本文描述了由人血浆制备的人血清白蛋白（human serum albumin, hsa）制剂及其制备方法。所述制剂具有一定量的c1酯酶（c1 esterase, c1e）抑制剂活性，并且展现出对丝氨酸蛋白酶活性的稳定性。
背景技术：
1、人血清白蛋白（hsa）制剂在治疗上有用，并且广泛用于增加心血管手术中的血容量，以及其他用途，如治疗血容量过低（低血容量）、低白蛋白血症（低白蛋白）、烧伤、急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome, ards）、肾病、急性肝衰竭以及新生儿溶血病，或与肾脏透析和体外循环(cardiopulmonary bypass)手术结合使用。
2、用于治疗用途的hsa制剂可以通过分级分离从收集（捐赠）的人血浆来制备。从人血浆中制备的hsa制剂通常包含前激肽释放酶激活剂（pka）（也称为因子xiia）作为污染物。pka是hageman因子（因子xii）的激活形式，是一种丝氨酸蛋白酶的酶原。pka是蛋白酶级联反应的一部分，催化前激肽释放酶（因子xi）转化为激肽释放酶（因子xia），后者是另一种丝氨酸蛋白酶。激肽释放酶作用于激肽原，并且催化激肽（如缓激肽）的形成。缓激肽是激肽类蛋白质中具有生理和药理活性的多肽，其是强效的内皮依赖性血管舒张剂和轻型利尿剂，可能导致血压降低。在快速输注hsa制剂过程中，高含量的缓激肽可能导致低血压和血管性水肿，这可能是医疗紧急情况。
3、因此，需要低丝氨酸蛋白酶活性的hsa制剂，包括低pka活性的hsa制剂，以及制备此类hsa制剂的方法。
技术实现思路
0、发明概述
1、本文提供了制备人血清白蛋白制剂的方法，包括从人血浆的含白蛋白级分中提取一定量的c1酯酶抑制剂（c1e-抑制剂），从而获得白蛋白制剂，所述白蛋白制剂包含其量足以有效地抑制白蛋白制剂中的蛋白酶活性的c1e-抑制剂。在一些实施方案中，所述白蛋白制剂含有至少5% w/v的白蛋白含量，并且在巴氏消毒和在18-25℃的温度下存储1个月后，所述白蛋白制剂具有下述两项之一或两者：(i) 丝氨酸蛋白酶活性小于或等于0.8 nkat/g总蛋白；以及 (ii) 前激肽释放酶激活剂（pka）活性小于或等于35 iu/ml总蛋白。在一些实施方案中，所述方法还包括，在同一提取步骤或分开的提取步骤中，从所述人血浆的含白蛋白级分中提取一种或多种额外的丝氨酸蛋白酶抑制剂，所述丝氨酸蛋白酶抑制剂选自α1-蛋白酶抑制剂、抗凝血酶iii、α1-抗胰凝乳蛋白酶、α2-抗纤溶酶、α2-巨球蛋白、间-α-胰蛋白酶抑制剂和β1-抗胶原酶（胶原酶）。
2、所述方法可能包括将人血浆的第一含白蛋白级分与人血浆的第二含白蛋白级分混合以获得所述白蛋白制剂，其中所述人血浆的第二含白蛋白级分是通过包括从人血浆的含白蛋白级分中提取一定量的c1e-抑制剂的过程获得的，并且其中所述人血浆的第一含白蛋白级分没有经过所述提取。所述方法可能进一步包括，在混合之前，从所述人血浆的第二含白蛋白级分中提取一种或多种额外的丝氨酸蛋白酶抑制剂，所述丝氨酸蛋白酶抑制剂选自α1-蛋白酶抑制剂、抗凝血酶iii、α1-抗胰凝乳蛋白酶、α2-抗纤溶酶、α2-巨球蛋白、间-α-胰蛋白酶抑制剂和β1-抗胶原酶（胶原酶）。
3、在一些实施方案中，进行提取的人血浆级分是贫冷沉淀血浆(cyro-poorplasma)。在一些实施方案中，进行提取的人血浆级分是人血浆分级分离过程中的人血浆乙醇级分。
4、在一些实施方案中，进行提取的人血浆级分选自：
5、cohn/oncley工业血浆分级分离中的上清液i或不同血浆分级分离过程中的等效级分；
6、cohn/oncley工业血浆分级分离中的上清液ii + iii或不同血浆分级分离过程中的等效级分；
7、cohn/oncley工业血浆分级分离中的上清液i + ii + iii或不同血浆分级分离过程中的等效级分；
8、cohn/oncley工业血浆分级分离中的i+ii+iii+iv滤液级分或不同血浆分级分离过程中的等效级分；
9、cohn/oncley工业血浆分级分离中的上清液iv或不同血浆分级分离过程中的等效级分；
10、cohn/oncley工业血浆分级分离中的上清液iv1或不同血浆分级分离过程中的等效级分；
