本发明涉及生物，具体涉及一种采用猪瘟病毒可溶性蛋白作为包被抗原的elisa抗体检测方法及其应用。
背景技术：
1、猪瘟是由猪瘟病毒引起的、发生在猪上的一种高度急性、热性、接触性传染病。猪瘟病毒可以分为经典猪瘟病毒(classical swine fever virus，csfv)和非洲猪瘟病毒(african swine fever virus，asfv)。其中，经典猪瘟病毒是ssrna病毒，黄病毒科瘟病毒属，其rna为单股正链，病毒粒子呈圆形，大小为38～44nm，核衣壳是立体对称二十面体，有包膜；非洲猪瘟病毒是dsdna病毒，非洲猪瘟科非洲猪瘟病毒属，病毒粒子直径约为200nm左右，20面体，呈现六边型，立体对称，有囊膜和内膜。猪瘟流行广泛，发病率、死亡率高，其主要传播途径为消化道和呼吸道，且母猪感染后，经胎盘垂直感染胎儿，该病一年四季流行，可对养猪业造成毁灭性的打击，是危害养猪业最严重的传染病之一。
2、目前，疫苗接种是控制猪瘟的重要手段，包括灭活疫苗和弱毒疫苗，然而在生产实践中，仍然会存在疫苗接种后不能抵御猪瘟病毒侵袭的现象，这是因为忽视了检测的重要性，为此，掌握临床诊断和科学的检测方法才能正确诊断和有效遏制猪瘟病的流行。检测血清抗体可为猪瘟疫苗免疫提供依据，特别是酶联免疫吸附试验对检测非典型猪瘟和温和性猪瘟有重要作用。市场上主要采用猪瘟病毒e蛋白作为包被抗原来检测抗猪瘟病毒的抗体，但猪瘟病毒含有多个免疫原蛋白，在病毒流行的过程中病毒的免疫原性蛋白容易发生变异，容易造成检测结果与实际疫苗免疫情况不一致，从而影响对猪瘟病毒的控制，限制了养猪产业的发展。
技术实现思路
1、本发明直接从猪瘟病毒中提取可溶性蛋白作为包被抗原用于猪瘟病毒抗体检测，解决了猪瘟病毒流行过程中因免疫原性蛋白容易发生变异，而造成检测结果与疫苗免疫后抗体变化趋势不一致的问题。
2、为了实现上述目的，本发明解决技术问题采用如下技术方案：
3、一方面，本发明提供了一种纯化猪瘟病毒可溶性蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：
4、s1.采用超高速离心和蔗糖梯度离心得到初步纯化的猪瘟病毒；
5、s2.将纯化后的猪瘟病毒经中空纤维、分子筛、阴离子填料、阳离子填料得到精纯后的病毒液；
6、s3.将病毒液稀释为1-10mg/ml，然后加入0.1-2％sds溶液、20-30％乙醇煮沸15-40分钟，透析、离心取上清得到病毒可溶性蛋白。
7、优选地，在步骤s2中，将所述猪瘟病毒加入0.1m且ph 7.4的pbs溶液，然后用孔径为30-150k的中空纤维过滤。
8、优选地，在步骤s2中，所述分子筛柱平衡液为0.1m pb溶液，柱体高为20-100cm。
9、优选地，在步骤s2中，所述平衡液的用量为3-5个分子筛柱体积。
10、优选地，在步骤s2中，所述阴离子填料的添加量按每50ml猪瘟病毒液添加0.5-2g。
11、优选地，在步骤s2中，所述阳离子填料的添加量按每50ml猪瘟病毒液添加0.5-2g。
12、优选地，在步骤s3中，所述透析是0.1m pbs溶液中透析48-96小时，温度为2-8℃；所述离心转速为5000-10000r/min，离心30-90min。
13、进一步优选地，所述pbs溶液的添加量是病毒液体积的20-50倍。
14、另一方面，本发明还提供了一种非疾病诊断目的采用猪瘟病毒可溶性蛋白作为包被抗原的elisa抗体检测方法，所述猪瘟病毒可溶性蛋白由权利要求1-7任一项所述纯化猪瘟病毒可溶性蛋白的方法制得。
15、优选地，所述elisa抗体检测方法包括以下步骤：
16、(1)将0.3-0.8μg/ml病毒可溶性蛋白过夜包被elisa板；
17、(2)包被完成后采用5％的小牛血清封闭elisa板；
18、(3)封闭完成后，用0.1m pbs、0.5％吐温-20溶液洗涤3次，干燥、封板。
19、与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
20、本发明直接从猪瘟病毒中提取猪瘟病毒可溶性蛋白，本发明直接从猪瘟病毒中提取猪瘟病毒可溶性蛋白，再经中空纤维过滤、凝胶层析、阴、阳离子交换层析得到精纯的病毒液，然后加入sds溶液、乙醇煮沸，再透析、离心取上清得到猪瘟病毒可溶性蛋白，所述猪瘟病毒可溶性蛋白既包括了容易变异的免疫原蛋白又包括了不容易变异的结构蛋白，可作为包被抗原用于猪瘟病毒的elisa抗体检测，使抗体检测结果更能反映出疫苗免疫后的抗体变化趋势，能有效监测猪瘟病毒的感染情况。
1.一种纯化猪瘟病毒可溶性蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的纯化猪瘟病毒可溶性蛋白的方法，其特征在于，在步骤s2中，将所述猪瘟病毒加入0.1m且ph 7.4的pbs溶液，然后用孔径为30-150k的中空纤维过滤。
3.根据权利要求1所述的纯化猪瘟病毒可溶性蛋白的方法，其特征在于，在步骤s2中，所述分子筛柱平衡液为0.1m pb溶液，柱体高为20-100cm。
4.根据权利要求3所述的纯化猪瘟病毒可溶性蛋白的方法，其特征在于，在步骤s2中，所述平衡液的用量为3-5个分子筛柱体积。
5.根据权利要求1所述的纯化猪瘟病毒可溶性蛋白的方法，其特征在于，在步骤s2中，所述阴离子填料的添加量按每50ml猪瘟病毒液添加0.5-2g。
6.根据权利要求1所述的纯化猪瘟病毒可溶性蛋白的方法，其特征在于，在步骤s2中，所述阳离子填料的添加量按每50ml猪瘟病毒液添加0.5-2g。
7.根据权利要求1所述的纯化猪瘟病毒可溶性蛋白的方法，其特征在于，在步骤s3中，所述透析是0.1m pbs溶液中透析48-96小时，温度为2-8℃；所述离心转速为5000-10000r/min，离心30-90min。
8.一种非疾病诊断目的采用猪瘟病毒可溶性蛋白作为包被抗原的elisa抗体检测方法，其特征在于，所述猪瘟病毒可溶性蛋白由权利要求1-7任一项所述纯化猪瘟病毒可溶性蛋白的方法制得。
9.根据权利要求8所述的一种非疾病诊断目的采用猪瘟病毒可溶性蛋白作为包被抗原的elisa抗体检测方法，其特征在于，所述elisa抗体检测方法包括以下步骤：
