一种白色念珠菌检测粉剂及其制备方法与流程

1.本发明涉及检测制剂技术领域，尤其涉及一种白色念珠菌检测粉剂及其制备方法。


背景技术：

2.荧光检测法是一种已有较多应用的快速检测真菌方法。市场上流通的荧光检测真菌试剂盒，主要成分为荧光试剂、促溶剂和背景染料。目前常用的荧光试剂为calfluor white(cfw),能与真菌细胞壁内的几丁质成分结合，在紫外的激发下发生蓝色荧光。但cfw特异性结合能力较差，可以与大部分真菌结合，需要另外人工判断菌属，同时淬灭时间短，能使背景组织发出明亮的荧光，影响真菌与背景的判断。所以cfw一般需要联合背景染料以去除背景干扰，利用促溶剂分解待测样品角质层。后来市场上出现利用重组几丁质酶标联的荧光素试剂盒检测真菌，此类方法提高了特异性和稳定性，但是生物酶较容易失活不易保存，而且几丁质酶检测法是广谱真菌检测方法，不能特异性识别白念珠菌。
3.其次，现有的的荧光检测试剂均为溶液形式，使用和存储过程容易发生降解，同时溶液形式的检测试剂也不适应长途运输，溶液剂比粉剂重量大，从而增了运输成本及风险。因此，将溶液剂制备成冻干粉剂可以有效解决上述问题，但是，现有的荧光检测液的冻干粉剂的制备存在几个方面的不足：冻干工艺不够成熟，在实际大规模冻干过程中，冻干粉剂合格率不高，对生产成本产生重要影响；2.冻干粉剂中水分难以去除，结构容易塌陷萎缩；3.冻干周期长，使得实际冻干产能较低，能耗过大。
4.基于上述情况，本发明提出了一种白色念珠菌检测粉剂及其制备方法，可有效解决以上问题。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种白色念珠菌检测粉剂及其制备方法。
6.为实现上述目的，本发明提供了一种白色念珠菌检测粉剂，所述检测粉剂由以下原料组成：粘附肽、链霉亲和素荧光素复合物、冻干保护剂、c2～c4的醇溶液、渗透剂、稳定剂、抗猝灭剂，所述c2～c4的醇溶液浓度为95％～98％。
7.优选地，所述冻干保护剂包括蔗糖、麦芽糊精、乳糖、β-环糊精、食盐、淀粉的其中一种或两种以上的组合。
8.优选地，所述冻干保护剂为β-环糊精。
9.优选地，所述c2或c4的醇溶液包括乙醇溶液、正丁醇溶液，异丁醇溶液，仲丁醇溶液，叔丁醇溶液的其中一种。
10.优选地，所述荧光素为异硫氰酸荧光素、四甲基罗丹明异硫氰酸中的其中一种。
11.优选地，所述渗透剂为二甲基亚砜、二甲基乙酰胺中的其中一种。
12.优选地，所述稳定剂为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠中的至少一种。
13.优选地，所述抗淬灭剂为丙三醇、抗坏血酸中的至少一种。
14.优选地，所述检测粉剂由以下重量份的原料组成：粘附肽5～15份、链霉亲和素异硫氰酸荧光素复合物80～90份、β-环糊精200～400份、98％叔丁醇溶液1000～1400份、二甲基乙酰胺200～300份、磷酸二氢钾120～160份、丙三醇50～150份。
15.本发明还提供一种白色念珠菌检测粉剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
16.(1)将粘附肽、98％叔丁醇溶液与链霉亲和素荧光素复合物混合，在室温下孵育30～40min，得到复合物的叔丁醇溶液；
17.(2)将得到复合物的叔丁醇溶液与β-环糊精、二甲基乙酰胺、磷酸二氢钾、丙三醇混合均匀后，静置1～2h，去除不溶物，得到预冻液；
18.(3)预冻：将预冻液置于冻干柜中，在半小时内降温至5℃～-10℃，并在该温度区间维持30～40min；
19.(4)冻结及降压：在半小时内降温至-15℃～-25℃，并在该温度区间维持30～40min，随后调整真空度为5～10pa，维持2～2.5h；
20.(5)升华：升温至-5℃～-10℃，并在该温度区间维持2.5～3h；随后调整真空度为25～30pa，维持2.5～3h；
21.(6)解析干燥：升温至20～25℃，调整真空度至15～20pa，维持2～2.5h；负压压塞后，取出物料2～8℃低温保存。
22.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
23.1.本发明通过使用叔丁醇溶液为整体的溶液，叔丁醇性质较为稳定，避免在冻干过程中产生杂质，从而影响荧光试剂的使用效果；其次，产品中含水量较低，有利于长期存放保存。
24.2.本发明通过使用β-环糊精作为冻干保护剂，相较于使用蔗糖作为保护剂，能大大加快产品的重新形成溶液剂的速度，且冻干效果好，成型率高。
25.3.本发明原材料在国内充足，价格适宜，使其规模化生产没有太高的成本限制；同时，制备方法简单，总体生产成本不高，有利于工业的大规模生产。
具体实施方式
26.实施例1
27.按表1称量具体原料，其余步骤制备步骤如下：
