LZ01在治疗杜氏肌营养不良症中的应用

lz01在治疗杜氏肌营养不良症中的应用
技术领域
1.本发明属于医药领域，具体涉及lz01在制备治疗杜氏肌营养不良症相关药物中的应用。


背景技术：

2.杜氏肌营养不良症作为一种基因突变导致的遗传性疾病，基因治疗也许最终是杜氏肌营养不良症的有效办法，但是到目前为止基因治疗手段仍处于研究阶段。目前治疗杜氏肌营养不良症的一线手段是激素联合护理，激素治疗虽然有一定效果但是给患者带来一系列的不良反应，包括：胃肠道反应、肥胖等。所以目前急需寻找到激素以外的药物来治疗杜氏肌营养不良症患者肌肉组织中的炎症，氧化应激和纤维化。
3.lz01
1.(zly16)是一种pparα/δ激动剂elafibranor(gft505)的结构类似物，其结构式如图1所示，检索未发现lz01治疗杜氏肌营养不良症的报道。
4.参考文献：
5.[1]zhou z,deng l,hu l,et al.hepatoprotective effects of zly16,a dual peroxisome proliferator-activated receptor alpha/delta agonist,in rodent model of nonalcoholic steatohepatitis[j].eur j pharmacol,2020,882(173300.


