二羟丙茶碱原料药及其制剂中有关物质的检测方法与流程

1.本发明涉及药品检测领域，具体涉及一种二羟丙茶碱原料药及其制剂中有关物质的检测方法。


背景技术：

2.二羟丙茶碱是一种黄嘌呤衍生物，具有支气管扩张药和血管扩张药的作用。它用于治疗呼吸系统疾病，例如哮喘，心脏呼吸困难和支气管炎。它充当腺苷受体拮抗剂和磷酸二酯酶抑制剂。国内的呼吸道疾病尤为严重，本品适用于支气管哮喘、喘息型支气管炎、阻塞性肺气肿等以缓解喘息症状。也用于心源性肺水肿引起的哮喘。
3.二羟丙茶碱原料药按其主流合成工艺路线，经杂质分析，确认其可能含有杂质a、杂质b、杂质c、杂质d。
4.本技术人发现现有技术至少存在以下技术问题：
5.中国药典2020中二羟丙茶碱有关物质分析方法只针对杂质b进行检测，经实验确认该方法杂质b和杂质c不能有效分离，且主峰理论塔板数低于5000，检测数据不可靠。无法有效的对二羟丙茶碱质量进行控制。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一种二羟丙茶碱原料药及其制剂中有关物质的检测方法，以解决现有中国药典2020中二羟丙茶碱有关物质分析方法只针对杂质b进行检测，经实验确认该方法杂质b和杂质c不能有效分离，且主峰理论塔板数低于5000，检测数据不可靠，无法有效的对二羟丙茶碱质量进行控制的技术问题。
7.为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：
8.本发明提供的一种二羟丙茶碱原料药及其制剂中有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法进行测定，具体包括下述检测步骤：
9.s1、制备供试品溶液；
10.s2、制备自身对照溶液；
11.s3、制备混合对照溶液；
12.s4、制备系统适用性溶液；
13.s5、在下述色谱条件与系统适用性试验条件进行检测，记录色谱图至主峰保留时间的3倍，记录色谱图；
14.①
色谱条件：
15.色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；
16.柱温：38-42℃；
17.流动相：以磷酸二氢钾甲醇溶液〔磷酸二氢钾溶液(取磷酸二氢钾1.0g，加水溶解并稀释至1000ml)-甲醇(90∶10)〕-甲醇(98∶2)为流动相；
18.检测波长：270-274nm；
1.0ml与对照储备液1.0-3.0ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得到系统适用性溶液。
31.进一步的，所述步骤s5中，磷酸二氢钾甲醇溶液的配制方法为：称取磷酸二氢钾1.0g加水溶解并稀释至1000ml得溶液a；取溶液a900ml、甲醇100ml混合均匀得溶液b；取溶液b980ml、甲醇20ml混合均匀得磷酸二氢钾甲醇溶液。
32.基于上述技术方案，本发明实施例至少可以产生如下技术效果：
33.本发明提供的二羟丙茶碱原料药及其制剂中有关物质的检测方法，能有效的检出杂质a、杂质b、杂质c、杂质d，且此方法灵敏度高，专属性强，方法更加准确可靠；适用于二羟丙茶碱原料药及其制剂的有关物质分析，解决了现有技术(包括中国药典)无法完成的难题，能有效控制二羟丙茶碱原料药及其制剂的质量。
附图说明
34.图1是本发明实施例1中得到的色谱图；
35.图2是本发明实施例2中得到的色谱图；
36.图3是本发明实施例3(波长为270nm)中得到的色谱图；
37.图4是本发明实施例3(波长为272nm)中得到的色谱图；
38.图5是本发明实施例3(波长为274nm)中得到的色谱图；
39.图6是本发明实施例4中得到的色谱图；
40.图7是本发明实施例5中得到的色谱图；
41.图8是本发明实施例6中得到的色谱图；
42.图9是本发明实施例7中得到的色谱图。
具体实施方式
43.下述实施例中：
44.采用的仪器为岛津高效液相色谱仪2030；
45.采用的色谱柱为ods-3 c18 150*4.6mm；
46.二羟丙茶碱原料药来源于湖南尔康制药股份有限公司；
47.二羟丙茶碱对照品、杂质b、杂质c来源于中国食品药品检定研究院；
48.杂质a、杂质d来源于南京熙泽医药科技有限公司。
49.实施例1：
50.一种二羟丙茶碱原料药及其制剂中有关物质的检测方法，包括下述步骤：
51.s1、制备供试品溶液
52.将供试品用流动相稀释至每1ml中含1.0mg供试品；
53.s2、制备自身对照溶液
54.精密量取供试品溶液1ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得到自身对照溶液；
55.s3、制备混合对照溶液
56.分别取杂质a、杂质b、杂质c和杂质d的对照品各10.0mg，精密称定，置100ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照储备液；精密量取混合对照储备液
1ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得到混合对照溶液；检测时，出峰顺序依次为杂质a、杂质b、主峰、杂质c、杂质d；
57.s4、制备系统适用性溶液
58.精密量取供试品溶液0.5ml与对照储备液3.0ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得到系统适用性溶液；
59.s5、按高效液相色谱法(中国药典2020年版)，在下述色谱条件与系统适用性试验条件进行检测，记录色谱图至主峰保留时间的3倍，记录色谱图(如图1)；
60.①
色谱条件：
61.色谱柱：ods-3 c18 150*4.6mm；
62.柱温：40℃；
63.流动相：称取磷酸二氢钾1.0g加水溶解并稀释至1000ml得溶液a；取溶液a900ml、甲醇100ml混合均匀得溶液b；取溶液b980ml、甲醇20ml混合均匀得磷酸二氢钾甲醇溶液，作为流动相；
64.检测波长：272nm；
65.进样体积：10μl；
66.流速：1.0ml/min；以线性梯度洗脱方式洗脱；
67.②
系统适用性试验条件：系统适用性色谱图中，理论塔板数按二羟丙茶碱峰计算不低于5000，二羟丙茶碱峰与相邻峰之间的分离度大于1.5。
68.检测结果见图1和表1。
69.表1实施例1所得色谱图峰表
70.《峰表》
71.检测器a 272nm
72.峰号保留时间面积高度面积％理论塔板数(usp)分离度(usp)拖尾因子化合物名15.92175245924037.12611332
‑‑
1.120杂质a214.79454352326626.8181761826.5531.024杂质b319.16538705182719.098183128.6361.012杂质c439.5623436980016.9581862123.6331.030杂质d总计 20267115132100.000
ꢀꢀꢀꢀ
73.检测结果显示：杂质a与杂质b的分离度为26.553，杂质b与杂质c的分离度为8.636，杂质c与杂质d的分离度为23.633，符合要求。
74.实施例2：
75.本实施例与实施例1的色谱条件有所不同：
76.s5、
①
色谱条件：
77.色谱柱：ods-3 c18 150*4.6mm；
78.柱温：40℃；
79.流动相：称取磷酸二氢钾1.0g加水溶解并稀释至1000ml得溶液a；取溶液a900ml、甲醇100ml混合均匀得溶液b；取溶液b980ml、甲醇20ml混合均匀得磷酸二氢钾甲醇溶液，作为流动相；
80.检测波长：272nm；
81.进样体积：10μl；
82.流速：1.0ml/min；以线性梯度洗脱方式洗脱；
83.其余同实施例1。
84.检测结果见图2和表2。
85.表2实施例2所得色谱图峰表
86.《峰表》
87.检测器a 272nm
88.峰号保留时间面积高度面积％理论塔板数(usp)分离度(usp)拖尾因子化合物名15.9227564893220.22411371
‑‑
1.116杂质a214.7885458433170.1611810526.7961.020杂质b316.52133601028151757699.381117743.3051.556二羟丙茶碱419.1573902118040.115174954.4371.016杂质c527.7052571950.0081795712.157
‑‑ꢀ
628.3932799940.008165090.804
‑‑ꢀ
739.577347328050.1031865110.9481.016杂质d总计 338103831533013100.000
ꢀꢀꢀꢀ
89.检测结果显示：杂质a与杂质b的分离度为26.796，杂质b与二羟丙茶碱的分离度为3.305，二羟丙茶碱与杂质c的分离度为4.437，杂质c与未知杂质的分离度为12.157，未知杂质与杂质d的分离度为10.948，各峰理论塔板数均大于5000，符合要求。
90.实施例3：
91.本实施例与实施例1的色谱条件有所不同：
92.s5、
①
色谱条件：
93.色谱柱：ods-3 c18 150*4.6mm；
94.柱温：40℃；
95.流动相：称取磷酸二氢钾1.0g加水溶解并稀释至1000ml得溶液a；取溶液a900ml、甲醇100ml混合均匀得溶液b；取溶液b980ml、甲醇20ml混合均匀得磷酸二氢钾甲醇溶液，作为流动相；
96.检测波长：272nm、270nm、274nm；
97.进样体积：10μl；
98.流速：1.0ml/min；以线性梯度洗脱方式洗脱；
99.其余同实施例1。
100.检测结果见图3-图5和表3-表5。
101.表3实施例3(波长为270nm)所得色谱图峰表
102.《峰表》
