本发明属于微生物，涉及一种复合菌剂，具体为纤维素降解复合菌剂及其制备方法和应用。
背景技术：
1、长期以来，蚕砂资源化利用率较低，除极少部分被用来提取叶绿素、蛋白质和果胶之外，大部分蚕砂被随意丢弃或堆沤作肥料。目前传统堆肥仍是蚕砂无害化和资源化处理最常见的、也是最重要的一种处理方式，该方法的缺陷在于发酵时间长、有臭味产生、肥效低。而富含大量难降解的纤维素是蚕砂高效资源化利用的瓶颈，严重限制了蚕砂堆肥资源化处理的效率。因此，加速纤维素的分解便成了农业废弃物快速、充分腐熟资源化的关键。
2、高产纤维素酶的功能菌常作为外源微生物菌剂，用于高纤维素农业废弃物的高效无害化处理，具有生态兼容性好、成本低、使用方便、无二次污染等优点，在高纤维素农业废弃物资源化和无害化处理领域具有天然的优势，备受重视和期待。但当前研究多聚焦单菌株的降解性能，而单菌株所产水解酶的种类和数量有限，应对环境变化的缓冲能力不高，降解效果并不理想。复合菌系则是将不同类型的纯培养物配伍组合，其酶系相比单菌株更均衡，可通过相互间的协同作用提升纤维素转化率，降解覆盖率更高。因此，相对于单一降解菌的筛选和应用而言，复合菌系的研究更值得关注。
技术实现思路
1、解决的技术问题：为了克服现有技术的不足，解决单株菌在降解纤维素过程中效率低的缺陷，筛选、分离并构建高产纤维素酶的复合菌剂，以实现不同菌株之间协同增效的目的。鉴于此，本发明提供了纤维素降解复合菌剂及其制备方法和应用。
2、技术方案：纤维素降解复合菌剂，所述复合菌剂包括枯草芽孢杆菌dc11和特基拉芽孢杆菌dc-15，复合菌剂中的总活菌数至少为2.27×108cfu/ml，二者均是从蚕砂中分离、纯化获得；其中，枯草芽孢杆菌dc11分类命名为bacillus subtilis dc11，保藏编号为cgmccno.23618，保藏日期为2021年10月18日，特基拉芽孢杆菌dc-15分类命名为bacillustequilensis dc-15，保藏编号为cgmcc no.29229，保藏日期为2023年12月4日，保藏单位均为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地点为中国北京。
3、优选的，所述复合菌剂中：枯草芽孢杆菌dc11的活菌数为1.95-2.44×108cfu/ml，特基拉芽孢杆菌dc-15的活菌数为1.75-2.14×108cfu/ml。
4、所述的纤维素降解复合菌剂的制备方法，包括以下步骤：
5、s1、将枯草芽孢杆菌dc11和特基拉芽孢杆菌dc-15分别接种于lb液体培养基中，37℃摇床培养20-24h得到两种种子液；
6、s2、将两种种子液混合，接种于液体产酶培养基中进行扩大培养，控制有效总活菌数至少为2.27×108cfu/ml，获得复合菌剂。
7、优选的，s1中，两种种子液的培养条件为37℃、摇床转速为160rpm/min、培养时长为24h。
8、优选的，s2中，两种种子液按照体积比1:1混合。
9、优选的，s2中，两种种子液分别培养至指数生长期，离心富集菌体至终浓度为od600＝1.8，种子液混合后加入液体产酶培养基中，在37℃、初始ph＝7.0的条件下培养20h，得到复合菌剂。
10、优选的，所述液体产酶培养基的组成为：胰蛋白胨10.0g/l，酵母提取物10.0g/l，cmc-na 10.0g/l，nacl 5.0g/l，kh2po41.0 g/l、mgso4·7h2o 0.2g/l，ph 7.0，蒸馏水1l。
11、以上所述的纤维素降解复合菌剂在蚕砂废弃物堆肥、桑树废弃枝条降解、或有机废弃物中纤维素降解中的应用。
12、优选的，所述复合菌剂应用前，采用无机盐培养基洗涤、取沉淀，再加入无菌无机盐培养基制成菌悬液，制得复合菌剂接种液。
13、优选的，所述无机盐培养基的组成为：(nh4)2so41.5 g,kh2po40.5 g,k2hpo41.5 g,mgso40.5 g,ph 7.0，蒸馏水1l。
14、优选的，纤维素降解复合菌剂添加的百分含量为1.5-3.0％。
15、进一步的，将所述复合菌剂用于蚕砂降解时，可将蚕砂与麦麸按质量比2:1混合，然后向其中接种复合菌剂，混合均匀后连续发酵6-7天。