11、cohn/oncley工业血浆分级分离中的上清液iv4或不同血浆分级分离过程中的等效级分；
12、cohn/oncley工业血浆分级分离中的级分v沉淀物或不同血浆分级分离过程中的等效级分。
13、在一些实施方案中，进行提取的人血浆级分选自：
14、kistler/nitschmann工业血浆分级分离中的上清液a；
15、kistler/nitschmann工业血浆分级分离中的滤液a；
16、kistler/nitschmann工业血浆分级分离中的级分i+ii+iii悬浮液；
17、kistler/nitschmann工业血浆分级分离中的上清液iv；以及
18、kistler/nitschmann工业血浆分级分离中的沉淀c。
19、在任何实施方案中，所述提取可能包括在固相支持物上的吸附。在一些实施方案中，在固相支持物上的吸附仅部分地去除进行提取的所述含白蛋白的级分中存在的c1e-抑制剂。在一些实施方案中，在固相支持物上的吸附仅部分地去除进行提取的所述含白蛋白的级分中存在的一种或多种额外的蛋白酶抑制剂。在一些实施方案中，所述的提取包括在强阴离子交换树脂上的色谱步骤，任选地，其中所述的强阴离子交换树脂包含季氨乙基（qae）基团。
20、在一些实施方案中，所述方法包括，在所述提取之前，将进行提取的人血浆级分在弱阴离子交换树脂上进行色谱步骤，以去除凝血酶原复合物（ptc），任选地，所述弱阴离子交换树脂包含二乙基氨基乙基（deae）基团。
21、在一些实施方案中，进行混合的所述第一和人血浆的第二含白蛋白级分是同一血浆分级分离过程中相同级分的滤液。在一些实施方案中，进行混合的所述第一和人血浆的第二含白蛋白级分是级分v沉淀物。在一些实施方案中，进行提取的人血浆级分是贫冷沉淀血浆，并且所述方法进一步包括分级分离所述提取的贫冷沉淀血浆，以获得级分v沉淀物，其中进行混合的所述第一和人血浆的第二含白蛋白级分是级分v沉淀物。在一些实施方案中，进行提取的人血浆级分是级分v沉淀物，任选地，其中所述的级分v沉淀物在所述提取前被重悬以获得溶液或悬浮液，并且其中进行混合的所述第一和人血浆的第二含白蛋白级分是级分v沉淀物。在一些实施方案中，进行提取的人血浆级分是级分v悬浮液。在一些实施方案中，进行提取的人血浆级分是级分c沉淀物，任选地，其中所述级分c沉淀物在提取前被重悬以获得溶液或悬浮液，并且其中进行混合的所述第一和人血浆的第二含白蛋白级分是级分c沉淀物。
22、在一些实施方案中，进行混合的所述第一和人血浆的第二含白蛋白级分的重量：重量比是10:90至90:10。在一些实施方案中，进行混合的所述第一和人血浆的第二含白蛋白级分的重量：重量比选自：10:90、15:85、20:80、25:75、30:70、33:67、40:60、50:50、60:40、67:33、70:30、75:25、80:20、85:15和90:10。在一些实施方案中，进行混合的所述第一和人血浆的第二含白蛋白级分的重量：重量比选自：10:90、15:85、20:80、25:75、30:70、33:67和40:60。在一些实施方案中，进行混合的所述第一和人血浆的第二含白蛋白级分的重量：重量比是从大约25:75到大约33:67。在一些实施方案中，进行混合的所述第一和人血浆的第二含白蛋白级分的重量：重量比是大约25:75。在一些实施方案中，进行混合的所述第一和人血浆的第二含白蛋白级分的重量：重量比是大约33:67。
23、在任何实施方案中，所述方法可能进一步包括对所述白蛋白制剂进行巴氏消毒。
24、在一些实施方案中，所述方法包括：将人血浆的第一含白蛋白级分与人血浆的第二含白蛋白级分以大约33:67的重量：重量比混合，以获得所述白蛋白制剂，其中所述第一和人血浆的第二含白蛋白级分是cohn/oncley工业血浆分级分离中的级分v沉淀物或不同血浆分级分离过程中的等效级分，其中所述人血浆的第二含白蛋白级分是通过包括下述的过程获得的：(i) 在弱阴离子交换树脂上的色谱步骤，用于去除凝血酶原复合物（ptc），任选地，其中所述弱阴离子交换树脂包含deae基团；(ii) 通过在强阴离子交换树脂上的色谱步骤提取一定量的c1e-抑制剂，任选地，其中所述强阴离子交换树脂包含季氨乙基（qae）基团，(iii) 任选地，提取一种或多种额外的丝氨酸蛋白酶抑制剂，所述丝氨酸蛋白酶抑制剂选自α1-蛋白酶抑制剂、抗凝血酶iii、α1-抗胰凝乳蛋白酶、α2-抗纤溶酶、α2-巨球蛋白、间-α-胰蛋白酶抑制剂和β1-抗胶原酶（胶原酶），以及，(iv) 如果在步骤 (i) 中使用的所述含白蛋白的级分不是cohn/oncley工业血浆分级分离的级分v沉淀物或不同血浆分级分离过程的等效级分，则分级分离所述级分，以获得级分v沉淀物或不同血浆分级分离过程的等效级分；所述人血浆的第一含白蛋白级分不经过所述的提取；以及对所述白蛋白制剂进行巴氏消毒。