103.pda ch1 270nm
[0104][0105]
表4实施例3(波长为272nm)所得色谱图峰表
[0106]
pda ch2 272nm
[0107][0108]
表5实施例3(波长为274nm)所得色谱图峰表
[0109]
pda ch3 274nm
[0110][0111]
检测结果显示：在检测波长为270nm时，杂质a与杂质b的分离度为28.482，杂质b与二羟丙茶碱的分离度为3.449，二羟丙茶碱与杂质c的分离度为4.644，杂质c与未知杂质的分离度为13.376，未知杂质与杂质d的分离度为11.091，各峰理论塔板数均大于5000，符合要求；
[0112]
在检测波长为272nm时，杂质a与杂质b的分离度为28.484，杂质b与二羟丙茶碱的分离度为3.430，二羟丙茶碱与杂质c的分离度为4.620，杂质c与未知杂质的分离度为13.403，未知杂质与杂质d的分离度为11.084，各峰理论塔板数均大于5000，符合要求；
[0113]
在检测波长为274nm时，杂质a与杂质b的分离度为28.494，杂质b与二羟丙茶碱的分离度为3.404，二羟丙茶碱与杂质c的分离度为4.586，杂质c与未知杂质的分离度为13.444，未知杂质与杂质d的分离度为11.094，各峰理论塔板数均大于5000，符合要求。
[0114]
实施例4：
[0115]
本实施例与实施例1的色谱条件有所不同：
[0116]
s5、
①
色谱条件：
[0117]
色谱柱：ods-3 c18 150*4.6mm；
[0118]
柱温：38℃；
[0119]
流动相：称取磷酸二氢钾1.0g加水溶解并稀释至1000ml得溶液a；取溶液a900ml、甲醇100ml混合均匀得溶液b；取溶液b980ml、甲醇20ml混合均匀得磷酸二氢钾甲醇溶液，作为流动相；
[0120]
检测波长：272nm；
[0121]
进样体积：10μl；
[0122]
流速：1.0ml/min；以线性梯度洗脱方式洗脱；
[0123]
其余同实施例1。
[0124]
检测结果见图6和表6。
[0125]
表6实施例4所得色谱图峰表
[0126]
《峰表》
[0127]
pda ch1 272nm
[0128]
峰号保留时间面积高度面积％理论塔板数(usp)分离度(usp)拖尾因子化合物名15.9157115494110.22012564
‑‑
1.117杂质a
214.7845141033880.1592107228.6791.029杂质b316.50432078026154158799.378129273.4821.799二羟丙茶碱418.9923794918640.118200284.4520.996杂质c527.65132601110.0101915112.963
‑‑ꢀ
628.42032361070.010197590.956
‑‑ꢀ
738.169337578620.1052129310.5110.997杂质d总计 322787921557331100.000
ꢀꢀꢀꢀ
[0129]
检测结果显示：杂质a与杂质b的分离度为28.679，杂质b与二羟丙茶碱的分离度为3.482，二羟丙茶碱与杂质c的分离度为4.452，杂质c与未知杂质的分离度为12.963，未知杂质与杂质d的分离度为10.511，各峰理论塔板数均大于5000，符合要求。
[0130]
实施例5：
[0131]
本实施例与实施例1的色谱条件有所不同：
[0132]
s5、
①
色谱条件：
[0133]
色谱柱：ods-3 c18 150*4.6mm；
[0134]
柱温：42℃；
[0135]
流动相：称取磷酸二氢钾1.0g加水溶解并稀释至1000ml得溶液a；取溶液a900ml、甲醇100ml混合均匀得溶液b；取溶液b980ml、甲醇20ml混合均匀得磷酸二氢钾甲醇溶液，作为流动相；
[0136]
进样体积：10μl；
[0137]
流速：0.9ml/min；以线性梯度洗脱方式洗脱；
[0138]
其余同实施例1。
[0139]
检测结果见图7和表7。
[0140]
表7实施例5所得色谱图峰表
[0141]
《峰表》
[0142]
pda ch1 272nm
[0143]
峰号保留时间面积高度面积％理论塔板数(usp)分离度(usp)拖尾因子化合物名15.5807122097190.22012166
‑‑
1.115杂质a213.2415159437790.1592046926.7591.031杂质b314.64932180182176269099.384132423.2031.750二羟丙茶碱416.9233672120690.113200534.6081.021杂质c523.98130501250.0091936612.092
‑‑ꢀ
624.54431401220.010167910.779
‑‑ꢀ
