一种分离检测富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的方法与流程

1.本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种分离检测富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的方法。


背景技术：

2.富马酸磷丙替诺福韦，cas：379270-37-8，其化学结构如下式i所示：
[0003][0004]
该药用于治疗成人和青少年(12岁以上，体重至少为35kg)的慢性乙型肝炎(hbv)。
[0005]
目前，《美国药典》usp、《欧洲药典》ep及《中国药典》ch.p均没有记载富马酸磷丙替诺福韦的对映异构体的分析方法，也未检索到有关文献报道富马酸磷丙替诺福韦的对映异构体的分离检测方法。
[0006]
所以，为了更好更准确地控制富马酸磷丙替诺福韦产品中的杂质，保证药品的质量，需要研究适合于富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的分析方法。


技术实现要素：

[0007]
本发明的目的在于提供一种分离检测富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的方法。本发明的方法能够有效分离检测富马酸磷丙替诺福韦中对映异构体的含量，方法的灵敏度高，专属性好，准确度可靠，可用于富马酸磷丙替诺福韦的质量控制。
[0008]
一种分离检测富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的方法，包括：采用直链淀粉-三(3,5二甲基苯基氨基甲酸酯)为填料的色谱柱，流动相分为a相和b相，a相为正己烷或正庚烷，b相为乙醇和二乙胺的混合溶液或异丙醇和二乙胺的混合溶液。
[0009]
所述色谱柱选自chiralpak ia、chiralpak ic、chiralpak if、chiralpak ie色谱柱中的至少一种。在一些实施例中，所述的色谱柱选自chiralpak ia色谱柱，有利于分离检测。
[0010]
在一些实施例中，所述色谱柱为chiralpak ia柱，购自大赛璐厂家。
[0011]
在一些实施例中，所述b相中，二乙胺与乙醇的体积比为1:1000至5:1000。在一些实施例中，所述二乙胺与乙醇的体积比为1:1000。在一些实施例中，所述b相中，二乙胺与异丙醇的体积比为1:1000至 5:1000。在一些实施例中，所述二乙胺与异丙醇的体积比为1:1000。
[0012]
在一些实施例中，a相与b相的体积比为20:80至80:20。在一些实施例中，a相与b相的体积比为 40:60。
[0013]
在一些实施例中，所述的分离检测富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的方法，可包括以下步骤或按以下步骤实现：
[0014]
1)取含富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的待测样品适量，加入溶剂溶解，混匀；
[0015]
2)设置仪器参数：检测器、色谱柱、波长、流动相的流速、柱温；
[0016]
3)取一定量步骤1)的溶液，注入高效液相色谱仪中，完成富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的分离测定。
[0017]
步骤1)中所述的溶剂为乙醇与正己烷的混合溶液。在一些实施例中，所述的溶剂为乙醇与正己烷的混合溶液，所述混合溶液，其中，乙醇与正己烷的体积比为6:4。
[0018]
步骤1)中，每1ml所述溶剂可含待测样品0.5mg～4mg。在一些实施例中，步骤1)中，每1ml所述溶剂含待测样品1mg。
[0019]
步骤2)中，检测器为dad检测器。
[0020]
步骤2)中，波长可为200nm-280nm。在一些实施例中，波长为260nm。
[0021]
步骤2)中，所述流动相的流速可为0.3ml/min～1.5ml/min。在一些实施例中，步骤2)中，流动相的流速为0.5ml/min。在一些实施例中，步骤2)中，流动相的流速为1.0ml/min。在一些实施例中，步骤2) 中，流动相的流速为1.5ml/min。
[0022]
步骤2)中，色谱柱柱箱温度为15℃～40℃。在一些实施例中，色谱柱柱箱温度为25℃；在一些实施例中，色谱柱柱箱温度为30℃；在一些实施例中，色谱柱柱箱温度为35℃。
[0023]
步骤3)中，所述样品溶液进样量可为2μl～40μl。在一些实施例中，所述样品溶液进样量为5μl。在一些实施例中，所述样品溶液进样量为10μl。在一些实施例中，所述样品溶液进样量为30μl。
