本发明属于生物医药，具体涉及一种能够与hvem蛋白特异性结合的多肽、其组合物和应用。
背景技术：
1、癌症是由异常细胞增殖和恶性转化导致的疾病。这些异常细胞会不受控制地分裂并形成肿瘤，从而破坏正常组织和器官的功能。癌症的传统治疗方法主要包括手术治疗、放疗、化疗及靶向药物疗法这四类。然而这四种方法均具备各自的局限性，例如，手术切除属于创伤性治疗手段，存在术后并发症、无法解决微小病灶以及转移性病灶等问题；放疗、化疗不仅杀死癌细胞，对于身体健康细胞和正常组织器官也产生较大的毒副作用；靶向药物容易产生耐药性，导致治疗效果逐渐减弱，同时，靶向蛋白的异质性也可能导致治疗效果具有较大的差异性。
2、在免疫应答过程中，免疫细胞表面的检查点蛋白通过与其对应的配体相互作用来调节t细胞和其他免疫细胞的激活和功能，从而控制机体免疫反应的强度和范围。在正常情况下，这些免疫检查点蛋白可以帮助维持机体免疫平衡，避免过度的免疫反应和自身免疫反应。然而，在某些情况下，如癌症等疾病中，肿瘤细胞和其他免疫逃逸机制可以利用这些免疫检查点蛋白来抑制免疫细胞的激活和效应，从而逃避免疫监视和攻击。因此，免疫检查点蛋白已经成为一种重要的免疫治疗靶点，其抑制剂已经被广泛研究并应用于肿瘤等疾病的治疗中。
3、b和t淋巴细胞弱化因子(b and t lymphocyte attenuator，btla)作为一种类似ctla-4和pd-1的免疫检查点抑制性受体，其通过与其唯一的配体疱疹病毒进入介质(herpes virus entry mediator，hvem)结合来调控t细胞的活化。癌细胞通过过表达hvem蛋白，与t细胞表面的btla结合后，引起t细胞中shp-1和shp-2的募集，从而下调tcr信号传导并传递抑制信号，同时，grb-2结合基序与grb-2结合，导致pi3k蛋白亚基p85的募集和pi3k信号通路的刺激，进而影响细胞的功能。
4、截止2022年，经过fda批准的免疫检查点抑制剂药物仅有pd-1、pd-l1、ctla-4、lag3这四个靶点，大多数免疫检查点蛋白都没有得到开发，免疫抑制剂联用的发展也因此受到较大的限制。与此同时，针对免疫检查点抑制剂的开发，主要集中于抗体类药物，具有研发成本高、周期长、存在免疫原性等特点。目前，针对btla/hvem通路的多肽类抑制剂开发较为有限，多是从自然界已知的序列信息出发，经过合理选择或理性突变等进行挑选和优化。
技术实现思路
1、本发明的目的是提供一种能够与hvem蛋白特异性结合的多肽，即，靶向hvem蛋白的多肽，所述多肽与hvem蛋白具备高亲和力、高选择性，在与hvem蛋白结合后阻止其与btla结合，从而避免了对t细胞激活的抑制、增强t细胞应答，可用于诊断和治疗癌症等。
2、根据本发明的第一个方面，本发明涉及一种多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐，所述多肽具有选自如下的序列：
3、p1：gly-cys-thr-cys-pro-arg-gly-trp-val-cys-leu-ala-arg-glu-pro-cys；
4、p2：gly-cys-arg-cys-gln-ser-lys-pro-trp-cys-arg-ala-arg-val-glu-cys。
5、根据本发明，p1的环肽选自：
6、
7、
8、其中，表示两个cys的侧链形成二硫键。
9、根据本发明，p2的环肽选自：
10、p2-c(1-3,2-4):
11、
12、其中，表示两个cys的侧链形成二硫键。
13、在本发明中，使用本领域公认的3字母缩写来表示构成本发明多肽的氨基酸残基。除非缩写前面有“d”，否则缩写所表示的氨基酸为l-氨基酸。
14、根据本发明，“酰胺”意指n-末端氨基的衍生物，例如但不限于乙酰胺、甲酰胺、三氟乙酰胺、苯甲酰胺、2-氨基苯甲酰胺、氯乙酰胺、溴乙酰胺等。
15、根据本发明，“酯”意指c-末端羧酸的衍生物，例如甲酯、乙酯、正丙酯、异丙酯、正丁酯、环戊酯、环己酯、苯酯、苄酯、新戊酰基氧基甲基酯等。
16、根据本发明，“盐”意指可药用盐，包括与酸和/或碱形成的盐。与酸形成的盐包括与无机酸或有机酸形成的盐。与无机酸形成的盐例如盐酸盐、硫酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、磷酸盐等。与有机酸形成的盐例如醋酸盐、丙酸盐、羟乙酸盐、草酸盐、三氟乙酸盐、双羟萘酸盐、丙二酸盐、苯甲酸盐、甲苯磺酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、水杨酸盐、酒石酸盐等。与碱形成的盐例如铵盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、银盐、锌盐、铜盐等。
17、本发明的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐可以采用本领域技术人员已知的方法合成，例如固相合成等，并采用本领域技术人员已知的方法进行纯化，例如高效液相色谱法等。
18、本发明的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐能够与hvem蛋白特异性结合并抑制其功能，阻止其与btla结合，避免了hvem蛋白与btla结合后导致的对t细胞激活的抑制，从而增强t细胞应答，可用于诊断、预防和/或治疗癌症、自身免疫性疾病等hvem介导的相关疾病。
19、根据本发明的第二个方面，本发明涉及本发明的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐在制备hvem抑制剂中的应用。
20、本发明还涉及本发明的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐在制备预防和/或治疗由hvem介导的相关疾病的药物中的应用。
21、本发明还涉及本发明的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐在制备诊断由hvem介导的相关疾病的试剂中的应用。
22、根据本发明的第三个方面，本发明涉及预防和/或治疗由hvem介导的相关疾病的方法，其中，给予有需要的个体有效量的本发明的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐。
