一种盐酸平阳霉素原料药中残留溶剂的检测方法与流程

1.本发明属于药物分析检测领域，具体是一种盐酸平阳霉素原料药中残留溶剂的检测方法。


背景技术：

2.平阳霉素是由我国自主研发的博来霉素类抗肿瘤抗生素，其化学结构为博来霉素a5组分。主治唇癌、舌癌、齿痕癌、鼻咽癌等颈部鳞癌，且肺毒性低于博来霉素，不抑制机体的免疫功能，无常用抗癌药物所引起的白细胞减少症状。1994年进入首批国家基本药物目录，其质量标准收载于《中国药典》。
3.这类抗生素主要通过微生物发酵工艺或半合成过程生产，组分较复杂，生产工艺中常用有机溶剂对盐酸平阳霉素粗品进行结晶提纯提纯，如果工艺参数控制不严格，存在成品中残留有机溶剂的可能，当药品中残留溶剂水平高于安全值时，就会对人体或环境产生危害，
4.在原料药制备过程中使用甲醇、丙酮和异丙醇3种溶剂，但是目前国内尚未有测定盐酸平阳霉素原料药中有机溶剂残留量的报道。
5.根据人用药物注册技术要求国际协调会(ich)和中国药典2020年版通则0861“残留溶剂测定法”的规定，上述3种溶剂均有残留量限度要求。为了有效控制盐酸平阳霉素原料质量，保证用药安全，本文建立气相色谱法测定盐酸平阳霉素中3种有机残留溶剂的方法，灵敏度高，重复性好，且简单易操作，适合用于盐酸平阳霉素中上述3种有机溶剂的残留量的测定，为该原料药的质量控制提供参考。盐酸平阳霉素收载《中国药典》2020年版，现行质量标准中无残留溶剂检查项，无法全面控制产品质量。


