本发明属于动物传染病防治，具体涉及一种牛疱疹病毒1型毒株及其应用。
背景技术：
1、牛疱疹病毒1型(bovine herpesvirus-1，bohv-1)属于疱疹病毒科(herpesviridae)α-疱疹病毒亚科(alphaherpesvirinae)水痘病毒属(varicellovirus)，也称为牛传染性鼻气管炎病毒(infection bovine rhinotracheitis virus，ibrv)。bohv-1是牛传染性鼻气管炎病的病原，能引起牛发生一种急性、热性、接触性传染病，主要临床表现为上呼吸道及气管炎、黏膜炎、高热、流鼻汁、呼吸困难、流产等。bohv-1感染后可引起机体免疫抑制，继发细菌或其他病毒感染，造成严重的肺炎，称为牛呼吸道疾病综合征(bovine respiratory disease complex，brdc)，又称“运输热”，给世界养牛业造成了巨大损失。此外，bohv-1感染机体后可潜伏感染于三叉神经和腰、荐神经节内，当机体受到运输、分娩和环境变化等应激因素时病毒可以活化，并不断向环境排放病毒，形成病毒传播的重要的传染源，给该病的控制和消灭带来了极大困难。bohv-1主要感染牛，也可感染其他偶蹄动物如山羊、绵羊、水牛和骆驼等，目前跨物种传播机制并不清楚，感染宿主的多样性给该病的防控增加困难。
2、目前分离到的bohv-1都具有相同的抗原性，只有1个血清型，而通过病毒基因组酶切图谱或糖蛋白基因gc基因，可将不同的bohv-1毒株区分为三种亚型：bhv-1.1、bhv-1.2和bhv-1.3，其中bhv-1.2型又可分为1.2a和1.2b型，bhv-1.1型和1.2a型主要引起呼吸道疾病；1.2b型主要引起生殖系统疾病，但也有引起呼吸道疾病的报道。bhv-1.3也就是bhv-5，可引起脑炎。
3、bohv-1的基因组约135kb，g+c含量为72％，基因组包含两个反向重复序列(irs和trs，各为11kb)位于短独特区(us，13kb)的两侧，序列相同方向相反，因而短区能够反转方向，使病毒dna具有两种异构体。总共包含73个编码框(open reading frame，orf)，编码73个蛋白质，属于病毒复制增殖必需蛋白有33个，包括糖蛋白gb、gd、gh、gl和gk等；非必需蛋白有36个，包括糖蛋白(gc、ge、gi、gg、gm)、胸苷激酶蛋白(tk)、脱氧尿苷三磷酸酶蛋白、包膜蛋白(ul49、us9)、膜蛋白(ul49.5)和调节蛋白(us3、bicp0、bicp22、circ)等。
4、gb在疱疹病毒科的糖蛋白中最保守，对病毒在细胞上的增殖是必需。gb可与细胞表面的硫酸乙酰肝素结受体结合，介导病毒侵入、病毒在细胞间的扩散等过程并引起细胞融合。gb具有免疫原性，胞外区可诱导中和抗体和t细胞免疫反应。gk在α疱疹病毒中较为保守，可与ul20相互作用，在膜融合、病毒粒子包装、病毒释放和扩散中发挥作用，对于病毒复制和传播至关重要。gm可与gn形成复合物，在gn介导的与抗原加工(tap)相关的转运蛋白抑制中，发挥免疫调节的作用，封阻了被感染的细胞内mhc-i的复合体的集合。vp8由ul47基因编码，在瞬时表达或在病毒感染时，能够在细胞核与细胞质之间进行穿梭。当ul47被缺失时，缺失毒株复制严重受损，在牛体上毒力减弱，并且不能诱导产生显著的免疫反应。
5、目前牛传染性鼻气管炎无特效药进行治疗，疫苗免疫策略是防控该病的主要手段。临床数据显示，灭活疫苗免疫效果不理想。国内有基因缺失毒株的相关报道，但国外更多的天然弱毒株作为疫苗候选株，目前国内尚未有相关的应用，这给该病相关活疫苗的研发和应用，带来了一定的困难。
技术实现思路
1、本发明第一方面的目的，在于提供一种牛疱疹病毒1型(bovine herpesvirus 1)弱毒病毒株。
2、本发明第二方面的目的，在于提供本发明第一方面的牛疱疹病毒1型弱毒病毒株在制备预防和/或治疗牛传染性鼻气管炎病的产品中的应用。
3、本发明第三方面的目的，在于提供本发明第一方面的牛疱疹病毒1型弱毒病毒株在制备调控牛疱疹病毒1型致病力的产品中的应用。
4、本发明第四方面的目的，在于提供本发明第一方面的牛疱疹病毒1型弱毒病毒株在制备诊断试剂中的应用。
5、本发明第五方面的目的，在于提供一种牛疱疹病毒1型疫苗。
6、为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：
7、本发明的第一个方面，提供一种牛疱疹病毒1型(bovine herpesvirus 1)弱毒病毒株，该弱毒病毒株命名为bohv-1gd04m，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no:v202457。