[0024]
在一些实施例中，所述的分离检测富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的方法，包括以下步骤或可按以下步骤实现：
[0025]
1)取含富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的待测样品适量，加入乙醇与正己烷的混合溶液溶解，混匀；
[0026]
2)设置流动相的流速为0.3ml/min～1.5ml/min检测器为dad检测器，色谱柱为chiralpak ia柱，色谱柱柱箱温度为15℃～40℃；
[0027]
3)取步骤1)的样品溶液2μl～40μl，注入高效液相色谱仪中，完成富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的分离测定。
[0028]
高效液相色谱仪可为美国agilent 1260型高效液相色谱系统及工作站或其他适宜可行的系统。
[0029]
在一些实施例中，所述的一种分离检测富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的方法，包括：采用直链淀粉
ꢀ‑
三(3,5二甲基苯基氨基甲酸酯)为填料的色谱柱，流动相分为a相和b相，a相为正己烷或正庚烷，b 相为二乙胺与乙醇的混合溶液或二乙胺和异丙醇的混合溶液。
[0030]
在一些实施例中，所述的一种分离检测富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的方法，包括：采用 chiralpak ia的色谱柱，流动相分为a相和b相，a相为正己烷，b相为乙醇和二乙胺的混合溶液；其中，二乙胺与乙醇的体积比为1:1000至5:1000。
[0031]
在一些实施例中，所述的一种分离检测富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的方法，包括：采用 chiralpak ia的色谱柱，流动相分为a相和b相，a相为正己烷，b相为异丙醇和二
乙胺的混合溶液；其中，二乙胺与异丙醇的体积比为1:1000至5:1000。
[0032]
在一些实施例中，所述的一种分离检测富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的方法，包括：采用 chiralpak ia的色谱柱，流动相分为a相和b相，a相为正庚烷，b相为乙醇和二乙胺的混合溶液；其中，二乙胺与乙醇的体积比为1:1000至5:1000。
[0033]
在一些实施例中，所述的一种分离检测富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的方法，包括：采用 chiralpak ia的色谱柱，流动相分为a相和b相，a相为正己烷，b相为异丙醇和二乙胺的混合溶液；其中，二乙胺与异丙醇的体积比为1:1000至5:1000。
[0034]
采用本发明所述的分离方法，分离检测富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的时间可在30分钟以内。
[0035]
在上文或下文的内容中，无论是否使用“大约”或“约”等字眼，所有在此公开了的数字均为近似值。每一个数字的数值有可能会出现
±
1％、
±
2％、
±
5％、
±
7％、
±
8％或
±
10％等差异。
[0036]
本发明提供的方法，可以将药物富马酸磷丙替诺福韦对映异构体进行有效分离，分离度达到2.0以上，或2.5以上，或5以上，完全基线分离，可解决富马酸磷丙替诺福韦对映异构体检测方法空缺、提供一种可行的方法的问题。本发明的方法简单、快捷、准确且灵敏度高。
附图说明
[0037]
图1实施例1中空白溶液色谱图；
[0038]
图2实施例1中供试加标溶液色谱图；
[0039]
图3实施例2中空白溶液色谱图；
[0040]
图4实施例2中供试加标溶液色谱图；
[0041]
图5实施例3中空白溶液色谱图；
[0042]
图6实施例3中供试加标溶液色谱图；
[0043]
图7实施例4中空白溶液色谱图；
[0044]
图8实施例4中供试加标溶液色谱图；
[0045]
图9实施例5中空白溶液色谱图；
[0046]
图10实施例5中供试加标溶液色谱图；
[0047]
图11实施例6中空白溶液色谱图；
[0048]
图12实施例6中供试加标溶液色谱图；
[0049]
图13实施例7中空白溶液色谱图；
[0050]
图14实施例7中供试加标溶液色谱图；
[0051]
图15实施例8中空白溶液色谱图；
[0052]
图16实施例8中供试加标溶液色谱图；
[0053]
图17实施例9中检测限溶液第一针色谱图；
[0054]
