一种用于防治乳腺癌的药物组合

1.本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种用于防治乳腺癌的药物组合。


背景技术：

2.乳腺癌的高发病率和高死亡率使其成为肿瘤疾病死亡的主要影响因素，由于外部环境污染及人们快节奏的生活方式，乳腺癌的发病率及死亡率呈现逐年增长趋势。根据2018年irac预计，乳腺癌在全球女性癌症中的发病率为24.2％，位居女性癌症的首位，其中52.9％发生在发展中国家。在我国，乳腺癌的发病率呈逐年上升趋势，每年有30余万女性被诊断出乳腺癌。在东部沿海地区及经济发达的大城市，乳腺癌发病率上升尤其明显。从发病年龄来看，我国乳腺癌发病率从20岁以后开始逐渐上升，45～50岁达到高值。目前，治疗乳腺癌的临床一线用药主要为顺铂和酪氨酸激酶抑制剂。顺铂自二十世纪70年代被美国fda批准上市以来，其产生的耐药性及毒性反应一直是围绕临床的难题，严重影响了五年生存率的提高。虽然酪氨酸激酶抑制剂的应用给乳腺癌的治疗带来了突破性进展，但其药效高度依赖于egfr的基因型，对于egfr基因型不明确以及明确具有野生型egfr的乳腺癌患者，疗效较差，再者，与顺铂一样会不可避免得产生耐药性。因此，寻找低毒高效的治疗乳腺癌的药物亦是肿瘤药物领域研究的热点。
3.黄酮类化合物，在自然界广泛存在，有着广泛的生物活性和较少的毒副作用，其抗肿瘤活性一直是研究的热点。众多研究表明黄酮类化合物在肺癌、结肠癌、前列腺癌、白血病、卵巢癌及胃癌都有着良好的生物学效应。它们的抗肿瘤活性机制主要集中在抗氧化，抗自由基，诱导凋亡，影响细胞周期，调节免疫、诱导细胞凋亡，阻滞肿瘤细胞的侵袭、转移。黄芪中有着较为丰富黄酮物质，一直以来其功效主要被关注在治疗冠心病、心绞痛、脑动脉硬化、老年性痴呆、高血压，但对其抗肿瘤药效的研究阐述很少，尤其对于乳腺癌疗效的研究未见报道。将黄芪中有效成分进行配伍组合，用于乳腺癌的治疗，对丰富临床用药有着十分重大的意义。


