本发明涉及免疫分析，具体地，涉及一种用于检测毒黄素的半抗原、人工抗原及其应用。
背景技术：
1、酵米面中毒属于致死率极高的一种细菌性食物中毒，椰毒假单胞菌酵米面亚种是引起米面中毒和变质银耳中毒的原因。
2、椰毒假单胞菌酵米面亚种的致病物质是其在生长繁殖过程中产生的两种毒素：米酵菌酸(bongkrekic acid，ba)和毒黄素(toxoflavin，tf)，这两种毒素均为脂肪酸类的小分子物质，具有剧毒、耐热和毒性强等特点，不能被一般的烹调方式所破坏，故食品被污染后极易引起中毒，且目前尚未有针对这两种毒素的特效解毒药物。
3、目前利用仪器检测或通过免疫检测均能够实现对于食品中米酵菌酸的准确检测；针对毒黄素的检测主要是通过分光光度法、高效液相色谱法或两种方法联用，这不仅需要昂贵的检测仪器，同时检测时间长且需要专业人员操作，无法实现现场检测；而针对毒黄素的免疫检测方法因缺乏可靠的毒黄素半抗原，通常检测限过高，无法准确检出食品中的毒黄素。
4、因此，开发具有高特异性的毒黄素半抗原，进而实现对于毒黄素的高灵敏度检测已经成为目前急需解决的问题。
技术实现思路
1、本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种用于检测毒黄素的半抗原、人工抗原及其应用。
2、本发明的第一目的是提供一种用于检测毒黄素的半抗原。
3、本发明的第二目的是提供上述半抗原的制备方法。
4、本发明的第三目的是提供上述半抗原在制备用于检测毒黄素的人工抗原中的应用。
5、本发明的第四目的是提供一种用于检测毒黄素的人工抗原。
6、本发明的第五目的是提供上述人工抗原在制备用于检测毒黄素的抗体中的应用。
7、本发明的第六目的是提供一种用于检测毒黄素的人工抗原组合。
8、本发明的第七目的是提供一种用于定量检测毒黄素的免疫层析试纸条。
9、本发明的第八目的是提供上述人工抗原组合和/或免疫层析试纸条在制备用于定量检测毒黄素的试剂盒中的应用。
10、本发明的第九目的是提供一种用于定量检测毒黄素的试剂盒。
11、为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：
12、一种用于检测毒黄素的半抗原，其结构式如式i所示；
13、
14、其中式i所示结构式中的r为卤族离子。
15、优选地，式i所示结构式中的r为溴离子。
16、本发明还请求保护上述半抗原的制备方法，将毒黄素和结构式如式ii所示的化合物a进行季铵化反应，即得结构式如式i所示半抗原；
17、
18、其中式ii所示结构式中的r为卤族原子。
19、优选地，式ii所示结构式中的r为溴原子。
20、优选地，所述毒黄素和化合物a的摩尔比为1：(1.5～3)。
21、更优选地，所述毒黄素和化合物a的摩尔比为1：2。
22、本发明还请求保护上述半抗原在制备用于检测毒黄素的人工抗原中的应用。
23、本发明还请求保护一种用于检测毒黄素的人工抗原，由上述半抗原偶联载体蛋白得到，结构式如式iii所示；
24、
25、其中式iii所示结构式中的r为卤族离子，protein为载体蛋白。
26、优选地，式iii所示结构式中r为溴离子。
27、优选地，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白或乳铁蛋白。
28、一种用于检测毒黄素的人工抗原的制备方法，包括以下步骤：
29、s1.将上述用于检测毒黄素的半抗原、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和n-羟基琥珀酰亚胺充分反应，得到溶液a；
30、s2.将载体蛋白溶解于磷酸盐缓冲液中得到溶液b；
31、s3.将步骤s1得到的溶液a和步骤s2得到的溶液b混合后充分反应，透析，即得用于检测毒黄素的人工抗原。
32、优选地，步骤s1中所述用于检测毒黄素的半抗原、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和n-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1：(1～2)：(1～2)。
33、更优选地，所述用于检测毒黄素的半抗原、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和n-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1:1:1。
34、优选地，步骤s2中所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白或乳铁蛋白。
35、优选地，步骤s3中所述充分反应为在室温反应16～24h。
