本发明属于生物检测，具体涉及一种百草枯快速检测方法及其检测盒。
背景技术：
1、百草枯，化学名称是1-1-二甲基-4-4-联吡啶阳离子盐，是一种快速灭生性除草剂，具有触杀作用和一定内吸作用，能迅速被植物绿色组织吸收，使其枯死，对非绿色组织没有作用，在土壤中迅速与土壤结合而钝化，对植物根部及多年生地下茎及宿根无效，但百草枯对人毒性极大，且无特效解毒药，口服中毒死亡率可达90％以上，目前已被20多个国家禁止或者严格限制使用，我国自2014年7月1日起，撤销百草枯水剂登记和生产许可、停止生产；但保留母药生产企业水剂出口境外使用登记、允许专供出口生产，2016年7月1日停止水剂在国内销售和使用，因此定期对百草枯残留进行检测成为必要手段。
2、现有的针对百草枯的检测方法存在以下问题，一般采用液质联用和表面增强拉曼光谱的检测技术进行检测，该方法检测成本高，设备较大，不利于户外便携检测使用，无法现场检测百草枯含量，不利于实际使用。
技术实现思路
1、为了克服现有技术中的上述不足，本发明的目的之一在于提供一种百草枯快速检测方法及其检测盒，包括检测盒主体和试纸条主体，所述检测盒主体内部的试纸条主体的测试制备方法如下：
2、s1、检测试剂的准备，所述检测试剂的准备中所用试剂为乙基百草枯、甲酸、4,4'-联吡啶、1,1'-压乙基-2,2'-联吡啶二溴盐、碘化钠、碳酸氢铵、丙酮、十二水和磷酸氢二钠、二水合磷酸二氢钠、胶体金微球、时间分辨免疫荧光微球、2-吗啉代乙磺酸、牛血清蛋白、鸡卵清蛋白、硝酸纤维素膜、玻璃纤维垫、样品垫、吸水纸、pvc背板；
3、s2、抗百草枯抗体的制备，所述抗百草枯抗体的制备为以4,4-联吡啶为起始原料，通过碘甲烷甲基化、5-溴戊酸乙酯酯化、溴氢酸脱酯基等合成步骤，制备出半抗原n-甲基-n'-戊酸基-二吡啶二溴化物；
4、s3、抗百草枯抗体的偶联，所述抗百草枯抗体的偶联为将步骤s2中的半抗原n-甲基-n'-戊酸基-二吡啶二溴化物分别与牛血清蛋白和鸡卵清蛋白两种蛋白偶联制备免疫抗原和包被抗原；
5、s4、胶体金的标记，所述胶体金的标记为用0.2mol/lk2co3溶液将胶体金溶液调节至ph7，加入抗百草枯单克隆抗体使其终浓度为10μg/ml，室温搅拌反应30min，再加入终质量浓度为4μg/ml的牛血清白蛋白进行60min封闭反应，然后离心除去游离抗体，最后复溶，获得胶体金微球标记的抗百草枯单克隆抗体探针；
6、s5、时间分辨荧光微球的抗体标记，所述时间分辨荧光微球的抗体标记为500μl荧光微球中加入450μl活化缓冲液，超声5min，然后向微球溶液中依次加入edc和nhs溶液使其终浓度分别为0.1和0.2mmol/l，室温振荡反应30min，15000r/min，离心10min，弃去上清液，将沉淀用500μl偶联缓冲液复溶，超声5min，加入10μl2mg/ml抗百草枯单克隆抗体，室温振荡反应2h，15000r/min，离心5min，向沉淀中加入500μl封闭缓冲液，4℃振荡反应过夜，将反应液以15000r/min，离心5min，弃去上清，加入1mltris-hcl进行复溶，超声5min，获得时间分辨荧光微球标记的抗百草枯单克隆抗体探针；
7、s6、试纸条的组装，所述试纸条的组装为用三维划膜喷金仪将包被抗原和羊抗小鼠-igg分别包被于nc膜上，形成t检测线和c质控线，将组装好的试纸条大板用自动斩切机切割成宽4mm、长60mm的板条，装于塑料卡壳中，用压壳机压紧，放入带干燥剂的铝箔袋中，连续封口机封口后，常温保存，得到试纸条主体；
8、s7、百草枯的检测测试，所述百草枯的检测测试为取生物样品40μl-50μl与等体积浓度为0.01mol/l的pbs缓冲液混合，将样品滴加试纸条主体的样品槽中，显色反应10min，当样品中无pq时，t线上的包被抗原捕获金纳米微球标记的抗体或时间分辨荧光微球标记的抗体，t线显色，当t线颜色大于c线时，结果判定为阴性，当样品中存在pq时，金纳米微球标记的抗体或时间分辨荧光微球标记的抗体优先与游离的pq反应，t线显色与待测样品中的pq浓度呈负相关，当t线颜色小于c线时，结果判定为阳性。
