【】本发明涉及微生物，特别涉及发酵乳杆菌菌株gsg及其应用。
背景技术
0、
背景技术：
1、天然的cla主要存在于动物、植物、海产品中，如在牛、羊等反刍类动物的乳脂和肉制品中含量较高。自上世纪50年代开始，人们接连在反刍动物的脂肪组织、烤牛肉中发现了cla，并证实其抗癌功能。目前，许多可生产cla的菌株均为乳酸菌，可用于发酵，不同动物体内含有不同量或不同种类的cla，且差异很大。其中反刍动物的肉和奶等产品中cla含量最高，有报道水牛奶品质优于其他牛奶，其中cla含量极显著高于荷斯坦奶牛、西门塔尔牛和娟姗牛，水牛奶c9，t11-cla含量可达4.59mg/100g牛奶，水牛乳肉制品具有开发成为高cla功能食品的潜力。在反刍动物中cla有两个主要来源分别为：瘤胃微生物生物还原亚油酸至硬脂酸(c18∶0)的代谢过程中产生c9，t11-cla和乳腺中的异油酸(c18∶1，trans-11)经δ9脱氢酶作用直接生成c9，t11-cla。
2、在经过长久的进化后，瘤胃微生物与反刍动物已成为互利共生的关系，而且瘤胃微生物能对脂肪酸进行代谢从而影响着反刍动物乳肉中所含的脂肪酸组成。水牛奶中cla含量高可能与瘤胃内某些微生物数量和活性有关，而从水牛瘤胃中分离产cla菌株还未见报道。所以本研究开展从水牛瘤胃中分离筛选出cla高产菌株，并通过体外和体内发酵试验观察筛选出的目标菌株代谢亚油酸的能力及对瘤胃发酵参数的影响。
3、目前具有合成cla能力的菌株有250多株，这些菌株属于微球菌属、肠球菌属、真菌菌属、片球菌属、丙酸菌属和乳杆菌属等14个属。虽然能合成cla的菌株有很多，但从反刍动物瘤胃内分离出并鉴定的具备氢化不饱和脂肪酸能力的微生物数量非常少，目前仅有溶纤维丁酸弧菌、真菌菌属、白色瘤胃球菌和fusocillus属的一些菌株。从瘤胃内分离鉴定的产cla菌株较少的原因，主要是瘤胃内大部分微生物属于严格厌氧菌，要保证分离纯化过程严格厌氧环境有难度，另外有不少菌落里伴生其他菌的情况，这种伴生关系对分离纯化造成了极大的困难。因此，为提高反刍动物产品cla含量，促进乳肉产品质量，增进人类健康提供依据，另一方面，可以丰富产cla菌种库，为后期cla功能食品的开发提供更多优良菌株，加快从水牛瘤胃中分离出高产cla的菌株并通过形态学和分子生物学技术鉴定其种属，最后通过体外和体内发酵法研究目标高产cla菌株代谢亚油酸的能力及对瘤胃发酵参数的影响，对提高反刍动物产品质量有重要意义，并能为开发cla功能产品提供优良菌株。
技术实现思路
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技术实现要素：
1、鉴于上述内容，有必要提供一种能高产cla的菌株，同时还通过改良冻干工艺达到提高菌株冻干粉活性的目的。
2、为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
3、本发明包括一株发酵乳杆菌(limosilactobacillusfermentum)菌株gsg，其保藏编号为cctcc no：m20241406，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号为cctcc no：m20241406，保藏日期为2024年07月01日。
4、本发明还包括包含所述发酵乳杆菌(limosilactobacillusfermentum)菌株gsg的冻干粉。
5、本发明还包括所述发酵乳杆菌(limosilactobacillusfermentum)菌株gsg和/或所述冻干粉在提高共轭亚油酸产量中的应用。
6、本发明还包括所述发酵乳杆菌(limosilactobacillusfermentum)菌株gsg和/或所述冻干粉在提高水牛消化率、提高体外发酵瘤胃液脂肪酸中的应用。
7、本发明还包括所述发酵乳杆菌(limosilactobacillusfermentum)菌株gsg和/或所述冻干粉在提高succiniclasticum和veillonellaceae_ucg-001丰度中的应用。