图18实施例9中供试品加标溶液色谱图；
[0055]
图19实施例10中空白溶液色谱图；
[0056]
图20实施例10中供试品加标溶液色谱图；
[0057]
图21实施例10中供试品溶液色谱图；
[0058]
图22实施例11中检测限溶液第二针色谱图；
[0059]
图23实施例11中检测限溶液第三针色谱图；
[0060]
图24实施例11中定量限溶液第一针色谱图；
[0061]
图25实施例11中定量限溶液第二针色谱图；
[0062]
图26实施例11中定量限溶液第三针色谱图。
具体实施方式
[0063]
本发明实施例公开了一种分离检测富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0064]
本发明实施例中，
[0065]
按面积归一化法计算供试品溶液中对映异构体含量，只积分主峰和对映异构体峰。
[0066]
本发明中，dea表示二乙胺。
[0067]
本发明中，taf表示富马酸磷丙替诺福韦。
[0068]
本发明中，dad表示紫外检测器。
[0069]
实施例1
[0070]
仪器与条件
[0071]
色谱条件：
[0072]
色谱柱：chiralpak ia，4.6*250mm，5μm；
[0073]
检测器：dad；
[0074]
检测波长：260nm；
[0075]
流速：0.5ml/min；
[0076]
柱温：25℃；
[0077]
进样量：10μl；
[0078]
流动相a：正己烷；
[0079]
流动相b：乙醇:dea＝1000:1(v:v)；
[0080]
洗脱比例：流动相a:流动相b＝40:60(v:v)；
[0081]
运行时间：30min；
[0082]
实验步骤
[0083]
溶液配制：
[0084]
稀释剂/空白溶液：乙醇:正己烷＝6:4(v:v)；
[0085]
对映异构体储备液：取taf对映异构体对照品约30mg，精密称定至100ml容量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；
[0086]
供试加标溶液：取供试品25mg，精密称定至25ml容量瓶中，加入10ml乙醇和5.0ml对映异构体储备液至上述量瓶中，超声溶解后，用正己烷稀释至刻度，摇匀。
[0087]
操作：
[0088]
分别取空白溶液，供试品加标溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1、图2。
[0089]
图2中保留时间约16.97分钟的色谱峰为富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的色谱峰；图2中保留时间约19.16分钟的色谱峰为富马酸磷丙替诺福韦的色谱峰。
[0090]
图2证明，该检测方法能够将富马酸磷丙替诺福韦与其对应异构体分离，富马酸磷丙替诺福韦与其对映异构体的分离度是2.8。本法可以用于富马酸磷丙替诺福韦的对映异构体质量监测。
[0091]
实施例2
[0092]
仪器与条件
[0093]
色谱条件：
[0094]
色谱柱：chiralpak ia，4.6*250mm，5μm；
[0095]
检测器：dad；
[0096]
检测波长：260nm；
[0097]
流速：0.4ml/min；
[0098]
柱温：25℃；
[0099]
进样量：10μl；
[0100]
流动相a：正己烷；
[0101]
流动相b：乙醇:dea＝＝1000:1(v:v)；
[0102]
洗脱比例：流动相a:流动相b＝40:60(v:v)；
[0103]
运行时间：30min；
[0104]
实验步骤
[0105]
溶液配制：
[0106]
稀释剂/空白溶液：乙醇:正己烷＝6:4(v:v)；
[0107]
对映异构体储备液：取taf对映异构体对照品约30mg，精密称定至100ml容量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；
[0108]
供试加标溶液：取供试品25mg，精密称定至25ml容量瓶中，加入10ml乙醇和5.0ml对映异构体储备液至上述量瓶中，超声溶解后，用正己烷稀释至刻度，摇匀。
[0109]
操作：
[0110]
分别取空白溶液，供试品加标溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图3、图4。
[0111]
图4中保留时间约21.187分钟的色谱峰为富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的色谱峰；图4中保留时间约23.920分钟的色谱峰为富马酸磷丙替诺福韦的色谱峰。
[0112]