16、本发明所述复合菌剂协同作用的原理在于：本发明所述复合菌剂利用了特基拉芽孢杆菌繁殖能力强、适应性好、促进纤维素降解和土传病害的防治作用，结合枯草芽孢杆菌以协同提高酶系活力、分泌内切纤维素酶加速纤维素降解的作用。两种菌系的协同作用更好地促进了蚕砂等高纤维农业废弃物的降解，提高蚕砂堆肥资源化处理的效率，很大程度上促进了纤维素的腐解利用。
17、有益效果：(1)本发明所述复合菌剂具有促进纤维素和粗蛋白降解、提高发酵产品速效养分和发酵效率、增加堆肥无害化程度与作物促生长效果等多重功能；复合菌剂的纤维素内切葡聚糖酶(cmcase)酶活达86.48u·ml-1，滤纸酶(fpa)酶活达73.5u·ml-1，外切β-葡聚糖苷酶(cbh)酶活达82.61u·ml-1，活力值明显大于单一菌种酶活力值的简单加和，协同效果明显；(2)所述复合菌剂应用于高纤维含量的蚕砂堆肥时，在6天的发酵过程中，本发明菌剂处理堆体的理化性质变化明显优于单一菌体，堆肥产品养分含量显著提高，安全性与无害化程度明显增强，有利于促进植物生长。针对难降解的蚕砂纤维素，该复合菌剂展现出极强的纤维素降解潜力，且具有很好的生物强化效果，为蚕砂快速资源化循环利用奠定理论基础和提供实践指导。
1.纤维素降解复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂包括枯草芽孢杆菌dc11和特基拉芽孢杆菌dc-15，复合菌剂中的总活菌数至少为2.27×108cfu/ml，二者均是从蚕砂中分离、纯化获得；其中，枯草芽孢杆菌dc11分类命名为bacillus subtilis dc11，保藏编号为cgmcc no.23618，保藏日期为2021年10月18日，特基拉芽孢杆菌dc-15分类命名为bacillustequilensis dc-15，保藏编号为cgmcc no.29229，保藏日期为2023年12月4日，保藏单位均为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地点为中国北京。
2.根据权利要求1所述的纤维素降解复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂中：枯草芽孢杆菌dc11的活菌数为1.95-2.44×108cfu/ml，特基拉芽孢杆菌dc-15的活菌数为1.75-2.14×108cfu/ml。
3.权利要求1或2所述的纤维素降解复合菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的纤维素降解复合菌剂的制备方法，其特征在于，s2中，两种种子液按照体积比1:1混合。
5.根据权利要求3所述的纤维素降解复合菌剂的制备方法，其特征在于，s2中，两种种子液分别培养至指数生长期，离心富集菌体至终浓度为od600＝1.8，种子液混合后加入液体产酶培养基中，在37℃、初始ph＝7.0的条件下培养20h，得到复合菌剂。
6.根据权利要求3所述的纤维素降解复合菌剂的制备方法，其特征在于，所述液体产酶培养基的组成为：胰蛋白胨10.0g/l，酵母提取物10.0g/l，cmc-na 10.0g/l，nacl 5.0g/l，kh2po41.0 g/l、mgso4·7h2o 0.2g/l，ph 7.0，蒸馏水1l。
7.权利要求1或2所述的纤维素降解复合菌剂在蚕砂废弃物堆肥、桑树废弃枝条降解、或有机废弃物中纤维素降解中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述复合菌剂应用前，采用无机盐培养基洗涤、取沉淀，再加入无菌无机盐培养基制成菌悬液，制得复合菌剂接种液。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述无机盐培养基的组成为：(nh4)2so41.5g,kh2po40.5 g,k2hpo41.5 g,mgso40.5 g,ph 7.0，蒸馏水1l。
10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，纤维素降解复合菌剂添加的百分含量为1.5-3.0％。