36、优选地，步骤s3中，所述透析的方法为溶液a和溶液b充分反应结束后，利用磷酸盐缓冲液透析。
37、本发明还请求保护上述人工抗原在制备用于检测毒黄素的抗体中的应用。
38、一种用于检测毒黄素的人工抗体，由上述人工抗原免疫动物制备得到。
39、本发明还请求保护上述抗体在检测毒黄素中的应用，所述检测以非疾病治疗诊断为目的。
40、本发明还请求保护一种用于检测毒黄素的人工抗原组合，包含免疫原和包被原，所述免疫原由上述半抗原偶联乳铁蛋白得到，所述包被原由上述半抗原偶联牛血清蛋白得到。
41、本发明还请求保护一种用于定量检测毒黄素的免疫层析试纸条，含有pvc底板和依次排列在pvc底板上的样品垫、纤维素膜和吸水垫，纤维素膜上设置有检测线和质控线，所述检测线上包被有上述包被原，质控线上包被有igg抗体。
42、优选地，所述包被原在检测线上的浓度为0.05～0.4mg/ml。
43、更优选地，所述包被原在检测线上的浓度为0.2mg/ml。
44、优选地，所述igg抗体在质控线上的浓度为0.05～0.2mg/ml。
45、更优选地，所述igg抗体在质控线上的浓度为0.1mg/ml。
46、所述免疫层析试纸条的使用方法如下：
47、s1.将不少于5个梯度浓度的毒黄素标准品溶液和荧光标记的人工抗体混合后，滴加至免疫层析试纸条的样品垫上，充分反应后，检测免疫层析试纸条的荧光值，得到毒黄素标准品的检测线荧光值(t值)和质控线荧光值(c值)；
48、s2.以步骤s1中毒黄素标准品溶液的浓度为横坐标，以步骤s1得到的t值/c值作为纵坐标，构建荧光定量标准曲线；
49、s3.将毒黄素标准品溶液替换为待测样品，重复步骤s1，得到待测样品的检测线荧光值和质控线荧光值，并结合步骤s2得到的荧光定量标准曲线，计算得到待测样品的毒黄素浓度。
50、本发明还请求保护上述人工抗原组合和/或上述免疫层析试纸条在检测毒黄素中的应用，所述检测以非疾病治疗诊断为目的。
51、本发明还请求保护上述人工抗原组合和/或上述免疫层析试纸条在制备用于定量检测毒黄素的试剂盒中的应用。
52、一种用于定量检测毒黄素的试剂盒，含有上述人工抗原组合和/或上述免疫层析试纸条。
53、优选地，所示试剂盒还含有终止液、洗涤液、封闭液和酶标二抗。
54、更优选地，所述终止液为硫酸。
55、更优选地，所述洗涤液为pbst溶液。
56、更优选地，所述封闭液为含有质量分数为0.5～1.5％bsa的磷酸盐缓冲液。
57、更优选地，所述酶标二抗为辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠igg。
58、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
59、本发明提供了一种用于检测毒黄素的半抗原，并基于该半抗原制备得到了用于检测毒黄素的人工抗原和抗体。所述半抗原完整保留了毒黄素的结构特征，其制备得到的人工抗原结构完好且完整地保留了毒黄素原有的特性，有利于呈现毒黄素的结构特征，提高人工抗原的免疫原性。所述人工抗原能够定量检测待测样品中的毒黄素，用于酶联免疫吸附测定毒黄素时，ic50值为0.41μg/l；同时基于所述人工抗原提供了一种用于定量检测毒黄素的免疫层析试纸条，对于毒黄素标准品的检测灵敏度达到了0.1μg/l，对于待测样品中毒黄素的检测限达到了25ng/kg，能够实现高灵敏度检测毒黄素。
1.一种用于检测毒黄素的半抗原，其特征在于，其结构式如式i所示；
2.权利要求1所述半抗原的制备方法，其特征在于，将毒黄素与结构式如式ii所示的化合物a进行季铵化反应，即得结构式如式i所示半抗原；
3.权利要求1所述半抗原在制备用于检测毒黄素的人工抗原中的应用。
4.一种用于检测毒黄素的人工抗原，其特征在于，由权利要求1所述半抗原偶联载体蛋白得到，结构式如式iii所示；
5.根据权利要求4所示的人工抗原，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白或乳铁蛋白。
6.权利要求4～5任一所述的人工抗原在制备用于检测毒黄素的抗体中的应用。
7.一种用于检测毒黄素的人工抗原组合，其特征在于，包含免疫原和包被原，所述免疫原由权利要求1所述半抗原偶联乳铁蛋白得到，所述包被原由权利要求1所述半抗原偶联牛血清蛋白得到。
8.一种用于定量检测毒黄素的免疫层析试纸条，含有pvc底板和依次排列在pvc底板上的样品垫、纤维素膜和吸水垫，纤维素膜上设置有检测线和质控线，其特征在于，所述检测线上包被有权利要求7中所述包被原，质控线上包被有igg抗体。
9.权利要求7所述人工抗原组合和/或权利要求8所述免疫层析试纸条在制备用于定量检测毒黄素的试剂盒中的应用。
10.一种用于定量检测毒黄素的试剂盒，其特征在于，含有权利要求7所述人工抗原组合和/或权利要求8所述免疫层析试纸条。