25、在一些实施方案中，所述白蛋白制剂具有至少5% w/v的白蛋白含量，并且，在巴氏消毒和在18-25℃的温度下存储1个月后，所述白蛋白制剂具有小于或等于20 iu/ml的pka活性。在一些实施方案中，所述白蛋白制剂具有至少5% w/v的白蛋白含量、大于0.0025 iu/kg总蛋白的c1e-抑制剂活性，以及小于或等于35 iu/ml的pka活性。
26、在一些实施方案中，所述方法包括将人血浆的第一含白蛋白级分与人血浆的第二含白蛋白级分混合，以获得所述白蛋白制剂，其中所述人血浆的第一含白蛋白级分是通过包括从人血浆的含白蛋白级分中提取第一量的c1e-抑制剂的过程获得的，并且其中所述人血浆的第二含白蛋白级分是通过包括从人血浆的含白蛋白级分中提取第二量的c1e-抑制剂的过程获得的。还提供了通过这种方法制备的人白蛋白制剂。
27、本文还提供一种人白蛋白制剂，其白蛋白含量为至少5% w/v、c1e-抑制剂活性为大于0.0025 iu/kg总蛋白以及pka活性为小于或等于35 iu/ml。
28、本文还提供上文所述的方法制备的人白蛋白制剂，其中，在巴氏消毒和在18-25℃的温度下存储选自1个月、3个月、6个月和12个月的一段时间后，其pka活性为小于或等于20iu/ml，或者小于或等于10 iu/ml，或者小于或等于5 iu/ml。
29、本文还提供上文所述的方法制备的人白蛋白制剂，其中，在巴氏消毒和在18-25℃的温度下存储选自1个月、3个月和6个月的一段时间后，其丝氨酸蛋白酶活性为小于或等于8.0 nkat/g总蛋白，或者小于或等于0.06 nkat/g总蛋白，或者小于或等于0.01 nkat/g总蛋白。
30、在上述任何实施方案中的一些实施方案中，所述白蛋白制剂可能具有大约5% w/v的白蛋白含量。在上述任何实施方案中的一些实施方案中，所述白蛋白制剂可能具有大约25% w/v的白蛋白含量。
1.一种制备人血清白蛋白制剂的方法，包括从含白蛋白的人血浆级分中提取一定量的c1酯酶抑制剂（c1e-抑制剂），从而获得白蛋白制剂，所述白蛋白制剂包含足够量的c1e-抑制剂以有效地抑制所述白蛋白制剂中的蛋白酶活性。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述白蛋白制剂具有至少5% w/v的白蛋白含量，并且在巴氏消毒和在18-25℃的温度下存储1个月后，所述白蛋白制剂具有下述两项之一或两者：(i) 丝氨酸蛋白酶活性小于或等于0.8 nkat/g总蛋白；以及 (ii) 前激肽释放酶激活剂（pka）活性小于或等于35 iu/ml总蛋白。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述方法还包括，在同一提取步骤或分开的提取步骤中，从所述含有白蛋白的人血浆级分中提取一种或多种额外的丝氨酸蛋白酶抑制剂，所述丝氨酸蛋白酶抑制剂选自α1-蛋白酶抑制剂、抗凝血酶iii、α1-抗胰凝乳蛋白酶、α2-抗纤溶酶、α2-巨球蛋白、间-α-胰蛋白酶抑制剂和β1-抗胶原酶（胶原酶）。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述方法包括将第一含白蛋白的人血浆级分与第二含白蛋白的人血浆级分混合以获得所述白蛋白制剂，其中所述第二含白蛋白的人血浆级分是通过包括从含有白蛋白的人血浆成分中提取一定量的c1e-抑制剂的过程获得的，并且其中所述第一含白蛋白的人血浆级分没有经过所述提取。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述方法进一步包括，在混合之前，从所述第二含白蛋白的人血浆级分中提取一种或多种额外的丝氨酸蛋白酶抑制剂，所述丝氨酸蛋白酶抑制剂选自α1-蛋白酶抑制剂、抗凝血酶iii、α1-抗胰凝乳蛋白酶、α2-抗纤溶酶、α2-巨球蛋白、间-α-胰蛋白酶抑制剂和β1-抗胶原酶（胶原酶）。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中进行提取的人血浆级分是贫冷沉淀血浆(cyro-poor plasma)。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中进行提取的人血浆成分是人血浆分级分离过程中的人血浆乙醇级分。