技术实现要素：

6.本发明的目的是针对以上问题，提供了一种盐酸平阳霉素原料药中残留溶剂的检测方法，包括以下步骤：
7.分别将空白溶液、混合对照品溶液和供试品溶液加热平衡后，采用顶空进样的方式注入到气相色谱仪中，记录色谱图，按外标法以峰面积计算残留溶剂的含量；
8.气相色谱的条件为：
9.色谱柱温度：起始柱温为40℃，维持2分钟，以每分钟5℃的速率升温至100℃，维持8分钟，再以每分钟20℃的速率升温至200℃，维持5分钟；
10.进样口温度：200℃；
11.检测器温度：250℃；
12.顶空瓶平衡温度：70℃，平衡时间：30分钟；
13.载气为氮气，流速为4ml/min或5ml/min或6ml/min。优选的，所述色谱柱为db-wax，30m
×
0.32mm
×
0.25μm或db-624，30m
×
0.53mm
×
3μm或db-ffap，30m
×
0.32mm
×
0.5μm)。
14.优选的，所述空白溶液为水。
15.优选的，所述供试品溶液的制备：精密称取供试品0.2g，置顶空瓶中，精密加入水2ml溶解，密封，即得。
16.优选的，所述混合对照品溶液的制备：
17.(1)精密称取甲醇1.5089g、丙酮2.5086g、异丙醇2.5078g，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，含甲醇、丙酮、异丙醇分别为3mg/ml、5mg/ml和5mg/ml的混合对照品贮备液；
18.(2)精密量取混合对照品贮备液5ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。
19.优选的，所述外标法的计算公式为
[0020][0021]
其中a为残留溶剂的含量，b为供试品称样量，c为供试品稀释倍数，d为供试品溶液峰面积，e为对照品称样量，f为对照品稀释倍数，g为对照品平均峰面积。
[0022]
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
[0023]
本发明建立了气相色谱-顶空进样同时测定盐酸平阳霉素原料药中3种有机溶剂含量的方法，方法简单、准确、灵敏度高，符合残留溶剂检测要求，适用于盐酸平阳霉素原料药中残留溶剂的日常检测，同时为本品质量标准中残留溶剂检查项的修订提供参考和依据，有效提高原料药质量，降低临床用药风险。
附图说明
[0024]
图1为系统适用性色谱图；
[0025]
图2为空白溶液色谱图；
[0026]
图3为供试品溶液色谱图；
[0027]
图4为甲醇线性关系图；
[0028]
图5为丙酮线性关系图；
[0029]
图6为异丙醇线性关系图；
具体实施方式
[0030]
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0031]
1.仪器与试剂
[0032]
仪器：安捷伦7890b气相色谱仪；
[0033]
氢火焰离子化检测器(fid)；
[0034]
纯水氢气发生器(济南浩伟实验仪器有限公司)；
[0035]
sgk-2lb低噪空气泵(北京东方精华苑科技有限公司)；
[0036]
open lbacds chem station edition工作站；
[0037]
德国梅特勒xs205电子分析天平。
[0038]
试剂：盐酸平阳霉素原料，批号：y190401、y200901、y200902、200322；
[0039]
甲醇、丙酮、异丙醇均为色谱纯。
[0040]
2.色谱条件
[0041]
色谱柱：db-wax(30m
×
0.32mm
×
0.25μm)；
[0042]
db-624(30m
×
0.53mm
×
3μm)；
[0043]
db-ffap(30m
×
0.32mm
×
0.5μm)。
[0044]
程序升温：起始柱温为40℃，维持2分钟，以每分钟5℃的速率升温至100℃，维持8分钟，再以每分钟20℃的速率升温至200℃，维持5分钟；
[0045]
进样口温度：200℃；
[0046]
检测器温度：250℃；
[0047]
顶空瓶平衡温度：70℃，平衡时间：30分钟；
[0048]
载气：氮气；流速：5ml/min。
[0049]
3.溶液配制
[0050]
空白溶液：水
[0051]
混合对照品贮备液：精密称取甲醇1.5089g、丙酮2.5086g、异丙醇2.5078g，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，含甲醇、丙酮、异丙醇分别为3mg/ml、5mg/ml和5mg/ml的混合对照品贮备液。
[0052]
对照品溶液：精密量取混合对照品贮备液5ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液
[0053]
供试品溶液：精密称取供试品0.2g，置顶空瓶中，精密加入水2ml溶解，密封，即得。
[0054]
4.方法学验证
[0055]
4.1专属性试验
[0056]
取混合对照品溶液、空白溶液和供试品溶液各分别注入气相色谱仪，记录色谱图。结果如附图1-3所示。
[0057]
结果表明，在该色谱条件下，出峰顺序依次为：甲醇、丙酮和异丙醇，各成分峰均能达到基线分离，分离度大于1.8；理论板数以丙酮峰计为50507，溶剂对样品测定无干扰，其他杂质峰和主峰分离良好。
[0058]
4.2检出限及定量限试验
[0059]
精密量取混合对照品逐级稀释直至信噪比s/n约10，即为定量限溶液。
[0060]
精密量取定量限溶液3ml，置10ml量瓶，加水稀释至刻度，摇匀，即为检出限溶液。
[0061]
取定量限溶液注入气相色谱仪，连续测定6次，记录色谱图。
[0062]
表1定量限试验
[0063][0064][0065]
由上述试验结果可知：甲醇、丙酮和异丙醇定量限6次测定结果的峰面积rsd分别为1.7％，1.3％，1.4％，定量限分别为18.107μg，1.505μg，3.494μg。检出限分别为6.036μg，0.501μg，1.026μg。
[0066]
4.3线性关系考察
[0067]
精密吸取混合对照品贮备液各0.01ml，1ml，5ml，10ml，20ml，50ml，分别置于100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成系列对照品溶液。按上述色谱条件进样测定，记录峰面积。
[0068]
表2甲醇线性关系试验
[0069][0070]
