本发明提供白细胞介素-2突变蛋白以及包含白细胞介素-2突变蛋白和半衰期延长结构域的融合蛋白。本发明还提供其药物组合物及其用于治疗、预防或缓解增殖性疾病的一种或多种症状的方法。序列表的引用本说明书和序列表一起提交，序列表的文件名为216a015wo01_seqlist_st26.xml，大小为310,277字节，创建于2022年7月26日；其全文内容以引用的方式并入本文。
背景技术：
1、宿主免疫系统失调是癌症的一种重要的免疫抵抗机制。hanahan和weinberg，《细胞》(cell)2011,144,646-74；pardoll，《自然评论癌症》(nat.rev.cancer)2012,12,252-64。一类免疫疗法是针对特定检查点蛋白的药剂，这类蛋白在调节t细胞活化和增殖方面起着关键的作用。waldman等人，《自然免疫学评论》(nat.rev.immunol.)2020,20,651-68。这些蛋白作为t细胞表面的共受体发挥作用，有助于在t细胞激活后调节t细胞反应。wolchok等人，《癌症杂志》(cancer j.)2010,16,311-7。两种特征最明显的检查点蛋白是细胞毒性t淋巴细胞抗原4(ctla-4)和程序性细胞死亡-1(pd-1)，两者都是t细胞激活的负调节因子。waldman等人，《自然免疫学评论》(nat.rev.immunol.)2020,20,651-68。t细胞激活诱发ctla-4和pd-1的表达，从而抑制进一步的t细胞激活和增殖。pardoll，《自然评论癌症》(nat.rev.cancer)2012,12,252-64。免疫检查点阻断消除了这种抑制信号，并释放了抗肿瘤免疫反应。同上；sharma和allison，《科学》(science)2015,348,56-61。伊匹单抗(ipilimumab)是一种ctla-4阻断抗体，它是美国食品药品监督管理局(fda)批准用于癌症治疗的第一种免疫检查点抑制剂。同上。此后，已有多种抗pd-1抗体被批准用于癌症治疗。gong等人，《癌症免疫治疗杂志》(j.immunother.cancer)2018,6,8。虽然免疫疗法是癌症治疗的一大进步，但在接受检查点抑制剂治疗的癌症患者中，高达85％的患者并未从中获益。haslam和prasad，《美国医学会杂志网络版》(jama netw.open)2019,2,e192535。
2、白细胞介素-2(il-2)是一种协调免疫效应性(teff)细胞和调节性t(treg)细胞的增殖、存活和功能以维持免疫平衡的多效性细胞因子。bluestone，《新英格兰医学杂志》(n.engl.j.med.)2011,365,2129-31；boyman等人，《自然免疫学评论》(nat.rev.immunol.)2012,12,180-90。il-2驱动t细胞生长、增强自然杀伤(nk)溶细胞活性、诱发调节t(treg)细胞分化并介导激活诱发的细胞死亡。liao等人，《当代免疫学观点》(curr.opin.immunol.)2011,23,598-604。
3、白细胞介素-2受体(il-2r)以由三种不同的白细胞介素-2受体链产生的三种不同形式存在：α链(il-2rα或cd25)、β链(il-2rβ或cd122)和γ链(il-2rγ、γc或cd132)。wang等人，《科学》(science)2005,310,1159-63。il-2以低亲和力(kd≈10nm)与il-2rα结合。同上。由四级il-2信号传导复合物的晶体结构，il-2上的十五个氨基酸残基(k35、t37、r38、t41、f42、k43、f44、y45、e61、e62、k64、p65、e68、l72和y107)被鉴定为il-2和il-2rα之间的界面残基。stauber等人，《美国国家科学院院刊》(proc.natl.acad.sci.u.s.a.)2006,103,2788-93。il-2以中等的亲和力(kd≈1nm)结合在记忆t细胞和nk细胞上表达的il-2rβ与il-2rγ的异二聚体复合物。wang等人，《科学》(science)2005,310,1159-63。il-2以高亲和力(kd≈10pm)结合在treg细胞上表达的il-2rα、il-2rβ和il-2rγ的异三聚体复合物。同上。il-2以约100nm的解离常数(kd)单独结合il-2rβ且对单独的il-2rγ尚未发现有可检测的亲和力。同上。il-2rα本身没有信号转导活性。同上。il-2通过中等亲和力的异二聚体il-2rβ/γ复合物或高亲和力的异三聚体il-2rα/β/γ复合物传递信号。