28.(1)将粘附肽、98％叔丁醇溶液与链霉亲和素荧光素复合物混合，在室温下孵育30min，得到复合物的叔丁醇溶液；
29.(2)将得到复合物的叔丁醇溶液与β-环糊精、二甲基乙酰胺、磷酸二氢钾、丙三醇混合均匀后，静置1h，去除不溶物，得到预冻液；
30.(3)预冻：将预冻液置于冻干柜中，在半小时内降温至5℃，并在该温度区间维持40min；
31.(4)冻结及降压：在半小时内降温至-15℃，并在该温度区间维持40min，随后调整真空度为5pa，维持2.5h；
32.(5)升华：升温至-5℃，并在该温度区间维持2.5h；随后调整真空度为25pa，维持3h；
33.(6)解析干燥：升温至20℃，调整真空度至15pa，维持2.5h；负压压塞后，取出物料2～8℃低温保存。
34.实施例2
35.按表1称量具体原料，其余步骤制备步骤如下：
36.(1)将粘附肽、98％叔丁醇溶液与链霉亲和素荧光素复合物混合，在室温下孵育40min，得到复合物的叔丁醇溶液；
37.(2)将得到复合物的叔丁醇溶液与β-环糊精、二甲基乙酰胺、磷酸二氢钾、丙三醇混合均匀后，静置2h，去除不溶物，得到预冻液；
38.(3)预冻：将预冻液置于冻干柜中，在半小时内降温至-10℃，并在该温度区间维持30min；
39.(4)冻结及降压：在半小时内降温至-25℃，并在该温度区间维持30min，随后调整真空度为10pa，维持2h；
40.(5)升华：升温至-10℃，并在该温度区间维持3h；随后调整真空度为30pa，维持2.5h；
41.(6)解析干燥：升温至25℃，调整真空度至20pa，维持2h；负压压塞后，取出物料2～8℃低温保存。
42.实施例3
43.按表1称量具体原料，其余步骤制备步骤如下：
44.(1)将粘附肽、98％叔丁醇溶液与链霉亲和素荧光素复合物混合，在室温下孵育40min，得到复合物的叔丁醇溶液；
45.(2)将得到复合物的叔丁醇溶液与β-环糊精、二甲基乙酰胺、磷酸二氢钾、丙三醇混合均匀后，静置2h，去除不溶物，得到预冻液；
46.(3)预冻：将预冻液置于冻干柜中，在半小时内降温至-10℃，并在该温度区间维持40min；
47.(4)冻结及降压：在半小时内降温至-25℃，并在该温度区间维持40min，随后调整真空度为10pa，维持2.5h；
48.(5)升华：升温至-10℃，并在该温度区间维持3h；随后调整真空度为30pa，维持3h；
49.(6)解析干燥：升温至25℃，调整真空度至20pa，维持2.5h；负压压塞后，取出物料2～8℃低温保存。
50.对比例1
51.按表1称量具体原料，其余步骤制备步骤如下：
52.(1)将粘附肽、水与链霉亲和素荧光素复合物混合，在室温下孵育40min，得到复合物溶液；
53.(2)将得到复合物溶液与β-环糊精、二甲基乙酰胺、磷酸二氢钾、丙三醇混合均匀后，静置2h，去除不溶物，得到预冻液；
54.(3)预冻：将预冻液置于冻干柜中，在半小时内降温至-10℃，并在该温度区间维持40min；
55.(4)冻结及降压：在半小时内降温至-25℃，并在该温度区间维持40min，随后调整真空度为10pa，维持2.5h；
56.(5)升华：升温至-10℃，并在该温度区间维持3h；随后调整真空度为30pa，维持3h；
57.(6)解析干燥：升温至25℃，调整真空度至20pa，维持2.5h；负压压塞后，取出物料2～8℃低温保存。
58.对比例2
59.按表1称量具体原料，其余步骤制备步骤如下：
60.(1)将粘附肽、98％叔丁醇溶液与链霉亲和素荧光素复合物混合，在室温下孵育40min，得到复合物的叔丁醇溶液；
61.(2)将得到复合物的叔丁醇溶液与蔗糖、二甲基乙酰胺、磷酸二氢钾、丙三醇混合均匀后，静置2h，去除不溶物，得到预冻液；
62.(3)预冻：将预冻液置于冻干柜中，在半小时内降温至-10℃，并在该温度区间维持40min；
63.(4)冻结及降压：在半小时内降温至-25℃，并在该温度区间维持40min，随后调整真空度为10pa，维持2.5h；
64.(5)升华：升温至-10℃，并在该温度区间维持3h；随后调整真空度为30pa，维持3h；
65.(6)解析干燥：升温至25℃，调整真空度至20pa，维持2.5h；负压压塞后，取出物料2～8℃低温保存。
66.表1
[0067][0068][0069]
实施例4性能测试
[0070]
取出物料，观察冻干效果。测试结果见表2。
[0071]
表2性能测试结果
[0072] 实施例1实施例2实施例3对比例1对比例2冻干效果成干粉末状成干粉末状成干粉末状成干粉末状部分未成形复溶性(s)29283231100含水量％1.31.51.610.21.8
[0073]
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述
并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。