本公开涉及细胞培养方法、蛋白质，如单克隆抗体在哺乳动物细胞中的生产、新型生物标志物和使用新型生物标志物控制蛋白质生产的方法。
背景技术：
1、在生物制药工业中，哺乳动物细胞，如中国仓鼠卵巢(cho)和人胚肾(hek)293细胞系被用作生产治疗性生物制剂的宿主。例如，在抗体生产过程中，cho细胞表现出低效和调节不良的代谢，因为它们倾向于使用大量可用的营养物来产生代谢废物，而不是使用其生长所需的量。在生物过程的后期，即使营养水平足以支持生长和蛋白质生产，细胞也会停止生长并停止产生抗体。在该过程期间积累的代谢物是细胞增殖和抗体产生中的主要限速原因之一。为了控制哺乳动物细胞的代谢和提高生产能力，识别抑制性代谢废物并研究其通路是至关重要的。
2、所需要的是抑制性代谢物的鉴别和控制策略的开发。
技术实现思路
1、在一个方面，细胞培养方法包括(i)在细胞培养基中培养细胞，和(ii)将至少一种代谢物维持在细胞培养基中的该至少一种代谢物的抑制浓度以下，其中该至少一种代谢物是乌头酸(aa)、亮氨酸(leucinic acid，hica)、胞苷一磷酸(cmp)、甲基琥珀酸(msa)、葫芦巴碱(tri)、n-乙酰腐胺(nap)或它们的组合，并且其中酶包括adh5、bcat1、cat、got1、hadhb、hoga1、slc35a1或它们的组合。
1.一种细胞培养方法，其包括
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括测量所述至少一种代谢物的浓度，并且当所测量的所述至少一种代谢物的浓度高于预定值时，调节酶表达以减少所述代谢物的合成。
3.根据权利要求2所述的方法，其中调节酶表达以减少所述代谢物的合成包括添加重组dna分子以过表达所述酶，其中所述酶是下游酶。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述代谢物是hica并且所述酶包括adh5、bcat1、slc35a1、got1、hadhb或它们的组合；
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述酶包括adh5、bcat1、got1、hadhb、hoga1、slc35a1和cat。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种代谢物的浓度使用核磁共振(nmr)光谱、拉曼光谱、高效/超高效液相色谱(h/uplc)、液相色谱质谱(lc-ms)、气相色谱质谱(gc-ms)技术或它们的组合测量。
7.根据权利要求1所述的方法，其中将所述至少一种代谢物维持在所述细胞培养基中的所述至少一种代谢物的抑制浓度以下包括控制温度、溶氧水平、ph或它们的组合。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞是cho细胞、hek 293细胞、ht-1080细胞、工程化t细胞或者工程化自然杀伤细胞。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞培养是分批培养、补料分批培养或灌注培养。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞表达重组蛋白、基因产物或细胞产物。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述重组蛋白是单克隆抗体。
12.根据权利要求1所述的方法，其中与对照培养物相比，细胞生长和/或生产能力提高，其中所述对照培养物与根据权利要求1的培养物相同，除了其未使用步骤(ii)进行培养。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述细胞生长通过最大活细胞密度确定，并且与所述对照培养物相比提高至少5％。
14.根据权利要求1所述的方法，其中所述代谢物是aa并且所述细胞培养基中aa的浓度小于440μm，
15.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种代谢物的浓度使用核磁共振(nmr)光谱、拉曼光谱、高效/超高效液相色谱(h/uplc)、液相色谱质谱(lc-ms)、气相色谱质谱(gc-ms)技术或它们的组合测量。
