本技术属于免疫学检测的，具体涉及一种p-tau 231特异性抗体及其在阿尔兹海默症诊断试剂盒中的应用
背景技术：
1、阿尔茨海默病(alzheimer disease，ad)是一种常见于老年人的神经退行性疾病，其主要病理变化是大脑皮质弥散性萎缩、神经原纤维缠结和神经细胞间大量老年斑形成等，以进行性认知障碍和记忆功能减退为其主要临床症状。其认知功能障碍由轻度的情绪不稳、对周围的人冷淡，逐渐发展到重度的健忘、失语、失用乃至失认，最终完全失去肌肉的控制，这对患有ad的老年人及家庭来说，不仅仅在经济方面有着巨大的负担，而且在生活方面也造成了沉重的影响。随着目前社会人口预期寿命的增长，在老年人群范围内ad的发病率呈现大幅上升的趋势。
2、国内外近期的研究表明，与ad的发病有紧密联系，且能解释相关临床症状的发生与发展的核心病理机制主要是两个：(1)tau蛋白的过度磷酸化，影响了细胞微管本身正常结构，使神经纤维部分容易扭转折叠，最终形成神经纤维缠结(nft)。(2)β淀粉样蛋白(amyloidβprotein，aβ)的生成，沉积成淀粉样斑块。由于aβ及nft的存在，进一步导致神经纤维运输功能受损，神经元凋亡，引发一系列后续的疾病发展。
3、神经影像学检查(aβ-pet、tau-pet)和脑脊液检查(aβ、tau)是已经被临床广泛认可的ad诊断技术，但是pet费用高、脑脊液检查侵入性高，限制了ad早期诊断的普及。基于血液的生物标志物检测方法侵入性低，并且成本较低，还能够通过大规模的临床使用来降低成本。近年来基于血液的生物标志物用于ad诊断的证据越来越多，其诊断性能也逐渐得到临床验证。2023年7月16日，阿尔兹海默病协会国际会议(aaic)公布了一项最新的ad诊断指南草案，其中包括在临床设置中使用基于血液aβ42、p-tau 217、p-tau 181及p-tau 231生物标志物检测的建议。
4、最新研究表明，血浆p-tau231和血浆p-tau181、p-tau 217一样，在检测阿尔茨海默病上表现出极高的诊断准确性，且血浆p-tau231增加显著早于血浆p-tau181、p-tau217，因此血浆p-tau231作为阿尔兹海默症早期筛查更具有优越的临床实用性。
5、目前市面暂无商品化p-tau231检测试剂盒，主要原因是血浆中p-tau231含量极低，需要配合特异性识别p-tau 231的高亲和力的单克隆抗体，但市面上此类单抗的数量少、灵敏度低、特异性差，给相关检测试剂盒的开发带来一定的障碍，有必要开发一种识别p-tau231的高质量的抗体来解决上述问题。
技术实现思路
1、本发明的目的是解决当前缺乏高灵敏度、高特异性p-tau231检测试剂的问题，本技术提供一种能特异性识别人tau蛋白第231苏氨酸是否磷酸化的高特异性、高灵敏度的单克隆抗体，及其在化学发光免疫检测试剂盒中的应用，相关试剂盒可用于阿尔兹海默症的早期诊断，对患者的早期干预或治疗有重要意义。
2、本发明第一方面，提供一种特异性结合p-tau 231的兔单克隆抗体或其抗原结合片段；第二方面，提供编码第一方面中抗人p-tau 231的兔单克隆抗体的核苷酸；第三方面，提供一种重组表达载体，其携带本技术第二方面所述的核苷酸；第四方面，本技术还提供一种宿主细胞，其包含本技术的核苷酸或载体，可以稳定高效的表达上述抗人p-tau 231重组兔单克隆抗体；第五方面，提供了如上述重组兔单克隆抗体在制备用于检测人p-tau 231的试剂中的应用；第六方面，提供了一种检测人p-tau 231化学发光检测试剂盒；第七方面，提供了如上述的抗体或抗原结合片段或如上述的试剂盒在早期诊断阿尔兹海默症的应用；第八方面，本技术提供了如上述特异性结合p-tau 231的兔单克隆抗体或其抗原结合片段的制备方法。
3、本发明所述的一种特异性识别p-tau 231的单克隆抗体的解决方案如下，其重链可变区氨基酸序列如seq id no：3所示，轻链可变区氨基酸序列如seq id no：4所示。
