本发明涉及一种疫苗制备，具体涉及一种猪丁型冠状病毒s蛋白及表达该蛋白的重组腺病毒。
背景技术：
1、猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,pdcov)是一种高度传染性的猪肠道冠状病毒，以感染猪群的水样腹泻、急性腹泻和低日龄哺乳仔猪的高发病率为主要特征，在全国养殖区域均有报告。粪口途径感染那是pdcov的主要传播途径，粪便和呕吐物以及其他污染物是病毒的主要传播来安，在腹泻群体中，病毒rna在分百年中持续勋在19-28天，在口腔分泌液中持续存在达42天。
2、pdcov感染5—21日龄新生仔猪或常规仔猪口服后腹泻、呕吐等临床症状出现在感染后1-3天，pdcov复制仅限于小肠和大肠上皮细胞，感染后可导致小肠绒毛萎缩和急性坏死，急性期感染pdcov抗原主要存在于萎缩的中段空肠，少量存在于十二指肠、空肠近端和盲结肠。偶尔存在于空肠和回肠的隐窝上皮细胞、固有层、派尔结节和肠系膜淋巴结中。
3、各日龄的血清阴性猪均对pdcov易感，血清阴性的种猪场，仔猪的发病率最高可达100%，美国有繁育场报告死亡率最高可达40%，在亚洲的中国和泰国繁育场爆发pdcov可导致64%—80%的哺乳仔猪死亡。
4、而目前尚无特异性的药物和疫苗可供使用，因此开发一种安全有效的pdcov疫苗对临床上该病的防控具有重要意义。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种猪丁型冠状病毒s蛋白及重组腺病毒，其能够有效诱导免疫动物产生特异性的免疫力，有望运用于临床，为pdcov的防控提供科学的技术手段。
2、为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
3、设计一种猪丁型冠状病毒s蛋白,具体方法如下：
4、以pdcov sc株s蛋白序列为基础，在n段插入mdamkrglccvlllcgavfvsn tpa分泌信号肽序列，c端插入yipeaprdgqayvrkdgewvllstfgsghhhhhh标签，并将s1和s2切割位点突变为ggsggggsgggs，按照sus scrofa密码子特点进行序列优化后合成并定向插入到pdc316-mcmv-egfp载体的ecorⅰ和hindⅲ酶切位点之间，构建好的载体命名为pdc316-pdcov-s。
5、其中，氨基酸序列如seq id no.1所示。
6、其中，核苷酸序列如seq id no.2所示。
7、进一步的，按照sus scrofa密码子特点进行序列优化后合成并定向插入到pdc316-mcmv-egfp载体的ecorⅰ和hindⅲ酶切位点之间。
8、进一步的，使用pdc316-pdcov-s载体与pbhgloxdele13cre共转染293a细胞获得了表达猪丁型冠状病毒s蛋白的重组重组腺病毒。
9、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
10、本发明表达的pdcov s蛋白骨架为sc株s蛋白，但在其n段插入mdamkrglccvlllcgavfvsn 分泌信号肽序列，c端插入yipeaprdgqayvrkdgewvllstfgsghhhhhh标签，并将s1和s2切割位点突变为ggsggggsgggs，从而获得了可以分泌表达s融合蛋白的序列，按照sus scrofa密码子特点进行序列优化后合成并定向插入到pdc316-mcmv-egfp载体的ecorⅰ和hindⅲ酶切位点之间，进而获得了表达pdcov s蛋白的重组载体，进一步的使用该载体制备获得了表达pdcov s蛋白的重组腺病毒。使用本发明构建的重组腺病毒免疫动物能够有效诱导免疫动物产生特异性的免疫力，有望运用于临床，为pdcov的防控提供科学的技术手段。
1.一种猪丁型冠状病毒s蛋白，其特征在于，所述猪丁型冠状病毒s蛋白有如下特征：
2.根据权利要求1所述的一种猪丁型冠状病毒s蛋白，其特征在于：猪丁型冠状病毒s蛋白核苷酸序列如seq id no.2所示。
3.一种表达猪丁型冠状病毒s蛋白的重组腺病毒，其特征在于：包含权利要求2所述的猪丁型冠状病毒s蛋白核苷酸序列。
4.一种疫苗，其特征在于：包括权利要球3所述的表达猪丁型冠状病毒s蛋白的重组腺病毒制得。