技术实现要素：

[0006]
针对现有问题的不足，本发明的目的是提供lz01在制备治疗杜氏肌营养不良症相关药物中的应用。lz01具有容易合成获得且安全性较高的特点，并能有效缓解杜氏肌营养不良症所引起的肌萎缩和/或肌无力。
[0007]
本发明解决其技术问题采用的技术方案是：
[0008]
本发明首先保护lz01在制备治疗杜氏肌营养不良症相关药物中的应用。
[0009]
lz01通过缓解假性骨骼肌肥大，减轻肌纤维坏死和炎性细胞浸润，促进肌再生，缓解肌纤维化症状，最终改善肌营养不良症引起的肌无力和/或肌萎缩。
[0010]
第二方面，本发明保护一种药物组合物，所述药物组合物包括lz01，以及药学上可接受的载体或辅料。
[0011]
lz01对pparδ有很强的激动作用，而pparβ/δ在骨骼肌中高表达，激动pparδ能够诱导肌肉重构，提高线粒体功能，使氧化更彻底；并能促进dystrophin(抗肌萎缩蛋白)的替代蛋白utrophin a(肌营养相关蛋白)的表达，提高肌纤维膜的完整性，提高运动耐受力，减轻离心收缩力的衰减。本发明首次提出激动pparδ来治疗杜氏肌营养不良症，将含有lz01的药物应用于治疗杜氏肌营养不良症中。
[0012]
作为本技术的优选技术方案，所述药学上可接受的载体包括填充剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。填充剂如淀粉、乳糖、甘露醇、微晶纤维素等；粘合剂如羟丙甲纤维素、聚维酮、微晶纤维素等；崩解剂如交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、表面活性剂、低取代羟丙基纤维素等；润滑剂包括硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇、十二烷基硫酸钠、微粉硅胶、
滑石粉等。辅料还包括着色剂、甜味剂等。
[0013]
作为本技术的优选技术方案，所述药物组合物还包括药学上可接受的治疗杜氏肌营养不良症的药物或其他相关活性物质。
[0014]
作为本技术的优选技术方案，所述药物组合物包括口服制剂、注射制剂、经皮给药制剂或黏膜给药制剂。
[0015]
作为本技术的优选技术方案，所述药物组合物的剂型包括滴剂、口服液、片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂、膜剂、凝胶剂、散剂、乳剂、自乳化制剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、喷雾剂、粉雾剂、贴剂、贴膏剂、溶液剂、软膏剂或乳膏剂。
[0016]
本发明单体化合物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
[0017]
本发明单体化合物或药物组合物的给药剂量依照所要治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。
[0018]
本发明单体化合物或药物组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。当本发明的化合物或药物组合物与其他治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。
[0019]
有益效果
[0020]
本发明提供的lz01在制备治疗杜氏肌营养不良症相关药物中的应用，与现有技术相比，具有以下有益效果：
[0021]
(1)本发明的实验结果表明，lz01能够增加mdx小鼠骨骼肌的力量，改善mdx小鼠肌无力的症状；
[0022]
(2)本发明的实验结果表明，lz01给药后对血清肌酸激酶的含量有提高的趋势；
[0023]
(3)本发明的实验结果表明，lz01对mdx小鼠的肌肉重量有减轻的趋势，提示lz01可能有助于改善mdx小鼠骨骼肌假性肥大；
[0024]
(4)本发明的实验结果表明，lz01给药后显著增加了mdx小鼠腓肠肌、胫骨前肌和膈肌的肌纤维数量，减轻了肌纤维的坏死和炎性细胞的浸润；
[0025]
(5)本发明的实验结果表明，lz01给药治疗后，mdx小鼠肌肉组织中的新生肌纤维数量增多，说明lz01促进了mdx小鼠肌肉再生。
附图说明
[0026]
图1为lz01的结构式；
[0027]
图2为小鼠骨骼肌横切面he染色；
[0028]
图3为小鼠骨骼肌肌纤维fibronectin免疫荧光染色；
[0029]
图4为小鼠骨骼肌肌纤维mhc免疫荧光染色；
[0030]
图5为lz01治疗mdx小鼠胫骨前肌(ta)中pax7和myod表达情况。
具体实施方式
[0031]
以下结合实施例对本发明做进一步详细说明。所用试剂或者仪器设备未注明生产厂商的，均视为可以通过市场购买的常规产品。
[0032]
实施例1
[0033]
lz01治疗3-4周龄的mdx小鼠肌无力和肌萎缩的药效学评价，具体方法如下：购买
mdx小鼠17只，3-4周龄，雄性，按体重随机分为三组，分别命名为dmd模型组、辛伐他汀治疗组和lz01治疗组，辛伐他汀治疗组和lz01治疗组给药剂量分别为20mg/kg/天和30mg/kg/天。具体分组及给药方式如表1所示：
[0034]
表1实验小鼠具体分组及给药剂量和给药方式
[0035][0036]
每天上午9-10时给药，并观察与记录所有动物状态。
[0037]
肌抓力测定；给药3周和6周进行小鼠前肢抓力测定，采用肌抓力测定仪(yls-13a，济南益延科技发展有限公司)测定各组小鼠前肢最大肌抓力，每只测3次取平均值，结果如表2所示。
[0038]
表2 mdx小鼠肌抓力统计结果
[0039]
分组dmd模型组lz01治疗组辛伐他汀治疗组肌抓力(g)(3周)278.53
±
70.97375.50
±
49.94434.63
±
78.87*肌抓力(g)(6周)323.99
±
15.13389.84
±
121.89427.77
±
70.57
[0040]
*
p《0.05与dmd模型组相比。
[0041]
结果表明，给药3周及6周后lz01治疗组小鼠在前肢肌抓力方面优于dmd模型组，表明lz01能够增加mdx小鼠骨骼肌的力量，改善mdx小鼠肌无力的症状。
[0042]
实施例2：
[0043]
最后一次给药后禁食，24小时后对实施例1中mdx小鼠安乐死，腹股沟静脉取血，3500转/分钟离心10分钟，取上层血清测定血清肌酸激酶(ck)和乳酸脱氢酶(ldh)含量。随后解剖腓肠肌(gas)、胫骨前肌(ta)、膈肌(dia)并快速液氮冷冻，第二天转移至-80℃冰箱备用。血清ck、ldh含量和骨骼肌系数如表3所示。
[0044]
表3 mdx小鼠骨骼肌系数
[0045][0046][0047]
*
p《0.05与dmd模型组相比。
[0048]
结果表明，lz01给药后对血清肌酸激酶的含量有提高的趋势，但对于ldh的含量影
响不大，有待进一步研究。此外，lz01对mdx小鼠的肌肉重量有减轻的趋势，提示lz01可能有助于改善mdx小鼠骨骼肌假性肥大。
[0049]
实施例3：
[0050]
苏木精-伊红(he)染色观察实施例3中各组实验鼠骨骼肌病理及形态变化：新鲜的腓肠肌、胫骨前肌和膈肌迅速oct包埋，然后于冷冻切片机进行切片，切片厚度为8μm，各组切片用he染料进行染色，封片后于日本olympus制造的型号为bx53的显微镜下观察、拍照。结果如图2所示。
[0051]
结果表明，dmd模型组小鼠胫骨前肌和膈肌都存在大量炎性细胞浸润，肌纤维变圆，大小不一，细胞核中心化，肌纤维明显丢失。lz01给药后显著增加了mdx小鼠腓肠肌、胫骨前肌和膈肌的肌纤维数量，减轻了肌纤维的坏死和炎性细胞的浸润。
[0052]
实施例4：
[0053]
免疫荧光染色考察实施例3中各组小鼠骨骼肌纤维化情况：新鲜腓肠肌、胫骨前肌和膈肌迅速oct包埋，然后于冷冻切片机进行切片，切片厚度为8μm，用fibronectin抗体进行染色，4℃冰箱孵育过夜。再用荧光二抗染色，室温孵育1小时，封片后于日本olympus制造的型号为fv1000的激光共聚焦显微镜下观察、拍照。结果如图3所示。
[0054]
结果表明，dmd模型组小鼠腓肠肌、胫骨前肌和膈肌都存在明显纤维化，lz01给药治疗后，mdx小鼠的肌肉纤维化相关蛋白水平表达降低，缓解了mdx小鼠肌肉纤维化症状。
[0055]
免疫荧光染色骨骼肌肌纤维：用肌纤维重链，即mhc的特异性标记抗体染色，4℃冰箱孵育过夜。再用荧光二抗染色，室温孵育1小时，封片于日本olympus制造的型号为fv1000的激光共聚焦显微镜下观察、拍照。结果如图4所示。
[0056]
western blot检测肌肉pax7、myod蛋白：提取胫骨前肌(ta)蛋白，电泳80v，30min，120v，1h；湿转、封闭后一抗4℃冰箱孵育过夜，第二天洗膜后二抗室温孵育1小时，洗膜后曝光。
[0057]
结果表明，dmd模型组小鼠腓肠肌、胫骨前肌存在肌纤维重链丢失的现象，lz01给药治疗后，mdx小鼠肌肉组织中的新生肌纤维数量增多，说明lz01促进了mdx小鼠肌肉再生。wb结果(见图5)同样显示lz01促进mdx小鼠的骨骼肌再生。
[0058]
综合实施例1-4所述，本发明通过国际公认的dmd基因敲除小鼠，即mdx小鼠为肌营养不良的模型，在mdx小鼠上考察lz01对肌营养不良引起的肌无力和肌萎缩的治疗效果。从药效学、行为学和分子生物学等方面对lz01对肌营养不良症引起的肌无力和肌萎缩的影响做了系统研究，结果显示：lz01能够缓解小鼠假性骨骼肌肥大，减轻肌纤维坏死和炎性细胞浸润，促进肌再生，缓解肌纤维化症状。因此，本研究为lz01开发治疗肌营养不良症引起的肌无力和/或肌萎缩提供了理论研究基础。
[0059]
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求为保护范围。