以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标进行线性回归，线性关系图如附图4所示：
[0071]
甲醇在0.0003mg/ml～1.5089mg/ml范围内，线性方程为y＝1364x-2.149，相关系数r＝1.0000，峰面积a与浓度c(mg/ml)呈显著线性关系。
[0072]
表3丙酮线性关系试验
[0073][0074][0075]
以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标进行线性回归，线性关系图如附图5所示，
[0076]
丙酮在0.0005mg/ml～2.5086mg/ml范围内，线性方程为y＝9824x-61.80，相关系数r＝0.9995，峰面积a与浓度c(mg/ml)呈显著线性关系。
[0077]
表4异丙醇线性关系试验
[0078][0079]
以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标进行线性回归，线性关系图如附图6所示，
[0080]
异丙醇在0.0005mg/ml～2.5018mg/ml范围内，线性方程为y＝5518x-3.563，相关系数r＝1.0000，峰面积a与浓度c(mg/ml)呈显著线性关系。
[0081]
4.4准确度试验
[0082]
标准加入溶液：精密量取混合标准贮备液2.5ml、5.0ml、7.5ml置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得标准加入液(1)、(2)、(3)；
[0083]
供试品溶液：精密称取本品(批号：y190401)约0.2g，共9份，分3组，置顶空瓶中，分别加入上述混合对照溶液2.0ml，密封。取上述溶液注入气相色谱仪，记录色谱图；测得量与加入量的比值即为回收率。
[0084]
表5回收率试验
[0085]
[0086][0087]
由以上试验结果可知：甲醇、丙酮和异丙醇回收率范围分别为100.3％～105.6％(rsd％＝2.8)，102.1％～102.9％(rsd％＝0.6)，100.2％～102.1％(rsd％＝1.1)，回收率良好，证明本法准确性良好，符合验证要求。
[0088]
4.5精密度试验
[0089]
4.5.1进样精密度试验
[0090]
取对照品溶液注入气相色谱仪，记录色谱图。重复进样6次，计算rsd，考察本法的仪器精密度。
[0091]
表6进样精密度试验
[0092]
[0093][0094]
由试验结果可知：甲醇保留时间rsd为0.01％，峰面积rsd为1.0％，丙酮保留时间rsd为0.0％，峰面积rsd为0.7％，异丙醇保留时间rsd为0.01％，峰面积rsd为0.8％，进样精密度良好。
[0095]
4.5.2重复性试验
[0096]
取盐酸平阳霉素原料1批(批号：y190401)和混合对照品贮备溶液，照拟定方法，平行制备6份，分别注入气相色谱仪，记录色谱图。考察本法的重复性。
[0097]
表7重复性试验结果
[0098][0099][0100]
结论：同一实验人员重复测定6次，6次测定结果比较甲醇、丙酮、异丙醇的检出量一致。方法重复性良好。
[0101]
4.5.3中间精密度试验
[0102]
不同实验人员按对照品溶液和供试品溶液操作，配制对照品溶液6份和供试品(批号：y190401)溶液6份。分别注入气相色谱仪，记录色谱图。
[0103]
表8中间精密度试验结果
[0104][0105][0106]
结论：不同实验人员重复测定6次，6次测定结果比较，甲醇、丙酮和异丙醇检出量一致。方法重复性良好。
[0107]
4.6溶液稳定性试验
[0108]
按对照品溶液配制方法制备，于室温放置0、1、2、3、4、5、6小时，取不同放置时间的上述溶液注入气相色谱仪，记录色谱图。
[0109]
表9对照品与供试品溶液稳定性试验结果
[0110][0111]
由试验结果可知：室温放置6小时，对照品溶液中甲醇、丙酮和异丙醇峰面积rsd分别为4.1％，1.6％，1.9％(n＝6)，对照品溶液在6小时内稳定。
[0112]
综上所述，本专利建立了气相色谱-顶空进样同时测定盐酸平阳霉素原料药中3种有机溶剂含量的方法，方法简单、准确、灵敏度高，符合残留溶剂检测要求，适用于盐酸平阳霉素原料药中残留溶剂的日常检测，同时为本品质量标准中残留溶剂检查项的修订提供参考和依据，有效提高原料药质量，降低临床用药风险。
[0113]
(二)对比例1
[0114]
载气流速不同，余同上述实施例中的条件。取对照溶液注入气相色谱仪，考察载气流速4ml/min、5ml/min、6ml/min条件下3种有机溶剂的色谱保留行为，以各组分分离度和理论塔板数为评价指标，测定结果见表10。结果在各色谱条件下3种溶剂均可达到基线分离。
[0115]
表10不同载气流速测定结果
[0116][0117]
(三)对比例2
[0118]
进样口温度不同，余同上述实施例中的条件。
[0119]
取对照溶液注入气相色谱仪，考察进样口温度200℃、220℃、240℃条件下3种有机溶剂的色谱保留行为，以各组分分离度和理论塔板数为评价指标，测定结果见表11。在各色
谱条件下3种溶剂均可达到基线分离。
[0120][0121][0122]
表11不同进样口温度测定结果
[0123]
(四)对比例3
[0124]
检测器温度不同，余同上述实施例中的条件。
[0125]
取对照溶液注入气相色谱仪，考察检测器温度230℃、250℃、270℃条件下3种有机溶剂的色谱保留行为，以各组分分离度和理论塔板数为评价指标，测定结果见表12。在各色谱条件下3种溶剂均可达到基线分离。
[0126]
表12不同检测器温度测定结果
[0127][0128]
(五)对比例3
[0129]
分流比不同，余同实施例1。
[0130]
取对照溶液注入气相色谱仪，考察分流比5:1、10:1条件下3种有机溶剂的色谱保留行为，以各组分分离度和理论塔板数为评价指标，测定结果见表13。在各色谱条件下3种溶剂均可达到基线分离。
[0131]
表13不同分流比测定结果
[0132][0133]
[0134]
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
[0135]
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。