8、通过提取该病毒株的全基因组进行高通量测序，获得一条完整的病毒基因组序列，基因组全长133 702bp，gc含量高达72％。通过gc片段的比对分析，该病毒属于bohv-1.1亚型该病毒株。该毒株对牛无毒力，免疫原性好，可作为弱毒活疫苗的候选株，对该病的防控具有重要的意义。
9、本发明的第二个方面，提供本发明第一方面的牛疱疹病毒1型弱毒病毒株在制备预防和/或治疗牛传染性鼻气管炎病的产品中的应用。
10、在本发明一些实施方式中，所述产品包括疫苗或药物。
11、在本发明一些实施方式中，所述疫苗选自单价疫苗、多价疫苗、多联疫苗中的一种。
12、所述单价疫苗是指只含有本发明牛疱疹病毒1型弱毒病毒株的病毒血清；所述多价疫苗是指本发明牛疱疹病毒1型弱毒病毒株的病毒血清与其他可以预防和/或治疗牛传染性鼻气管炎的病毒株的一种或多种血清混合制成的疫苗；所述多联疫苗是指本发明牛疱疹病毒1型弱毒病毒株的病毒血清与可以预防和/或治疗其他病毒的几种病原微生物或血清混合制成的疫苗。
13、本发明的第三个方面，提供本发明第一方面的牛疱疹病毒1型弱毒病毒株在制备调控牛疱疹病毒1型致病力的产品中的应用。
14、在本发明一些实施方式中，所述产品包括试剂和药物。
15、本发明的第四个方面，提供本发明第一方面的牛疱疹病毒1型弱毒病毒株在制备诊断试剂中的应用。
16、在本发明一些实施方式中，所述诊断试剂包括用于诊断牛疱疹病毒的抗原。
17、在本发明一些实施方式中，所述用于诊断牛疱疹病毒的抗原是由本发明第一方面的牛疱疹病毒1型弱毒病毒株的gb基因表达制备gb糖蛋白。
18、本发明的第五个方面，提供一种牛疱疹病毒1型疫苗，所述疫苗的活性成分包含本发明第一方面的牛疱疹病毒1型弱毒病毒株。
19、在本发明一些实施方式中，所述疫苗还包括药学上接受辅料。
20、在本发明一些实施方式中，所述辅料包括诊断剂、载剂、保护剂、佐剂、赋形剂或稀释剂中至少一种。
21、在本发明一些实施方式中，所述疫苗的免疫方式包括滴鼻、注射、口服、浸泡或点眼；优选为滴鼻的方式。
22、在本发明一些实施方式中，所述疫苗包括灭活疫苗或活疫苗(减毒疫苗)。
23、在本发明一些实施方式中，所述疫苗的制备方法包括利用本发明第一方面的牛疱疹病毒1型弱毒病毒株在细胞上传代培养，收集病毒液，加入辅料，即得到疫苗。
24、在本发明一些实施方式中，所述疫苗中含有至少107.0tcid50/ml的牛疱疹病毒1型弱毒病毒株病毒液。
25、本发明的有益效果是：
26、本发明人通过分离鉴定，首次从无症状牛的鼻拭子中获得一株bohv-1gd04m，体内和体外均验证该病毒毒力天然减弱，且存在免疫原性良好等特性，这为研究bohv-1的弱毒活疫苗的研发提供了天然弱毒株。
27、bohv-1gd04m感染牛后，通过临床症状评分、鼻腔排毒和肺脏组织病理变化，表明本发明提供的毒株对牛无致病力，显著低于参考毒株bohv-1cooper(genbank：ku198480)，且显示出良好的免疫原性(107.0tcid50/ml的bohv-1gd04m株病毒液感染牛后中和效价可达到1:140)，与参考毒株bohv-1cooper(genbank：ku198480)的免疫原性类似。
1.一种牛疱疹病毒1型(bovine herpesvirus 1)弱毒病毒株，该弱毒病毒株命名为bohv-1gd04m，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no:v202457。
2.权利要求1所述的牛疱疹病毒1型弱毒病毒株在制备预防和/或治疗牛传染性鼻气管炎病的产品中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述产品包括疫苗或药物。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述疫苗选自单价疫苗、多价疫苗、多联疫苗中的一种。
5.权利要求1所述的牛疱疹病毒1型弱毒病毒株在制备调控牛疱疹病毒1型致病力的产品中的应用。
6.权利要求1所述的牛疱疹病毒1型弱毒病毒株在制备诊断试剂中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述诊断试剂包括用于诊断牛疱疹病毒的抗原。
8.一种牛疱疹病毒1型疫苗，所述疫苗的活性成分包含权利要求1所述的牛疱疹病毒1型弱毒病毒株。
9.根据权利要求7所述的牛疱疹病毒1型疫苗，其特征在于，所述疫苗还包括药学上接受的辅料；优选地，所述辅料包括诊断剂、载剂、保护剂、佐剂、赋形剂或稀释剂中至少一种。
10.根据权利要求7所述的牛疱疹病毒1型疫苗，其特征在于，所述疫苗的免疫方式包括滴鼻、注射、口服、浸泡或点眼。