技术实现要素：

4.本发明针对现有技术的不足，提供一种能治疗乳腺癌的药物组合，对mcf-7乳腺癌具有较强的细胞毒性作用。
5.本发明的目的之一是提供一种药物组合，由有效成分和可药用辅料制备而成，所述的有效成分由(6ar,11ar)-3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷与毛蕊异黄酮组成，(6ar,11ar)-3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷与毛蕊异黄酮的摩尔比为1：1。
6.(6ar,11ar)-3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷，从中药材黄芪中提取而来，cas no为73340-41-7，分子式：c
17h16
o5，分子量为300.3059。
7.毛蕊异黄酮，从中药材黄芪中提取而来，英文名称为calycosin，分子式为c
16h12
o5，分子量为284.267，具有抗疟原虫的活性、保护血管内皮细胞、抗高血压、抗高血糖、神经保护作用、皮肤美白剂、增强造血功能、雌激素和治疗白血病等多种生物活性。能够提高免疫
功能，增强抗氧化、抗辐射和抗癌作用，保护心脑血管、肝脏、肾脏和肺脏作用，保护脑细胞、提高记忆力，舒张血管平滑肌，抗菌及抑制病毒，减少糖尿病并发症等。
8.进一步的，所述药物组合物制成临床上可接受的片剂、口服液、针剂或胶囊剂。
9.本发明的目的之二是提供上述组合物在制备乳腺癌药物中的用途。
10.本发明的通过将(6ar,11ar)-3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷和毛蕊异黄酮的药物组合作用在mcf-7乳腺癌细胞上，发现该药物组合在低浓度下对mcf-7乳腺癌具有较强的细胞毒性作用，能显著增加线粒体膜电位，活性氧簇的产生，增加凋亡相关蛋白及凋亡的表达，并无明显毒性，可以用来制备能够预防和治疗乳腺癌的药物和保健品。
附图说明
11.图1为本发明药物组合对mcf-7乳腺癌细胞毒性作示意图；
12.图2为本发明药物组合对mcf-7乳腺癌细胞线粒体膜电位影响示意图；
13.图3为本发明药物组合对mcf-7乳腺癌细胞活性氧影响示意图；
14.图4为本发明药物组合诱导mcf-7细胞凋亡的效果对比图。
具体实施方式
15.下面通过具体实施方式进一步详细说明：
16.为进一步充分说明本发明的有益效果，现通过以下实验例来说明。
17.实验例1：细胞毒性作用
18.1.细胞培养条件
19.mcf-7细胞培养在dmem培养基，含10％胎牛血清、青酶素100u/ml、庆大酶素100ug/ml、1mm氨基酸和0.1mm丙酮酸钠，培养箱温度37℃，含5％co2空气和饱和湿度。
20.2.细胞毒性测定
21.将mcf-7细胞种于96孔板，每孔细胞密度约3x103个细胞，24h细胞贴壁后，给予(6ar,11ar)-3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷与毛蕊异黄酮组合物(5nm)，药物孵育24及48h后加入mtt染色，染色4h后，舍弃原有培养液，加入dmso溶解，放入酶标仪，使用570nm检测波长测定吸光度。详见图1。
22.实验例2：组合药物增加mcf-7细胞线粒体膜电位
23.mcf-7细胞种于6孔板上，每孔细胞密度约5x104个细胞，过夜让细胞贴壁，加入(6ar,11ar)-3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷与毛蕊异黄酮组合物(5nm)，加药之前更换培养液。加药24小时后，弃培养基，pbs洗两遍，消化收集细胞，加入含有终浓度为5μg/μl的jc-1的无血清培养基于37℃荧光标记0.5小时，离心弃培养基，pbs洗两遍，重悬后用流式细胞仪进行检测，激发波长488nm及561nm。对照结果参见附图2。
24.实验例3：药物组合物增加mcf-7细胞活性氧簇的产生
25.mcf-7细胞种于6孔板上，每孔细胞密度约5x104个细胞，过夜让细胞贴壁，加入(6ar,11ar)-3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷与毛蕊异黄酮组合物(5nm)，加药之前更换培养液。加药24小时后，加入含有终浓度为15μm的dcfh-da的无血清培养基于37℃荧光标记0.5小时，而后弃培养基，pbs洗两遍，消化收集细胞，用流式细胞仪进行检测，检测激发波长为488nm。实验资料以三次实验的平均值，每次平行做三个孔。对照结果参见附图3。
26.实验例4：药物组合物诱导mcf-7细胞凋亡的作用
27.mcf-7细胞种于6孔板上，每孔细胞密度约5x104个细胞，过夜让细胞贴壁，加入(6ar,11ar)-3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷与毛蕊异黄酮组合物(5nm)，加药之前更换培养液。加药24小时后，弃培养基，pbs洗两遍，消化收集细胞，重悬于binding buffer，而后用pi及annexin v染色，用流式细胞仪检测，激发波长561nm及488nm。对照结果见附图4，组合物能显著增加mcf-7细胞的凋亡，其诱导凋亡的作用强于顺铂。
28.应用例1：
29.将(6ar,11ar)-3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷与毛蕊异黄酮组合物与辅料混合，辅料的用量为1-10％，过筛后，可按照口服制剂的常规工艺制成口服制剂，如：胶囊、片剂、口服液等，作为防治和预防乳腺癌的药物和保健品。辅料可以为：淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶。
30.应用例2：
31.在(6ar,11ar)-3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷与毛蕊异黄酮组合物(5nm)中加入少量非极性溶剂及表面活性剂，超声溶解，再加生理盐水，装于盐水瓶中，密封，沸水加热灭菌，调节ph至5，抽滤至溶液澄明，即得注射液。
32.本发明通过对黄芪有效成分进行深入细致研究，首次发现了(6ar,11ar)-3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷与毛蕊异黄酮配伍应用，可以显著增加mcf-7细胞毒性作用，并且阐述了其能显著增加mcf-7细胞线粒体膜电位、ros和细胞凋亡，进一步明确了其抗肿瘤作用，可以用来制备能够预防和治疗乳腺癌的药物和保健品。
33.以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本技术要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

技术特征：
1.一种用于防治乳腺癌的药物组合，其特征在于：由有效成分和可药用辅料制备而成，所述的有效成分由(6ar,11ar)-3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷与毛蕊异黄酮组成，(6ar,11ar)-3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷与毛蕊异黄酮的摩尔比为1：1。2.根据权利要求1所述的用于防治乳腺癌的药物组合，其特征在于：所述药物组合物制成临床上可接受的片剂、口服液、针剂或胶囊剂。3.权利要求1或2所述的药物组合在制备抗乳腺癌药物中的用途。

技术总结
本申请公开了医药技术领域中一种用于防治乳腺癌的药物组合，由有效成分和可药用辅料制备而成，所述的有效成分由(6aR,11aR)-3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷与毛蕊异黄酮组成。将本发明的药物组合作用在MCF-7乳腺癌细胞上，发现该药物组合在低浓度下对MCF-7乳腺癌具有较强的细胞毒性作用，能显著增加线粒体膜电位，活性氧簇的产生，增加凋亡相关蛋白及凋亡的表达，对正常细胞并无明显毒性，可以用来制备能够预防和治疗乳腺癌的药物和保健品。备能够预防和治疗乳腺癌的药物和保健品。备能够预防和治疗乳腺癌的药物和保健品。


技术研发人员：宫帼唯
受保护的技术使用者：遵义医科大学珠海校区
技术研发日：2022.03.14
技术公布日：2022/5/25