733.735337409670.1042118110.9101.017杂质d总计 323796481779469100.000
ꢀꢀꢀꢀ
[0144]
检测结果显示：杂质a与杂质b的分离度为26.759，杂质b与二羟丙茶碱的分离度为3.203，二羟丙茶碱与杂质c的分离度为4.608，杂质c与未知杂质的分离度为12.092，未知杂质与杂质d的分离度为10.910，各峰理论塔板数均大于5000，符合要求。
[0145]
实施例6：
[0146]
本实施例与实施例1中系统适用性溶液的制备及色谱条件有所不同：
[0147]
s4、制备系统适用性溶液
[0148]
精密量取供试品溶液1.0ml与对照储备液1.0ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得到系统适用性溶液；
[0149]
s5、
①
色谱条件：
[0150]
色谱柱：ods-3 c18 150*4.6mm；
[0151]
柱温：40℃；
[0152]
流动相：称取磷酸二氢钾1.0g加水溶解并稀释至1000ml得溶液a；取溶液a900ml、甲醇100ml混合均匀得溶液b；取溶液b980ml、甲醇20ml混合均匀得磷酸二氢钾甲醇溶液，作为流动相；
[0153]
检测波长：272nm；
[0154]
进样体积：10μl；
[0155]
流速：1.1ml/min；以线性梯度洗脱方式洗脱；
[0156]
其余同实施例1。
[0157]
检测结果见图8和表8。
[0158]
表8实施例6所得色谱图峰表
[0159]
《峰表》
[0160]
pda ch1 272nm
[0161]
峰号保留时间面积高度面积％理论塔板数(usp)分离度(usp)拖尾因子化合物名15.2436475293170.22011324
‑‑
1.125杂质a212.7574700734460.1601908926.5301.034杂质b314.19029231836158767899.381123753.2601.669二羟丙茶碱416.3543419918800.116182714.3531.015杂质c523.47927061090.0091752611.941
‑‑ꢀ
624.08925931010.009176560.850
‑‑ꢀ
732.736307928770.1051980510.4451.024杂质d总计 294138851603407100.000
ꢀꢀꢀꢀ
[0162]
检测结果显示：杂质a与杂质b的分离度为26.530，杂质b与二羟丙茶碱的分离度为3.260，二羟丙茶碱与杂质c的分离度为4.353，杂质c与未知杂质的分离度为11.941，未知杂质与杂质d的分离度为10.445，各峰理论塔板数均大于5000，符合要求。
[0163]
实施例7：
[0164]
本实施例与实施例1中系统适用性溶液的制备及色谱条件有所不同：
[0165]
s4、制备系统适用性溶液
[0166]
精密量取供试品溶液1.0ml与对照储备液2.0ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得到系统适用性溶液；
[0167]
s5、
①
色谱条件：
[0168]
色谱柱：ods-3 c18 150*4.6mm；
[0169]
柱温：40℃；
[0170]
流动相：称取磷酸二氢钾1.0g加水溶解并稀释至1000ml得溶液a；取溶液a900ml、甲醇100ml混合均匀得溶液b；取溶液b980ml、甲醇20ml混合均匀得磷酸二氢钾甲醇溶液，作为流动相；
[0171]
检测波长：272nm；
[0172]
进样体积：10μl；
[0173]
流速：0.9ml/min；以线性梯度洗脱方式洗脱；
[0174]
其余同实施例1。
[0175]
检测结果见图9和表9。
[0176]
表9实施例7所得色谱图峰表
[0177]
《峰表》
[0178]
pda ch1 272nm
[0179]
峰号保留时间面积高度面积％理论塔板数(usp)分离度(usp)拖尾因子化合物名16.3007832294780.21912064
‑‑
1.106杂质a215.212565973350.1591791926.0561.020杂质b316.87935462441160882899.381122363.1321.609二羟丙茶碱419.4594148118540.116172074.2871.002杂质c527.79835391120.0101443710.981
‑‑ꢀ
628.48736321110.010143940.734
‑‑ꢀ
738.876372038510.104178109.8241.021杂质d总计 356832151624585100.000
ꢀꢀꢀꢀ
[0180]
