本发明涉及药材提取,具体涉及一种铃铛子托品烷类生物碱的提取方法。
背景技术:
1、铃铛子是茄科山莨菪属的多年生草本植物,与同属植物三分三、山莨菪等共同作为中国传统藏药“莨菪”的基原植物。“莨菪”始记载于《月王药诊》,为藏药常用药材,《晶珠本草》中记载:“其功效杀虫,可治黄水病、胃病、肾脏病、炭疽病和癫狂病。”铃铛子通常以根和种子入药,具有杀虫、镇惊、解毒等作用,在部分地区还被用于治疗瘟疫。铃铛子地下部分含有丰富的托品烷类生物碱(tas),托品烷类生物碱是一类重要的植物次生代谢产物,属于特殊类型的生物碱,主要存在于茄科、桑科和旋花科等植物中,此类生物碱大多具有显著的药理活性,如从茄科植物中提取的莨菪碱(hyoscyamine)、东莨菪碱(scopolamine)和山莨菪碱(anisodamine)等成分具有抗胆碱能作用,在治疗胃肠道疾病、帕金森病等中枢神经系统疾病方面的应用非常广泛,被世界卫生组织列为基本药物。近年来,随着该类生物碱的医疗应用范围不断扩大和市场需求日益增加,其需求量正在逐步增长,但同时它们的供应又面临多种因素的挑战,包括植物原料的可获得性、提取或合成工艺的效率、某些突发事件的影响等。
2、铃铛子在藏医药中的应用历史悠久,但迄今为止,关于其化学成分、生物学特性等药效物质基础方面的科学研究相对匮乏。此外,针对铃铛子已知的活性成分,目前也暂未建立专属、高效的提取工艺。同时,与我国传统药源植物颠茄、曼陀罗等相比,铃铛子具有生物量大、生物碱含量高的特点,非常适宜在西藏等高海拔地区大面积规范化种植,因此作为托品烷类生物碱潜在的药源植物,铃铛子具有很大的开发价值。
技术实现思路
1、有鉴于此,本发明的目的在于提供一种铃铛子托品烷类生物碱的提取方法。
2、为达到上述目的,本发明提供如下技术方案:
3、1.一种铃铛子托品烷类生物碱的提取方法,包含如下步骤:
4、(1)醇提:将铃铛子地下部分,洗净晒干并粉碎,过40目筛,然后选择1:6-15的料液比(单位:g:ml)与60%-100%的乙醇溶液混合,在50℃-85℃温度下热浸提取10-50min,重复提取1-5次;
5、(2)复溶:将步骤(1)的提取液离心后合并,在55℃下减压浓缩至无醇味,得总提取物粗浸膏,然后用1% hcl:10% hcl(v/v,2:1)重悬,静置15min,过滤;
6、(3)萃取:将步骤(2)获得的总提取物盐酸复溶液用等体积的正己烷:乙酸乙酯(v/v,1:1)的混合溶液萃取2次,除去非(弱)极性成分,再用氨水碱化酸水层至ph=9-10,以等体积二氯甲烷萃取3次;
7、(4)浓缩:将步骤(3)得到的二氯甲烷萃取部分,在40℃下除去溶剂,即得铃铛子托品烷类生物碱。
8、本发明优选的,还包括以下步骤:
9、(5)含量测定:将经以上步骤处理后所获得到托品烷类生物碱样品,使用超高效液相色谱仪进行含量检测。
10、本发明优选的,还包括如下优化步骤:
11、(6)通过单因素实验筛选出乙醇浓度(x1)、提取温度(x2)和提取时间(x3)三个条件,进行响应面法中的ccd实验,每个自变量设计5个水平,分别为-1.682、-1、0、1、1.682。
12、(7)按照ccd设计原理进行实验方案设计,并开展实验;
13、(8)利用design-expert 13.0软件分析实验结果并获得铃铛子托品烷类生物碱得率(mg/g)的多元线性回归方程模型,得出托品烷类生物碱的最佳提取条件,所述方程模型为:
14、z=-22.95418+0.591372x1+0.093803x2+0.292148x3+0.003198x1x2-0.003588x1x3+
15、0.000689x2x3-0.004722x12-0.002633x22-0.001501x32。
16、本发明优选的,步骤(1)中,优化后的提取条件为:乙醇浓度为78%,提取温度为68℃,提取时间为20min。
17、本发明优选的,步骤(1)中,乙醇浓度为80%,提取温度为70℃,提取时间为20min。
18、本发明优选的,步骤(1)中,乙醇浓度为74%,提取温度为64℃,提取时间为26min。
19、本发明优选的,步骤(1)中,乙醇浓度为80%,提取温度为70℃,提取时间为10min。
20、本发明的有益效果是:本发明提供了一种醇提铃铛子托品烷类生物碱的工艺,将铃铛子地下部分干燥粉碎过筛后经过醇提、复溶、萃取浓缩、含测等工艺过程制得铃铛子托品烷类生物碱。通过单因素和响应曲面实验优化醇提法提取铃铛子托品烷类生物碱工艺,拟合了乙醇浓度(ethanol)、提取温度(temperature)和提取时间(time)三个因素对铃铛子托品烷类生物碱得率的多元线性回归方程模型,通过实际测定验证该模型能够较好预测生物碱的得率,进而得到最佳的提取条件。
21、该方法成本较低,稳定可行,重复性好,制备得到的托品烷类生物碱含量和纯度较高。铃铛子具有较大的生物量,且含有丰富的托品烷类生物碱,而目前针对托品烷类生物碱的提取工艺研究并不多见,该方法为大规模托品烷类生物碱的相关生产和应用提供了参考,具有潜在的市场开发前景。
1.一种铃铛子托品烷类生物碱的提取方法,其特征在于,包含如下步骤:
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,还包括以下步骤:
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,还包括如下建模步骤:
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,优化后的提取条件为:乙醇浓度为78%,提取温度为68℃,提取时间为20min。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,乙醇浓度为80%,提取温度为70℃,提取时间为20min。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,乙醇浓度为74%,提取温度为64℃,提取时间为26min。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,乙醇浓度为80%,提取温度为70℃,提取时间为10min。