图4证明，当检测流速为0.4ml/min时，富马酸磷丙替诺福韦与其对映异构体的分离度是2.9。本法可以用于富马酸磷丙替诺福韦的对映异构体质量监测。
[0113]
实施例3
[0114]
仪器与条件
[0115]
色谱条件：
[0116]
色谱柱：chiralpak ia，4.6*250mm，5μm；
[0117]
检测器：dad；
[0118]
检测波长：260nm；
[0119]
流速：0.6ml/min；
[0120]
柱温：25℃；
[0121]
进样量：10μl；
[0122]
流动相a：正己烷；
[0123]
流动相b：乙醇:dea＝1000:1(v:v)；
[0124]
洗脱比例：流动相a:流动相b＝40:60(v:v)；
[0125]
运行时间：30min；
[0126]
实验步骤
[0127]
溶液配制：
[0128]
稀释剂/空白溶液：乙醇:正己烷＝6:4(v:v)；
[0129]
对映异构体储备液：取taf对映异构体对照品约30mg，精密称定至100ml容量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；
[0130]
供试加标溶液：取供试品25mg，精密称定至25ml容量瓶中，加入10ml乙醇和5.0ml对映异构体储备液至上述量瓶中，超声溶解后，用正己烷稀释至刻度，摇匀。
[0131]
操作：
[0132]
分别取空白溶液，供试品加标溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图5、图6。
[0133]
图6中保留时间约13.886分钟的色谱峰为富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的色谱峰；图6中保留时间约15.653分钟的色谱峰为富马酸磷丙替诺福韦的色谱峰。
[0134]
图6证明，当检测流速为0.6ml/min时，富马酸磷丙替诺福韦与其对映异构体的分离度是2.6。本法可以用于富马酸磷丙替诺福韦的对映异构体质量监测。
[0135]
实施例4
[0136]
仪器与条件
[0137]
色谱条件：
[0138]
色谱柱：chiralpak ia，4.6*250mm，5μm；
[0139]
检测器：dad；
[0140]
检测波长：260nm；
[0141]
流速：0.5ml/min；
[0142]
柱温：25℃；
[0143]
进样量：10μl；
[0144]
流动相a：正己烷；
[0145]
流动相b：乙醇:dea＝1000:1(v:v)；
[0146]
洗脱比例：流动相a:流动相b＝42:58(v:v)；
[0147]
运行时间：30min；
[0148]
实验步骤
[0149]
溶液配制：
[0150]
稀释剂/空白溶液：乙醇:正己烷＝6:4(v:v)；
[0151]
对映异构体储备液：取taf对映异构体对照品约30mg，精密称定至100ml容量瓶中，
用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；
[0152]
供试加标溶液：取供试品25mg，精密称定至25ml容量瓶中，加入10ml乙醇和5.0ml对映异构体储备液至上述量瓶中，超声溶解后，用正己烷稀释至刻度，摇匀。
[0153]
操作：
[0154]
分别取空白溶液，供试品加标溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图7、图8。
[0155]
图8中保留时间约17.311分钟的色谱峰为富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的色谱峰；图8中保留时间约19.524分钟的色谱峰为富马酸磷丙替诺福韦的色谱峰。
[0156]
图8证明，当流动相a：流动相b＝42:58(v:v)时，富马酸磷丙替诺福韦与其对映异构体的分离度是2.7。本法可以用于富马酸磷丙替诺福韦的对映异构体质量监测。
[0157]
实施例5
[0158]
仪器与条件
[0159]
色谱条件：
[0160]
色谱柱：chiralpak ia，4.6*250mm，5μm；
[0161]
检测器：dad；
[0162]
检测波长：260nm；
[0163]
流速：0.5ml/min；
[0164]
柱温：25℃；
[0165]
进样量：10μl；
[0166]
流动相a：正己烷；
[0167]
流动相b：乙醇:dea＝1000:1(v:v)；
[0168]
洗脱比例：流动相a:流动相b＝38:62(v:v)；
[0169]
运行时间：30min；
[0170]
实验步骤
[0171]
溶液配制：
[0172]
稀释剂/空白溶液：乙醇:正己烷＝6:4(v:v)；
[0173]
对映异构体储备液：取taf对映异构体对照品约30mg，精密称定至100ml容量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；