检测结果显示：杂质a与杂质b的分离度为26.056，杂质b与二羟丙茶碱的分离度为3.132，二羟丙茶碱与杂质c的分离度为4.287，杂质c与未知杂质的分离度为10.981，未知杂质与杂质d的分离度为9.824，各峰理论塔板数均大于5000，符合要求。

技术特征：
1.一种二羟丙茶碱原料药及其制剂中有关物质的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法进行测定，具体包括下述检测步骤：s1、制备供试品溶液；s2、制备自身对照溶液；s3、制备混合对照溶液；s4、制备系统适用性溶液；s5、在下述色谱条件与系统适用性试验条件进行检测，记录色谱图至主峰保留时间的3倍，记录色谱图；
①
色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；柱温：38-42℃；流动相：磷酸二氢钾甲醇溶液；检测波长：270-274nm；进样体积：10μl；流速：0.9-1.1ml/min；以线性梯度洗脱方式洗脱；
②
系统适用性试验条件：系统适用性色谱图中，理论塔板数按二羟丙茶碱峰计算不低于5000，二羟丙茶碱峰与相邻峰之间的分离度大于1.5；所述有关物质包括杂质a、杂质b、杂质c和杂质d，所述杂质a、杂质b、杂质c和杂质d的结构式如下：
2.根据权利要求1所述的二羟丙茶碱原料药及其制剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述步骤s1中，将供试品用流动相稀释至每1ml中含1.0mg供试品。3.根据权利要求1所述的二羟丙茶碱原料药及其制剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述步骤s5中，柱温为40℃。4.根据权利要求1所述的二羟丙茶碱原料药及其制剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述步骤s5中，流速：1.0ml/min。5.根据权利要求1所述的二羟丙茶碱原料药及其制剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述步骤s2中，自身对照溶液的制备方法为：量取供试品溶液1ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得到自身对照溶液。6.根据权利要求1所述的二羟丙茶碱原料药及其制剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述步骤s3中，混合对照溶液的制备方法为：分别取杂质a、杂质b、杂质c和杂质d的对照品各10.0mg，置于100ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照储备液；量取混合对照储备液1ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得到混合对照溶液；检测时，出峰顺序依次为杂质a、杂质b、主峰、杂质c、杂质d。7.根据权利要求1所述的二羟丙茶碱原料药及其制剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述步骤s4中，系统适用性溶液的制备方法为：量取供试品溶液0.5-1.0ml与对照储备液1.0-3.0ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得到系统适用性溶液。8.根据权利要求1所述的二羟丙茶碱原料药及其制剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述步骤s5中，磷酸二氢钾甲醇溶液的配制方法为：称取磷酸二氢钾1.0g加水溶解并稀释至1000ml得溶液a；取溶液a900ml、甲醇100ml混合均匀得溶液b；取溶液b980ml、甲醇20ml混合均匀得磷酸二氢钾甲醇溶液。

技术总结
本发明公开了一种二羟丙茶碱原料药及其制剂中有关物质的检测方法，解决了现有中国药典2020中二羟丙茶碱有关物质分析方法只针对杂质B进行检测，经实验确认该方法杂质B和杂质C不能有效分离，且主峰理论塔板数低于5000，检测数据不可靠，无法有效的对二羟丙茶碱质量进行控制技术问题。所述检测方法采用高效液相色谱法进行测定，具体包括下述检测步骤：S1、制备供试品溶液；S2、制备自身对照溶液；S3、制备混合对照溶液；S4、制备系统适用性溶液；S5、液相色谱检测。本发明提供的二羟丙茶碱原料药及其制剂中有关物质的检测方法，适用于二羟丙茶碱原料药及其制剂的有关物质分析，实现了杂质之间以及杂质与主峰之间的有限分离。间以及杂质与主峰之间的有限分离。间以及杂质与主峰之间的有限分离。


技术研发人员：岳滔 杜丰 胡欣
受保护的技术使用者：四川邈济生物医药科技有限公司
技术研发日：2022.02.11
技术公布日：2022/5/25