本发明涉及生物医药，特别是涉及一种提高th9细胞分化效率的体外处理方法。
背景技术：
1、过继性细胞疗法（adoptive cell therapy，act）作为癌症免疫治疗领域的一个前沿分支，近年来在肿瘤治疗方面取得了显著进展，为众多患者提供了新的治疗希望。该疗法的基本原理是，通过体外激活、扩增患者自身的免疫细胞，尤其是具有肿瘤特异性的t细胞，然后将这些经过改造的细胞重新回输到患者体内，以识别和摧毁肿瘤细胞。传统上，act主要聚焦于cd8+细胞毒性t细胞（ctls），这类细胞能够直接杀死被识别的癌细胞，是肿瘤免疫应答中的关键效应细胞。然而，随着研究的深入，cd4+t细胞在抗肿瘤免疫中的作用也日益凸显，尤其是其亚群如th1和th17细胞，它们通过调节免疫反应、促进ctl的激活和维持，以及调节肿瘤微环境等方式，间接或直接地参与抗肿瘤过程。
2、在众多cd4+t细胞亚群中，th9细胞是一个相对较新且充满研究潜力的群体。自2008年被首次发现并报道以来，th9细胞因其独特的细胞因子分泌模式（主要分泌il-9，同时也可产生il-21和il-3）和在多种疾病中的重要作用而备受关注。在肿瘤免疫学中，th9细胞展现出了独特的抗肿瘤潜力。它们通过分泌的il-9等细胞因子，不仅能够直接作用于肿瘤细胞，抑制其生长和增殖，还能激活和调节其他免疫细胞，如树突状细胞（dcs）、cd8+ctls、自然杀伤细胞（nk细胞）和肥大细胞，形成一个复杂的免疫网络，共同作用于肿瘤微环境，促进抗肿瘤免疫应答的增强。
3、尤为值得一提的是，近期的研究表明，在小鼠模型中，通过回输th9细胞可以彻底根除黑色素瘤，这一成果不仅验证了th9细胞在抗肿瘤治疗中的有效性，还揭示了其在某些类型肿瘤（如通常被认为是“冷肿瘤”的黑色素瘤）中可能具有超越其他t细胞亚群（如th1和th17）的显著治疗效果。冷肿瘤指的是那些免疫细胞浸润较少、免疫反应较弱的肿瘤，这类肿瘤往往对传统免疫疗法响应不佳，而th9细胞的发现为这类肿瘤的治疗提供了新的策略。
4、然而，尽管th9细胞展现出巨大的治疗潜力，但如何在体外有效扩增这些细胞，以满足临床act治疗的需求，仍是当前面临的一大挑战。传统的细胞扩增方法可能无法高效地诱导和维持th9细胞的分化，且可能伴随有细胞功能下降或分化方向偏离等问题。因此，开发新的、高效的th9细胞扩增技术，对于推动act在肿瘤治疗中的应用具有重要意义。
5、另一方面，索拉非尼（sorafenib，简写为sora）作为一种多靶点、多激酶抑制剂，在临床实践中已显示出对多种肿瘤（包括肝细胞癌、肾细胞癌和特定类型的甲状腺癌）的有效抑制作用。其通过抑制肿瘤细胞及其血管上的关键激酶，如丝氨酸/苏氨酸激酶和受体酪氨酸激酶，实现了抑制肿瘤增殖和血管生成的双重功效。尽管索拉非尼主要作为单药治疗使用，但近年来也有研究探索其与其他治疗手段（如免疫疗法）联合使用的可能性，以期达到更好的治疗效果。
6、然而，索拉非尼与th9细胞是否具有相关性，尚未见相关报道。
技术实现思路
1、基于现有技术中的不足，本发明提供了一种提高th9细胞分化效率的体外处理方法。
2、初始cd4+t细胞在体外可经tgf-β联合il-4诱导，从而分化为一类可分泌il-9、il-10以及il-21的th9细胞。在此手段上申请人将进一步提高th9细胞的分化效率，申请人筛查临床上常用的激酶抑制剂是否可以提高th9细胞的分化效率，发现索拉非尼可以显著促进th9细胞分化。
3、申请人的前期研究数据显示，索拉非尼可以显著提高体外th9细胞的分化效率。分析相关机制，索拉非尼促进th9细胞分化依赖于erk信号通路。
4、因此，将体外索拉非尼处理和不处理的th9细胞尾静脉回输至其他冷肿瘤例如乳腺癌和骨肉瘤肺转移小鼠体内，结果显示，与回输索拉非尼不处理的th9细胞的乳腺癌和骨肉瘤肺转移小鼠相比较，回输索拉非尼处理的th9细胞的乳腺癌和骨肉瘤肺转移小鼠的抗肿瘤免疫能力增强，肿瘤进展也缓慢。
