、10.635
°
、11.267
°
、12.048
°
、14.834
°
、21.849
°
、22.535
°
、24.171
°
、24.734
°
具有峰最大值的主要特征峰。7.制备如权利要求6所述的化合物i的b晶型的方法,其特征在于,包括以下步骤:s1.将化合物i与惰性溶剂混合,在20℃-120℃的温度下搅拌;s2.滴加四氢呋喃,直至固体刚好完全溶解,将溶液冷却至0-30℃,沉淀出b晶型;s3.过滤后,滤饼在35
±
5℃下真空干燥。8.如权利要求7所述的方法,所述惰性溶剂包括乙酸异丙酯、正庚烷、环己烷、乙醚、甲基叔丁基醚、水、甲苯。9.如权利要求7所述的方法,步骤s2的溶液冷却温度为0℃-5℃。10.权利要求1所述的a晶型或权利要求5所述的b晶型在制备用于治疗糖尿病性肾病以
及心血管病症的药物的用途。11.化合物x的制备方法,其特征在于包括以下步骤:1.化合物xiii通过金属钯的催化氰基化反应得到化合物xiv;2.在化合物xvi的作用下氘代化合物xiv制备化合物x。12.根据权利要求11所述的合成方法,其特征在于,在步骤1中,化合物xiii和六铁氰化钾及碳酸钠在n,n-二甲基甲酰胺中,加入醋酸钯催化,120℃氮气氛下反应12-15小时,得到化合物xiv。13.根据权利要求11所述的制备方法,其特征在于:在步骤2中,首先化合物xv与原甲酸三乙酯在乙酸和水的混合溶液中,在室温下反应12-15小时,加入水和四氟硼铵在室温搅拌30-50分钟,得到化合物xvi;然后化合物xvi和化合物xiv在甲苯和氘代重水中与碳酸氢钠在外温100℃氮气氛下反应5-8小时,得到化合物x。14.化合物i的制备方法,其特征在于包括以下步骤:1.化合物(r,s)-i通过与手性酒石酸二苯甲酸酯反应得到化合物xvii;2.化合物xvii通过加碱中和游离得到化合物i。15.根据权利要求14所述的制备方法,其特征在于:化合物(r,s)-(i)是通过化合物iv首先在缩合剂羰基二咪唑的作用下生成羰基咪唑,然后通过和六甲基二硅氮烷的酰胺化反应再水解的一锅法反应制得。16.根据权利要求15所述的制备方法,其特征在于:化合物(r,s)-(i)的制备方法包括以下步骤:化合物iv首先与碳酸二咪唑和催化量的4-(二甲基氨基)吡啶在thf中反应生成羰基咪唑中间体;然后向反应液中加入六甲基二硅烷生成n-硅烷酰胺;最后水解得到化合物(r,s)-i。17.根据权利要求15所述的制备方法,其特征在于:化合物iv的制备方法包括以下步骤:1.化合物xi通过硼酸催化的酯交换反应制备化合物ix;2.化合物ix和根据权利要求11所述的制备方法制得的化合物x通过knoevenagel脱水缩合反应得到化合物viia和化合物viib的混合物;3.化合物viia和化合物viib的混合物与化合物viii通过缩合环化反应制备化合物vi;4.化合物vi通过醚化反应得到化合物v;5.化合物v通过水解反应制备化合物iv。18.化合物i的制备方法,其特征在于合成路线如下:
所述制备方法包括以下步骤:步骤1,化合物xi和化合物xii在甲苯中与硼酸在110℃下反应得到化合物ix;步骤2,化合物xiii和六铁氰化钾及碳酸钠在n,n-二甲基甲酰胺中,加入醋酸钯催化,120℃氮气氛下反应12-15小时,得到化合物xiv;步骤3,首先化合物xv与原甲酸三乙酯在乙酸和水的混合溶液中,在室温下反应12-15小时,加入水和四氟硼铵在室温搅拌30-50分钟,得到化合物xvi;然后化合物xvi和化合物xiv在甲苯和氘代重水中与碳酸氢钠在外温100℃氮气氛下反应5-8小时,得到化合物x;步骤4,化合物ix和化合物x在异丙醇中与乙酸和哌啶在室温下反应得到化合物viia和化合物viib的混合物;步骤5,化合物viia和化合物viib的混合物与化合物viii在乙醇溶液中,在95℃下反应得到化合物vi;步骤6,化合物vi与原乙酸三乙酯在nmp中,加入浓硫酸催化,在120℃下反应得到化合物v;步骤7,化合物v与氢氧化钠水溶液在thf/水的体积比为2:1的混合物中在0℃下反应得到化合物iv;步骤8,化合物iv首先与碳酸二咪唑和催化量的4-(二甲基氨基)吡啶在thf中反应生成羰基咪唑中间体;然后向反应液中加入六甲基二硅烷生成n-硅烷酰胺;最后水解得到化合物(r,s)-i;步骤9和步骤10,通过使用化合物iiia或iiib将化合物(r,s)-i拆分为化合物i和/或化合物ia。
技术总结
本发明涉及一种制备化合物I((4S)-4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6-萘啶-4-氘-3-甲酰胺)的合成和纯化方法。并且还涉及化合物I的A晶型和B晶型及其制备方法。本发明改良的合成化合物(IX),(X)和(R,S)-(I)的方法便于大规模操作,并且本发明通过一种分离对映体混合物的替代方案来制备高纯度手性化合物I,可使用常规的中试设备(搅拌式容器/分离装置)进行操作,不需要购置额外的特殊装置,克服了原公开合成路线中的收率低和成本较高,难纯化,不容易大规模生产的缺陷。缺陷。缺陷。缺陷。
技术研发人员:王永钢 林寨伟 廖辉 陈海杰 杨溢 胡双华
受保护的技术使用者:湖南凯铂生物药业有限公司
技术研发日:2022.03.18
技术公布日:2022/5/25
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