9、进一步地，所述胶体金的标记中复溶的溶液采用浓度为1％的牛血清白蛋白、浓度为0.5％的ween-20和浓度为0.02％的proclin-300配比形成，且溶液的ph为7.0。
10、进一步地，所述胶体金的标记中离心的温度为4℃，离心速度为12000r/min，离心时间10min。
11、进一步地，所述时间分辨荧光微球的抗体标记中的活化缓冲液由浓度为0.05mol/lmes配比形成，且配比的ph为5.0，且偶联缓冲液采用0.04mol/lpb配比形成，且配比的ph为8.0，且封闭缓冲液由浓度为0.01mol/l，质量分数为2％的bsa配比形成，且配比的ph为8.0。
12、进一步地，所述试纸条的组装时，采用s4和s5中得到的胶体金微球标记的抗百草枯单克隆抗体探针和时间分辨荧光微球标记的抗百草枯单克隆抗体探针分别包被在不同试纸条主体的t线上，形成两个不同种类的试纸条主体，分别为胶体金免疫层析试纸条主体和时间分辨荧光免疫层析试纸条主体。
13、一种百草枯快速检测盒，包括检测盒主体和试纸条主体，所述检测盒主体顶面一侧铰接设有密封盖，所述检测盒主体顶面两侧分别设有第一置物槽和第二置物槽，且第一置物槽和第二置物槽内部均设有试纸条主体，所述第一置物槽和第二置物槽两侧分别设有回收腔，且回收腔与检测盒主体正面贯穿，所述回收腔内部滑动设有回收抽屉。
14、进一步地，所述检测盒主体侧面铰接设有提拉把手，所述密封盖侧面开设有限位槽，且限位槽为盲槽，所述提拉把手边缘与限位槽边缘间隙配合。
15、与现有技术相比，本发明具有的有益效果如下：
16、本发明提供的一种百草枯快速检测方法及其检测盒，采用4，4-联吡啶为原料，通过半抗原制备两种可对血液、尿液样本中痕量百草枯进行直接检测的胶体金免疫层析试纸条主体和时间分辨荧光免疫层析试纸条主体，对全血样本中的检测限可达0.05ng/ml，检测时间10min，相比液质联用和表面增强拉曼光谱的检测技术，具备造价低廉、操作简便、检测速度快、结果易判别且灵敏度高等优势。
1.一种百草枯快速检测方法，包括检测盒主体(1)和试纸条主体(9)，其特征在于：所述检测盒主体(1)内部的试纸条主体(9)的测试制备方法如下：
2.权利要求1所述的一种百草枯快速检测方法，其特征在于：所述胶体金的标记中复溶的溶液采用浓度为1％的牛血清白蛋白、浓度为0.5％的ween-20和浓度为0.02％的proclin-300配比形成，且溶液的ph为7.0。
3.权利要求1所述的一种百草枯快速检测盒，其特征在于：所述胶体金的标记中离心的温度为4℃，离心速度为12000r/min，离心时间10min。
4.权利要求1所述的一种百草枯快速检测方法，其特征在于：所述时间分辨荧光微球的抗体标记中的活化缓冲液由浓度为0.05mol/lmes配比形成，且配比的ph为5.0，且偶联缓冲液采用0.04mol/lpb配比形成，且配比的ph为8.0，且封闭缓冲液由浓度为0.01mol/l，质量分数为2％的bsa配比形成，且配比的ph为8.0。
5.权利要求1所述的一种百草枯快速检测方法，其特征在于：所述试纸条的组装时，采用s4和s5中得到的胶体金微球标记的抗百草枯单克隆抗体探针和时间分辨荧光微球标记的抗百草枯单克隆抗体探针分别包被在不同试纸条主体(9)的t线上，形成两个不同种类的试纸条主体(9)，分别为胶体金免疫层析试纸条主体(9)和时间分辨荧光免疫层析试纸条主体(9)。
6.一种百草枯快速检测盒，其特征在于：包括检测盒主体(1)和试纸条主体(9)，所述检测盒主体(1)顶面一侧铰接设有密封盖(2)，所述检测盒主体(1)顶面两侧分别设有第一置物槽(4)和第二置物槽(5)，且第一置物槽(4)和第二置物槽(5)内部均设有试纸条主体(9)，所述第一置物槽(4)和第二置物槽(5)两侧分别设有回收腔(6)，且回收腔(6)与检测盒主体(1)正面贯穿，所述回收腔(6)内部滑动设有回收抽屉(7)。
7.权利要求6所述的一种百草枯快速检测盒，其特征在于：所述检测盒主体(1)侧面铰接设有提拉把手(3)，所述密封盖(2)侧面开设有限位槽(8)，且限位槽(8)为盲槽，所述提拉把手(3)边缘与限位槽(8)边缘间隙配合。