5、首先，本发明提供了一种提高th9细胞分化效率的体外处理方法，在cd4+t细胞向th9细胞分化时，使用索拉非尼处理cd4+t细胞。
6、优选的，使用索拉非尼的浓度为0.2~2 μm。还包括诱导处理th9细胞，诱导处理条件为：使用10 μg/ml anti-ifnγ，20 ng/ml il4和10 ng/ml tgf-β进行铺板诱导分化。
7、本发明还提供了索拉非尼在制备抗肺转移性肿瘤的药物中的应用，所述索拉非尼为索拉非尼本身或药学上可接受的盐。
8、索拉非尼在临床上用来治疗不能切除的肝细胞癌、晚期肾细胞癌以及局部复发或转移性、渐进性、分化型并且难以用放射性碘治疗的甲状腺癌。因此，索拉非尼作为现成的药物，治疗肺转移性肿瘤具有极高的安全性。同时，体内试验结果显示，回输索拉非尼处理后的th9细胞显著延长了小鼠4t1-ova（小鼠乳腺癌细胞）或k7m2-ova（小鼠骨肉瘤细胞）肺转移肿瘤模型的生存时间。机制在于索拉非尼能够显著增加th9细胞中蛋白激酶p-erk的表达水平。
9、优选的，所述肺转移性肿瘤由乳腺癌或骨肉瘤引起。
10、在cd4+t细胞向th9细胞分化时加入索拉非尼，使用索拉非尼的浓度为0.2~2 μm。
11、体内实验表明，回输索拉非尼处理后的th9细胞显著增加了小鼠4t1-ova或k7m2-ova肺转移肿瘤模型脾脏中cd8+cd45+细胞的比例，减少了小鼠肺部4t1-ova和k7m2-ova肿瘤面积，进而延长了小鼠4t1-ova或k7m2-ova肺转移肿瘤模型的生存时间。
12、本发明还提供了一种抗肺转移性肿瘤的药物，活性成分包含th9细胞，所述th9细胞为cd4+t细胞向th9细胞分化过程中加入索拉非尼刺激得到，所述索拉非尼为索拉非尼本身或药学上可接受的盐。使用索拉非尼的浓度为0.2~2 μm。
13、优选的，所述药物的剂型为液体注射剂。本申请中为将th9细胞通过尾部静脉回输至小鼠4t1-ova或k7m2-ova肺转移肿瘤模型小鼠体内。所述液体注射剂的剂量为每只小鼠回输3×106个th9细胞。
14、综上所述，本发明研究发现了索拉非尼可以显著提高体外th9细胞分化效率，表明索拉非尼可以体外大量扩增具有抗肿瘤作用的th9细胞，为临床肿瘤的act治疗方法提供了新思路和新途径。
1.一种提高th9细胞分化效率的体外处理方法，其特征在于，在cd4+ t细胞向th9细胞分化时，使用索拉非尼处理cd4+ t细胞。
2.如权利要求1所述提高th9细胞分化效率的体外处理方法，其特征在于，使用索拉非尼的浓度为0.2~2 μm。
3.如权利要求1所述提高th9细胞分化效率的体外处理方法，其特征在于，还包括诱导处理th9细胞，诱导处理条件为：使用10 μg/ml anti-ifnγ，20 ng/ml il4和10 ng/mltgf-β进行铺板诱导分化。
4.索拉非尼在制备抗肺转移性肿瘤的药物中的应用，所述索拉非尼为索拉非尼本身或药学上可接受的盐。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述肺转移性肿瘤由乳腺癌或骨肉瘤引起。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，在cd4+ t细胞向th9细胞分化时加入索拉非尼，使用索拉非尼的浓度为0.2~2 μm。
7.一种抗肺转移性肿瘤的药物，其特征在于，活性成分包含th9细胞，所述th9细胞为cd4+ t细胞向th9细胞分化过程中加入索拉非尼刺激得到，所述索拉非尼为索拉非尼本身或药学上可接受的盐。
8.如权利要求7所述的药物，其特征在于，使用索拉非尼的浓度为0.2~2 μm。