23、本发明还涉及诊断由hvem介导的相关疾病的方法，其中，使用含有本发明的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐的荧光探针。
24、根据本发明，所述hvem抑制剂可用于预防和/或治疗由hvem介导的相关疾病。
25、根据本发明，由hvem介导的相关疾病包括但不限于：癌症、自身免疫性疾病等。癌症例如实体瘤或血液恶性肿瘤，包括但不限于肺癌例如非小细胞肺癌等、尿路上皮癌、头颈部麟癌、经典型霍奇金淋巴癌、膀胱癌、黑色素瘤、甲状腺癌、乳腺癌、前列腺癌、宫颈癌、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肝癌、肾癌、膀胱癌、鼻咽癌、喉癌、食道癌、视网膜母细胞瘤等；自身免疫性疾病包括但不限于：类风湿关节炎、红斑狼疮、移植排斥等。
26、在本发明的一些实施方式中，所述hvem抑制剂用于调控受试者的免疫应答。调控受试者的免疫应答包括增强受试者免疫应答，例如增强受试者t细胞的增殖或激活受试者的t细胞。在本发明的一个实施方式中，所述hvem抑制剂通过竞争性结合hvem蛋白，阻止hvem蛋白与btla结合，解除btla对t细胞激活或增殖的抑制，实现增强免疫应答的效果。
27、在本发明的一些实施方式中，本发明的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐在制备免疫治疗肿瘤药物中的用途。根据本发明，本发明的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐通过增强用药者的免疫应答实现治疗肿瘤的效果。
28、根据本发明的第四个方面，本发明涉及一种药物组合物，含有本发明的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐中的至少一种，以及药学上可接受的载体。
29、本领域技术人员知晓如何制备含有本发明的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐的药物组合物。
30、本发明的药物组合物可以制成本领域公知的各种常规剂型，包括但不限于，适于口服的片剂(包括各种包衣片剂、缓释或控释片剂)、锭剂、胶囊剂(包括软胶囊和硬胶囊)、颗粒剂、可分散粉末、水性或油性混悬剂、乳剂、酏剂或糖浆剂等等；适于局部使用的霜剂、软膏剂、凝胶、水性或油性溶液或混悬剂等等；适于吸入使用的粉末或液体气雾剂、适于经胃肠外给药的无菌水性或油性的静脉内、皮下或肌内注射剂、栓剂等等。
31、本发明的药学上可接受的载体包括但不限于常规的各种有机或无机药物载体，例如赋形剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、水溶性聚合物、无机盐、溶剂、溶解助剂、悬浮剂、等渗剂、缓冲液、防腐剂、抗氧剂、着色剂、甜味剂、酸味剂、起泡剂和调味剂等等。
32、本领域技术人员知晓在本发明的药物组合物中，作为活性成分的本发明的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐，以及药学上可接受的载体的合适用量，能够根据本领域的常规方法确定。
33、本发明还涉及一种检测或诊断试剂或试剂盒，其含有本发明的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐中的至少一种。
34、与现有技术相比，本发明的有益效果是：
35、(1)本发明的多肽兼具抗体药物和小分子类药物的优势，靶向性强、生物相容性优、药物相互作用少、药效快、耐药性弱、研发和生产成本相对较低。
36、(2)本发明的多肽具有亲和力高，纯度高，毒性低，可以特异性结合肿瘤细胞等细胞表面过表达的hvem蛋白，灵敏度高，可以应用于肿瘤等的筛查、诊断、预防以及治疗。
37、(3)本发明的多肽具有良好的hvem靶向作用，可以作为靶向给药系统或基因药物载体的靶头分子，安全可靠，在肿瘤的治疗领域具有非常广阔的应用前景。
38、(4)本发明的多肽能够有效阻断btla/hvem蛋白结合，解除hvem蛋白对t细胞的免疫抑制，表现出出色的解除“免疫逃逸”的能力，可作为靶向免疫检查点的前导药物。
1.一种多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐，所述多肽具有选自如下的序列：
2.如权利要求1所述的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐，其中p1的环肽选自：
3.如权利要求1所述的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐，其中p2的环肽选自：
4.如权利要求1-3任一项所述的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐在制备hvem抑制剂中的应用；
5.如权利要求1-3任一项所述的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐在制备预防和/或治疗由hvem介导的相关疾病的药物中的应用。
6.如权利要求1-3任一项所述的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐在制备诊断由hvem介导的相关疾病的试剂中的应用。
7.如权利要求5或6所述的应用，其中，由hvem介导的相关疾病选自癌症、自身免疫性疾病。
8.一种药物组合物，含有如权利要求1-3任一项所述的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐中的至少一种，以及药学上可接受的载体。
9.一种检测或诊断试剂或试剂盒，其含有如权利要求1-3任一项所述的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐中的至少一种。
10.如权利要求1-3任一项所述的多肽或其通过其序列中的半胱氨酸之间的二硫键形成的环肽，或其酰胺、酯或盐在制备免疫治疗肿瘤的药物中的应用。