8.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中进行提取的人血浆级分选自：
9.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中进行提取的人血浆级分选自：
10.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述提取包括在固相支持物上的吸附。
11.根据权利要求10所述的方法，其中在固相支持物上的吸附仅部分地去除进行提取的所述含白蛋白级分中存在的c1e-抑制剂。
12.根据权利要求10或权利要求11所述的方法，其中在固相支持物上的吸附仅部分地去除进行提取的所述含白蛋白级分中存在的一种或多种额外的蛋白酶抑制剂。
13.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述提取包括在强阴离子交换树脂上的色谱步骤，任选地，其中所述强阴离子交换树脂包含季氨乙基（qae）基团。
14.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述方法包括，在所述提取之前，将进行提取的人血浆级分在弱阴离子交换树脂上进行色谱步骤，以去除凝血酶原复合物（ptc），任选地，其中所述弱阴离子交换树脂包含二乙基氨基乙基（deae）基团。
15.根据权利要求4至14中任一项所述的方法，其中进行混合的所述第一和第二含白蛋白的人血浆级分是同一血浆分级分离过程中相同级分的滤液。
16.根据权利要求4至15中任一项所述的方法，其中进行混合的所述第一和第二含白蛋白的人血浆级分是级分v沉淀物。
17.根据权利要求4至16中任一项所述的方法，其中进行提取的人血浆成分是贫冷沉淀血浆，并且所述方法进一步包括分级分离所述提取的贫冷沉淀血浆，以获得级分v沉淀物，其中进行混合的所述第一和第二含白蛋白的人血浆级分是级分v沉淀物。
18.根据权利要求4至16中任一项所述的方法，其中进行提取的人血浆成分是级分v沉淀物，任选地，其中所述级分v沉淀物在所述提取前被重悬以获得溶液或悬浮液，并且其中进行混合的所述第一和第二含白蛋白的人血浆级分是级分v沉淀物。
19.根据权利要求4至16中任一项所述的方法，其中进行提取的人血浆成分是级分v悬浮液。
20.根据权利要求4至16中任一项所述的方法，其中进行提取的人血浆成分是级分c沉淀物，任选地，其中所述级分c沉淀物在提取前被重悬以获得溶液或悬浮液，并且其中进行混合的所述第一和第二含白蛋白的人血浆级分是级分c沉淀物。
21.根据权利要求4至20中任一项所述的方法，其中进行混合的所述第一和第二含白蛋白的人血浆级分的重量：重量比是10:90至90:10。
22.根据权利要求4至20中任一项所述的方法，其中进行混合的所述第一和第二含白蛋白的人血浆级分的重量：重量比选自：10:90、15:85、20:80、25:75、30:70、33:67、40:60、50:50、60:40、67:33、70:30、75:25、80:20、85:15和90:10。
23.根据权利要求4至20中任一项所述的方法，其中进行混合的所述第一和第二含白蛋白的人血浆级分的重量：重量比选自：10:90、15:85、20:80、25:75、30:70、33:67和40:60。
24.根据权利要求4至20中任一项所述的方法，其中进行混合的所述第一和第二含白蛋白的人血浆级分的重量：重量比是从大约25:75到大约33:67。
25.根据权利要求4至20中任一项所述的方法，其中进行混合的所述第一和第二含白蛋白的人血浆级分的重量：重量比是大约25:75。