[0174]
供试加标溶液：取供试品25mg，精密称定至25ml容量瓶中，加入10ml乙醇和5.0ml对映异构体储备液至上述量瓶中，超声溶解后，用正己烷稀释至刻度，摇匀。
[0175]
操作：
[0176]
分别取空白溶液，供试品加标溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图9、图10。
[0177]
图8中保留时间约16.331分钟的色谱峰为富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的色谱峰；图8中保留时间约18.351分钟的色谱峰为富马酸磷丙替诺福韦的色谱峰。
[0178]
图10证明，当流动相a：流动相b＝38:62(v:v)时，富马酸磷丙替诺福韦与其对映异构体的分离度是2.7。本法可以用于富马酸磷丙替诺福韦的对映异构体质量监测。
[0179]
实施例6
[0180]
仪器与条件
[0181]
色谱条件：
[0182]
色谱柱：chiralpak ia，4.6*250mm，5μm；
[0183]
检测器：dad；
[0184]
检测波长：260nm；
[0185]
流速：0.5ml/min；
[0186]
柱温：20℃；
[0187]
进样量：10μl；
[0188]
流动相a：正己烷；
[0189]
流动相b：乙醇：dea＝1000:1(v:v)；
[0190]
洗脱比例：流动相a:流动相b＝40:60(v:v)；
[0191]
运行时间：30min；
[0192]
实验步骤
[0193]
溶液配制：
[0194]
稀释剂/空白溶液：乙醇:正己烷＝6:4(v:v)；
[0195]
对映异构体储备液：取taf对映异构体对照品约30mg，精密称定至100ml容量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；
[0196]
供试加标溶液：取供试品25mg，精密称定至25ml容量瓶中，加入10ml乙醇和5.0ml对映异构体储备液至上述量瓶中，超声溶解后，用正己烷稀释至刻度，摇匀。
[0197]
操作：
[0198]
分别取空白溶液，供试品加标溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图11、图12。
[0199]
图12中保留时间约17.858分钟的色谱峰为富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的色谱峰；图12中保留时间约20.224分钟的色谱峰为富马酸磷丙替诺福韦的色谱峰。
[0200]
图12证明，当柱温为20℃时，富马酸磷丙替诺福韦与其对映异构体的分离度是2.7。本法可以用于富马酸磷丙替诺福韦的对映异构体质量监测。
[0201]
实施例7
[0202]
仪器与条件
[0203]
色谱条件：
[0204]
色谱柱：chiralpak ia，4.6*250mm，5μm；
[0205]
检测器：dad；
[0206]
检测波长：260nm；
[0207]
流速：0.5ml/min；
[0208]
柱温：30℃；
[0209]
进样量：10μl；
[0210]
流动相a：正己烷；
[0211]
流动相b：乙醇：dea＝1000:1(v:v)；
[0212]
洗脱比例：流动相a:流动相b＝40:60(v:v)；
[0213]
运行时间：30min；
[0214]
实验步骤
[0215]
溶液配制：
[0216]
稀释剂/空白溶液：乙醇:正己烷＝6:4(v:v)；
[0217]
对映异构体储备液：取taf对映异构体对照品约30mg，精密称定至100ml容量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；
[0218]
供试加标溶液：取供试品25mg，精密称定至25ml容量瓶中，加入10ml乙醇和5.0ml对映异构体储备液至上述量瓶中，超声溶解后，用正己烷稀释至刻度，摇匀。
[0219]
操作：
[0220]
分别取空白溶液，供试品加标溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图13、图14。
[0221]
图14中保留时间约15.606分钟的色谱峰为富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的色谱峰；图14中保留时间约17.492分钟的色谱峰为富马酸磷丙替诺福韦的色谱峰。
[0222]
图14证明，当柱温为30℃时，富马酸磷丙替诺福韦与其对映异构体的分离度是2.7。本法可以用于富马酸磷丙替诺福韦的对映异构体质量监测。