4、作为对上述一种特异性识别p-tau 231的单克隆抗体的改进，所述抗体或其抗原结合片段包含至少一种、两种、三种、四种、五种或六种选自下述的cdr：(a)包含与seq idno：5的氨基酸序列有至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的cdr-h1；(b)包含与seq id no：6的氨基酸序列有至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的cdr-h2；(c)包含与seq id no：7的氨基酸序列有至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的cdr-h3；(d)包含与seq id no：8的氨基酸序列有至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的cdr-l1；(e)包含与seq idno：9的氨基酸序列有至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的cdr-l2；(f)包含与seq id no：10的氨基酸序列有至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的cdr-l3。
5、作为对上述一种特异性识别p-tau 231的单克隆抗体的进一步改进，所述抗体或其抗原结合片段的制备方法，包括以下步骤：(a)使用p-tau 231多肽免疫新西兰大白兔，免疫结束后收集分离淋巴细胞；(b)将分离的淋巴细胞和鼠骨髓瘤细胞进行电融合制备杂交瘤细胞；(c)筛选与靶标p-tau 231高灵敏度、高特异性的细胞株进行基因测序，得到抗体可变区及恒定区序列；(d)将抗体基因插入重组表达载体，转染cho-k1细胞，经zeocintm筛选，筛选得重组细胞株；(e)培养重组细胞株，收集并纯化上清，即得重组兔单克隆抗体。
6、一种p-tau 231检测试剂盒，所述试剂盒包括结合tau蛋白非磷酸化位点的抗体包被的磁珠，经化学发光剂标记的特异性结合p-tau 231的检测抗体。
7、作为一种p-tau 231检测试剂盒的改进，所述特异性结合p-tau 231的检测抗体为权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段。
8、作为一种p-tau 231检测试剂盒的进一步改进，所述化学发光剂选自碱性磷酸酶、吖啶酯、辣根过氧化物酶中的至少一种。
9、权利要求1或4所述的抗体或其抗原结合片段在制备阿尔兹海默症早期诊断试剂盒中的应用。
10、本技术的有益效果：
11、本技术提供了一种新的靶向p-tau 231的兔单克隆抗体及包含上述单克隆抗体的试剂盒，本技术的p-tau 231兔单克隆抗体特异性强、亲和力高、表达量高、生产周短，适合作为核心原料应用于体外诊断试剂领域，具有巨大的经济效益和社会效益。
1.一种特异性识别p-tau 231的单克隆抗体，其特征在于，其重链可变区氨基酸序列如seq id no：3所示，轻链可变区氨基酸序列如seq id no：4所示。
2.根据权利要求1所述的一种特异性识别p-tau 231的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包含至少一种、两种、三种、四种、五种或六种选自下述的cdr：
3.根据权利要求1所述的一种特异性识别p-tau 231的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段的制备方法，包括以下步骤：
4.一种多核苷酸，其特征在于，其编码权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段。
5.一种p-tau 231检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括结合tau蛋白非磷酸化位点的抗体包被的磁珠，经化学发光剂标记的特异性结合p-tau 231的检测抗体。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述特异性结合p-tau 231的检测抗体为权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段。
7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光剂选自碱性磷酸酶、吖啶酯、辣根过氧化物酶中的至少一种。
8.权利要求1或4所述的抗体或其抗原结合片段在制备阿尔兹海默症早期诊断试剂盒中的应用。