26.根据权利要求4至20中任一项所述的方法，其中进行混合的所述第一和第二含白蛋白的人血浆级分的重量：重量比是大约33:67。
27.根据前述任一项权利要求所述的方法，进一步包括对所述白蛋白制剂进行巴氏消毒。
28.根据权利要求4所述的方法，其中所述方法包括：
29.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述白蛋白制剂具有至少5% w/v的白蛋白含量，并且，在巴氏消毒和在18-25℃的温度下存储1个月后，所述白蛋白制剂具有小于或等于20 iu/ml的pka活性。
30.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述白蛋白制剂具有至少5% w/v的白蛋白含量、大于0.0025 iu/kg总蛋白的c1e-抑制剂活性，以及小于或等于35 iu/ml的pka活性。
31.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括将第一含白蛋白的人血浆级分与第二含白蛋白的人血浆级分混合，以获得所述白蛋白制剂，其中所述第一含白蛋白的人血浆级分是通过包括从含有白蛋白的人血浆级分中提取第一量的c1e-抑制剂的过程获得的，并且其中所述第二含白蛋白的人血浆级分是通过包括从含有白蛋白的人血浆级分中提取第二量的c1e-抑制剂的过程获得的。
32.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述白蛋白制剂的白蛋白含量约为5%w/v。
33.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述白蛋白制剂的白蛋白含量约为25%w/v。
34.一种人白蛋白制剂，其白蛋白含量为至少5% w/v、c1e-抑制剂活性为大于0.0025iu/kg总蛋白以及pka活性为小于或等于35 iu/ml。
35.根据权利要求2至33中任一项所述的方法制备的人白蛋白制剂，其中，在巴氏消毒和在18-25℃的温度下存储选自1个月、3个月、6个月和12个月的一段时间后，其pka活性为小于或等于20 iu/ml。
36.根据权利要求2至33中任一项所述的方法制备的人白蛋白制剂，其中，在巴氏消毒和在18-25℃的温度下存储选自1个月、3个月、6个月和12个月的一段时间后，其pka活性为小于或等于10 iu/ml。
37.根据权利要求2至33中任一项所述的方法制备的人白蛋白制剂，其中，在巴氏消毒和在18-25℃的温度下存储选自1个月、3个月、6个月和12个月的一段时间后，其pka活性为小于或等于5 iu/ml。
38.根据权利要求2至33中任一项所述的方法制备的人白蛋白制剂，其中，在巴氏消毒和在18-25℃的温度下存储选自1个月、3个月和6个月的一段时间后，其丝氨酸蛋白酶活性为小于或等于0.06 nkat/g总蛋白。
39.根据权利要求2至33中任一项所述的方法制备的人白蛋白制剂，其中，在巴氏消毒和在18-25℃的温度下存储选自1个月、3个月和6个月的一段时间后，其丝氨酸蛋白酶活性为小于或等于0.01 nkat/g总蛋白。
40.根据权利要求34至37中任一项所述的人白蛋白制剂，其中，在巴氏消毒和在18-25℃的温度下存储选自1个月、3个月和6个月的一段时间后，所述制剂的丝氨酸蛋白酶活性小于或等于0.8 nkat/g蛋白。
41.根据权利要求34至37中任一项所述的人白蛋白制剂，其中，在巴氏消毒和在18-25℃的温度下存储选自1个月、3个月和6个月的一段时间后，所述制剂的丝氨酸蛋白酶活性小于或等于0.06 nkat/g蛋白。
42.根据权利要求34至37中任一项所述的人白蛋白制剂，其中，在巴氏消毒和在18-25℃的温度下存储选自1个月、3个月和6个月的一段时间后，所述制剂的丝氨酸蛋白酶活性小于或等于0.01 nkat/g蛋白。
43.根据权利要求34至42中任一项所述的人白蛋白制剂，其中所述制剂的白蛋白含量是大约5% w/v。
44.根据权利要求34至42中任一项所述的人白蛋白制剂，其中所述制剂的白蛋白含量是大约25% w/v。
45.根据权利要求31所述的方法制备的人白蛋白制剂。