[0223]
实施例8
[0224]
仪器与条件
[0225]
色谱条件：
[0226]
色谱柱：chiralpak ia，4.6*250mm，5μm；
[0227]
检测器：dad；
[0228]
检测波长：260nm；
[0229]
流速：0.5ml/min；
[0230]
柱温：25℃；
[0231]
进样量：10μl；
[0232]
流动相a：正己烷；
[0233]
流动相b：异丙醇:dea＝＝1000:1(v:v)；
[0234]
洗脱比例：流动相a:流动相b＝40:60(v:v)；
[0235]
运行时间：30min；
[0236]
实验步骤
[0237]
溶液配制：
[0238]
稀释剂/空白溶液：乙醇:正己烷＝6:4(v:v)；
[0239]
对映异构体储备液：取taf对映异构体对照品约30mg，精密称定至100ml容量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；
[0240]
供试加标溶液：取供试品25mg，精密称定至25ml容量瓶中，加入10ml乙醇和5.0ml对映异构体储备液至上述量瓶中，超声溶解后，用正己烷稀释至刻度，摇匀。
[0241]
操作：
[0242]
分别取空白溶液，供试品加标溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图15、图16。
[0243]
图16中保留时间约14.413分钟的色谱峰为富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的色谱峰；图16中保留时间约22.280分钟的色谱峰为富马酸磷丙替诺福韦的色谱峰。
[0244]
图16证明，当流动相b更换为异丙醇(0.1％dea)时，富马酸磷丙替诺福韦与其对映
异构体的分离度是6.8。本法可以用于富马酸磷丙替诺福韦的对映异构体质量监测。
[0245]
实施例9-方法系统适用性
[0246]
仪器与条件
[0247]
色谱条件：
[0248]
色谱柱：chiralpak ia，4.6*250mm，5μm；
[0249]
检测器：dad；
[0250]
检测波长：260nm；
[0251]
流速：0.5ml/min；
[0252]
柱温：25℃；
[0253]
进样量：10μl；
[0254]
流动相a：正己烷；
[0255]
流动相b：乙醇：dea＝1000:1(v:v)；
[0256]
洗脱比例：流动相a:流动相b＝40:60(v:v)；
[0257]
运行时间：30min；
[0258]
实验步骤
[0259]
溶液配制：
[0260]
空白溶液/稀释剂：乙醇:正己烷＝6:4；
[0261]
供试品溶液：取供试品25mg，精密称定至25ml容量瓶中，先加入约15ml乙醇超声溶解，再用正己烷稀释至刻度，摇匀；平行配制2份；
[0262]
定量限溶液：取供试品溶液1.0ml至100ml容量瓶当中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀；再取5.0ml上述溶液至100ml容量瓶当中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀；
[0263]
检测限溶液：取定量限溶液3.0ml至10ml容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
[0264]
对映异构体储备液：取taf对映异构体对照品约30mg，精密称定至100ml容量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；再取上述溶液1.0ml至50ml，加入30ml乙醇，再用正己烷稀释至刻度，摇匀；
[0265]
供试品加标溶液：取供试品25mg，精密称定至25ml容量瓶中，加入10ml乙醇和5.0ml对映异构体储备液至上述量瓶中，超声溶解后，用正己烷稀释至刻度，摇匀。
[0266]
操作：
[0267]
待系统平衡后，取上述各溶液按方法描述的色谱条件，空白溶液和检测限溶液各进1针，供试品加标溶液进1针，记录色谱图。报告检测限溶液中主峰的信噪比(s/n)；供试品加标溶液中主峰与对映异构体峰的分离度。结果如下表所示：
[0268]
结果：
[0269]
[0270][0271]
实施例10-方法专属性
[0272]
仪器与条件
[0273]
色谱条件：
[0274]
同实施例9。
[0275]
实验步骤
[0276]
空白溶液/稀释剂：乙醇:正己烷＝6:4；
[0277]
供试品溶液：取供试品25mg，精密称定至25ml容量瓶中，先加入约15ml乙醇超声溶解，再用正己烷稀释至刻度，摇匀；平行配制2份；
[0278]