8、本发明还包括所述发酵乳杆菌(limosilactobacillusfermentum)菌株gsg和/或所述冻干粉在制备水牛饲料中的应用。
9、本发明还包括一种制备所述包含发酵乳杆菌(limosilactobacillusfermentum)菌株gsg冻干粉的方法，所述方法包括如下步骤：
10、(1)将所述菌株gsg接种到培养基后加入所述活化剂中经过一次传代活化后，按接种量2％(v/v)将菌株gsg接种到扩大培养基中培养，将发酵液分装后，离心、去掉上清发酵液后加入生理盐水重悬，重复离心后得到菌泥；将菌泥与体积百分数为原发酵液体积20％的冻干保护剂溶液混合振荡，使其均匀，制成菌悬液；
11、(2)预冻：将菌悬液倒入无菌培养皿，厚度约为0.5cm，在-80℃下预冻12h；
12、(3)真空冷冻干燥：菌泥预冻后，冷冻干燥24h，使冻干菌粉水分含量在3％左右，即得冻干粉。
13、进一步的，所述步骤(1)的活化剂为浓度在0.15g/l-0.20g/l的谷氨酸钠和/或浓度在0.05g/l-0.15g/l的聚谷氨酸。
14、进一步的，所述步骤(1)的冻干保护剂为浓度在30-40g/100ml的脱脂乳和/或浓度在10-14g/100ml的蔗糖。
15、本发明具有如下有益效果：
16、1、本发明的gsg菌株从水牛的胃瘤中分离而得，该菌株具有较高的产共轭亚油酸(cla)的能力，经发酵实验发现，该菌株对体外发酵水牛瘤胃营养物质消化率有显著提升作用，对水牛的体外发酵水牛瘤胃脂肪酸(包括饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸、脂肪酸总和、共轭亚油酸总和)都具有显著的提升效果；该菌株对微生物succiniclasticum和veillonellaceae_ucg-001丰度均有提升效果，将上述菌株在制备成冻干粉后，在活化剂和冻干粉保护剂的作用下，能显著提升菌株的存活能力，从而提升菌株冻干粉的共轭亚油酸(cla)产量，经正交优化，本申请还得出了该冻干粉的最佳反应条件：即活化剂为浓度在0.15g/l-0.20g/l的谷氨酸钠和/或浓度在0.05g/l-0.15g/l的聚谷氨酸；冻干保护剂为浓度在30-40g/100ml的脱脂乳和/或浓度在10-14g/100ml的蔗糖。
1.一株发酵乳杆菌(limosilactobacillusfermentum)菌株gsg，其保藏编号为cctccno：m20241406。
2.包含如权利要求1所述发酵乳杆菌(limosilactobacillusfermentum)菌株gsg的冻干粉。
3.一种如权利要求1所述发酵乳杆菌(limosilactobacillusfermentum)菌株gsg和/或如权利要求2所述冻干粉在提高共轭亚油酸产量上的应用。
4.权利要求1所述发酵乳杆菌(limosilactobacillusfermentum)菌株gsg和/或如权利要求2所述冻干粉在提高水牛消化率、提高体外发酵瘤胃液脂肪酸中的应用。
5.权利要求1所述发酵乳杆菌(limosilactobacillusfermentum)菌株gsg和/或如权利要求2所述冻干粉在提高succiniclasticum和veillonellaceae_ucg-001丰度中的应用。
6.权利要求1所述发酵乳杆菌(limosilactobacillusfermentum)菌株gsg和/或如权利要求2所述冻干粉在制备水牛饲料中的应用。
7.一种制备如权利要求2所述包含发酵乳杆菌(limosilactobacillusfermentum)菌株gsg冻干粉的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)的活化剂为浓度在0.15g/l-0.20g/l的谷氨酸钠和/或浓度在0.05g/l-0.15g/l的聚谷氨酸。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)的冻干保护剂为浓度在30-40g/100ml的脱脂乳和/或浓度在10-14g/100ml的蔗糖。
