本发明涉及噬菌体展示，特别涉及一种抗cd31的单克隆纳米抗体及其应用。
背景技术：
1、噬菌体展示技术是指将外源蛋白或者多肽与特定的噬菌体衣壳蛋白融合表达，展示在噬菌体表面的技术。这种技术可以模拟自然选择的过程，实现对靶分子特异性受体的高通量筛选，还能将筛选到的蛋白分子的基因型与表型完美结合，经常用于针对不同靶蛋白的单克隆抗体筛选中。
2、纳米抗体是指一类重链单域抗体。相对于其他抗体，轻链天然缺失，大小只有传统igg抗体的十分之一；故具有穿透力高，稳定性好，人源化简单等优势；在抗体药物的研发或者疾病的临床诊断方面都有广泛应用。常见的纳米抗体主要来源于驼类和某些软骨鱼类。
3、cd31（血小板-内皮细胞黏附分子）属于免疫球蛋白超家族成员，分子量大概130kd，是一种跨膜蛋白，胞外结构域由574个氨基酸组成，跨膜结构域包含19个疏水氨基酸，胞内结构域包含118个氨基酸。cd31蛋白主要存在于血小板、中性粒细胞、单核细胞和某些类型的t细胞表面，以及内皮细胞间紧密连接处。由于在血管内皮细胞的高表达，cd31可作为血管内皮细胞标志物，来评估血管性肿瘤的生成。绝大多数类型的血管性肿瘤（如血管内皮瘤、血管纤维瘤、血管瘤和血管肉瘤等）中都能检测到cd31蛋白。同时，由于在肿瘤生长和癌细胞转移过程中的重要作用，cd31蛋白的过表达经常作为判断良性或者恶性血管瘤的重要依据之一。
4、因此，如果能够开发出具有对cd31蛋白高亲和力和特异性识别的抗体，就可以通过免疫组化实验，来检测组织或者细胞上cd31的表达情况，进而达到评估各类血管瘤的作用。
技术实现思路
1、本发明提供了一种抗cd31的单克隆纳米抗体及其应用，这种单克隆纳米抗体对人源cd31具有很高的亲和力和特异性识别能力，能够用于cd31蛋白的检测识别及其相关应用中。本发明的技术方案具体通过以下技术实现。
2、一种抗cd31的单克隆纳米抗体，其特征在于，为单克隆纳米抗体cd31-1040或cd31-1042；单克隆纳米抗体cd31-1040的重链互补决定区cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.1-3所示；单克隆纳米抗体cd31-1042的重链互补决定区cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.6-8所示。
3、进一步地，所述单克隆纳米抗体cd31-1040的重链的氨基酸序列如seq id no.4所示；所述单克隆纳米抗体cd31-1042的重链的氨基酸序列如如seq id no.9所示。
4、更进一步地，编码所述单克隆纳米抗体cd31-1040的的重链的基因序列如seq idno.5所示，编码所述单克隆纳米抗体cd31-1042的的重链的基因序列如seq id no.10所示。
5、本发明还提供了一种物质，所述物质包括以下任意1个方面：
6、（1）一种核酸分子或包含所述核酸分子的载体，所述核酸分子编码上述任一项所述的单克隆纳米抗体；
7、（2）一种改造细胞或重组菌株，所述改造细胞或重组菌株用于表达上述任一项所述的单克隆纳米抗体；
8、（3）一种抗体衍生物，所述抗体衍生物包括上述任一项所述的单克隆纳米抗体；
9、（4）一种药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的上述任一项所述的单克隆纳米抗体，或者所述抗体衍生物；
10、（5）一种检测产品，所述产品包括上述任一项所述的单克隆纳米抗体，或者所述核酸分子，或者所述载体，或者所述抗体衍生物。
11、本发明还提供了一种上述抗cd31的单克隆纳米抗体的应用，所述应用包括以下任意1个方面：
12、（1）用于不以疾病诊断和治疗为目的的检测cd31的表达，或者检测血管性肿瘤，或者评估治疗血管性肿瘤的药品的疗效；
13、（2）用于制备检测cd31表达，或者诊断血管性肿瘤，或者评估治疗血管性肿瘤的药品疗效的产品；
14、（3）用于制备治疗血管性肿瘤的药物。
15、本发明提供的单克隆纳米抗体，并不限于检测cd31的表达或诊断检测血管性肿瘤。实际上基于本发明的单克隆纳米抗体对cd31的高亲和力，其他任意需要定性/定量检测cd31表达情况的环境和场景，都可以采用本发明的单克隆纳米抗体。
16、还需要指出的是，上述本发明提供的单克隆纳米抗体用途中，声称的“不以疾病诊断和治疗为目的”是指在常规科研或实验室场景等非临床条件下，应用本发明的单克隆纳米抗体进行cd31的定性/定量检测，或血管性肿瘤检测。实际上，在临床时，同样也可以使用本发明提供的单克隆纳米抗体辅助检测cd31或血管性肿瘤疾病。
17、进一步地，所述产品为检测试剂、检测试剂盒、检测试纸条、检测探针或检测芯片。
18、本发明还提供了一种驼源纳米抗体文库，用于筛选上述任一项单克隆纳米抗体；所述驼源纳米抗体文库是提取天然驼源pbmcs细胞的总rna，进行反转录和pcr扩增获得抗体可变区vhh的基因序列，将所述抗体可变区vhh的基因序列连接到噬菌体表达载体上，转化至感受态细胞中得到。
19、与现有技术相比，本发明的有益之处在于：本发明通过提取人源cd31蛋白免疫后羊驼淋巴细胞总rna，通过反转录和两轮pcr，获得驼源纳米抗体可变区基因片段，并最终成功构建了噬菌体展示驼源纳米抗体文库；利用该文库通过富集淘选和高通量elisa筛选，获得了2条高亲和力，特异性识别人源cd31蛋白的驼源单克隆纳米抗体序列，能够用于组织或者细胞上cd31的表达情况，进而评估各类血管瘤的病情。
1.一种抗cd31的单克隆纳米抗体，其特征在于，为单克隆纳米抗体cd31-1040或cd31-1042；所述单克隆纳米抗体cd31-1040的重链互补决定区cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.1-3所示；单克隆纳米抗体cd31-1042的重链互补决定区cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.6-8所示。
2.根据权利要求1所述的抗cd31的单克隆纳米抗体，其特征在于，所述单克隆纳米抗体cd31-1040的重链的氨基酸序列如seq id no.4所示；所述单克隆纳米抗体cd31-1042的重链的氨基酸序列如如seq id no.9所示。
3.根据权利要求2所述的抗cd31的单克隆纳米抗体，其特征在于，编码所述单克隆纳米抗体cd31-1040的的重链的基因序列如seq id no.5所示，编码所述单克隆纳米抗体cd31-1042的的重链的基因序列如seq id no.10所示。
4.一种物质，其特征在于，所述物质包括以下任意1个方面：
5.一种权利要求1-3任一项所述的抗cd31的单克隆纳米抗体的应用，其特征在于，所述应用包括以下任意1个方面：
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述产品为检测试剂、检测试剂盒、检测试纸条、检测探针或检测芯片。
7.一种驼源纳米抗体文库，其特征在于，用于筛选权利要求1-3任一项所述的单克隆纳米抗体；所述驼源纳米抗体文库是提取天然驼源pbmcs细胞的总rna，进行反转录和pcr扩增获得抗体可变区vhh的基因序列，将所述抗体可变区vhh的基因序列连接到噬菌体表达载体上，转化至感受态细胞中得到。