对映异构体储备液：取taf对映异构体对照品约30mg，精密称定至100ml容量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；再取上述溶液1.0ml至50ml，加入30ml乙醇，再用正己烷稀释至刻度，摇匀；
[0279]
供试品加标溶液：取供试品25mg，精密称定至25ml容量瓶中，加入10ml乙醇和5.0ml对映异构体储备液至上述量瓶中，超声溶解后，用正己烷稀释至刻度，摇匀。
[0280]
峰鉴别溶液：取5.0ml对映异构体储备液至上述25ml容量瓶中，加入10ml乙醇，再用正己烷稀释至刻度，摇匀。
[0281]
操作：
[0282]
待系统适用性合格后，取上述各溶液按方法描述的色谱条件，每份各进1针，记录色谱图。报告空白溶液、峰鉴别溶液、供试品溶液、供试品加标溶液中对映异构体的保留时间、峰面积及主峰与对映异构体峰的分离度。
[0283]
结果：
[0284]
[0285][0286]
实施例11-方法定量限及检测限
[0287]
仪器与条件
[0288]
色谱条件：
[0289]
同实施例9。
[0290]
实验步骤
[0291]
溶液配制：
[0292]
定量限溶液：取供试品溶液1.0ml至100ml容量瓶当中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀；再取5.0ml上述溶液至100ml容量瓶当中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀；
[0293]
检测限溶液：取定量限溶液3.0ml至10ml容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
[0294]
操作：
[0295]
待系统适用性合格后，按方法描述的色谱条件，取空白溶液进1针，分别取检测限和定量限溶液连续进3针，记录色谱图。报告检测限和定量限溶液主峰的峰面积、信噪比(s/n)；计算检测限和定量限浓度及该浓度相当于供试品溶液浓度的百分比。
[0296]
结果：
[0297]
检测限
[0298][0299]
定量限
[0300]
[0301]

技术特征：
1.一种分离检测富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的方法，其特征在于，包括：采用直链淀粉-三(3,5二甲基苯基氨基甲酸酯)为填料的色谱柱，流动相分为a相和b相，a相为正己烷或正庚烷，b相为乙醇和二乙胺的混合溶液或异丙醇和二乙胺的混合溶液。2.根据权利要求1所述的方法，所述的色谱柱选自chiralpak ia、chiralpak ic、chiralpak if、chiralpak ie色谱柱中的至少一种。3.根据权利要求1或2所述的方法，所述b相中，二乙胺与乙醇的体积比为1:1000至5:1000；和/或二乙胺与异丙醇的体积比为1:1000至5:1000。4.根据权利要求1-3任一所述的方法，所述a相与b相的体积比为20:80至80:20。5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述的方法包含以下步骤：1)取含富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的待测样品适量，加入溶剂溶解，混匀；2)设置仪器参数：检测器、色谱柱、波长、流动相的流速、柱温；3)取一定量步骤1)的溶液，注入高效液相色谱仪中，完成富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的分离测定。6.根据权利要求5所述的方法，所述的溶剂为乙醇与正己烷的混合溶液。7.根据权利要求5所述的方法，每1ml所述溶剂含待测样品0.5mg～4mg。8.根据权利要求5-7任一所述的方法，其中，流动相的流速为0.3ml/min～1.5ml/min；检测器为dad；波长为200nm-280nm；色谱柱柱箱温度为15℃～40℃。9.根据权利要求5-8任一所述的方法，其中，步骤3)注入的样品溶液为2μl～40μl。10.根据权利要求5-8任一所述的方法，其中，a相与b相的体积比为40:60。

技术总结
本发明涉及一种分离检测富马酸磷丙替诺福韦对映异构体的方法，属于分析化学领域。所述方法包括：采用直链淀粉-三(3,5二甲基苯基氨基甲酸酯)为填料的色谱柱，流动相分为A相和B相，A相为正己烷或正庚烷，B相为乙醇和二乙胺的混合溶液或异丙醇和二乙胺的混合溶液。本发明的方法灵敏度高，专属性好，准确度可靠。准确度可靠。


技术研发人员：范晓梅 栾保磊 卢凌春 饶万兵 周凤姣 李艳华
受保护的技术使用者：广东东阳光药业有限公司
技术研发日：2020.11.23
技术公布日：2022/5/25