liao等人，《当代免疫学观点》(curr.opin.immunol.)2011,23,598-604。il-2与中等亲和力的异二聚体il-2rβ/γ复合物的结合导致免疫刺激性teff细胞的激活和增殖，而il-2与高亲和力的异三聚体il-2rα/β/γ复合物的结合导致免疫抑制性treg细胞的激活和增殖。malek等人，《免疫》(immunity)2010,33,153-65；bluestone，《新英格兰医学杂志》(n.engl.j.med.)2011,365,2129-31；boyman等人，《自然免疫学评论》(nat.rev.immunol.)2012,12,180-90；spangler等人，《免疫学年鉴》(annu.rev.immunol.)2015,33,139-67。这种免疫刺激和免疫抑制的双重反向作用对于研发il-2作为一种安全有效的治疗剂提出了重大的挑战。skrombolas等人，《临床免疫学专家评论》(expert rev.clin.immunol.)2014,10,207-17；abbas等人，《科学免疫学》(sci.immunol.)2018,3,eaat1482。
4、阿地白介素(aldesleukin)是一种重组人il-2，在1992年被美国食品药品监督管理局批准用于转移性肾细胞癌，并在1998年被批准用于转移性黑色素瘤。rosenberg，《免疫学杂志》(j.immunol.)2014,192,5451-8。转移性黑色素瘤或肾癌患者的癌症完全消退率为5至10％，还有10％部分消退。atkins等人，《临床肿瘤学杂志》(j.clin.oncol.)1999,17,2105-16；klapper等人，《癌症》(cancer)2008,113,293-301。大约70％对il-2疗法有完全反应的患者不再复发。rosenberg，《科学转化医学》(sci.transl.med.)2012,4,127ps8。然而，il-2作为一种癌症免疫疗法的成功因其毒性严重且疗效有限而受到阻碍。其作为抗癌剂的疗效的一个重要的限制因素是由于il-2驱动的对treg细胞的优先扩增而导致的免疫抑制作用。abbas等人，《科学免疫学》(sci.immunol.)2018,3,eaat1482。此外，为了使il-2在癌症治疗中有效，需要高剂量的治疗方案。bluestone，《新英格兰医学杂志》(n.engl.j.med.)2011,365,2129-31；abbas等人，《科学免疫学》(sci.immunol.)2018,3,eaat1482。然而，这种给药方案会引起血管渗漏综合征并导致il-2在癌症治疗中的应用受限。abbas等人，《科学免疫学》(sci.immunol.)2018,3,eaat1482。
5、尽管癌症治疗取得了进展，但癌症仍然是全球范围内主要的公共卫生问题。据估计，2021年仅在美国就有1,898,160例新确诊的癌症和608,570例的癌症死亡病例。《癌症事实与统计》(cancer facts&figures)2021。因此需要一种有效的癌症治疗疗法。
技术实现思路
1、本发明提供一种白细胞介素-2(il-2)突变蛋白，与野生型il-2相比，其与il-2rα和异二聚体il-2rβ/γ复合物的结合亲和力减弱。
2、本发明还提供一种il-2突变蛋白，其包含(i)l18、q126或s130位的氨基酸取代；和(ii)用包含il-15铰链的氨基酸序列或其片段的肽置换n29至l40位的氨基酸残基；n30至l80位的两个氨基酸残基之间形成的二硫键；或k8、k9、q13、e15、h16、l19、d20、m23、k32、p34、k35、l36、t37、r38、m39、l40、t41、f42、k43、f44、y45、m46、p47、e61、e62、l63、k64、p65、l66、e67、e68、v69、l70、n71、l72、a73、q74、k76、h79、r81、d84、s87、n88、v91、i92、e95、y107、d109、t111或s127位的氨基酸取代。
3、另外，本发明提供一种il-2突变蛋白，其包含(i)l18、q126或s130位的氨基酸取代；(ii)用包含il-15铰链的氨基酸序列或其片段的肽置换n29至l40位的氨基酸残基；和(iii)任选的k8、k9、q13、e15、h16、l19、d20、m23、k32、p34、k35、l36、t37、r38、m39、l40、t41、f42、k43、f44、y45、m46、p47、e61、e62、l63、k64、p65、l66、e67、e68、v69、l70、n71、l72、a73、q74、k76、h79、r81、d84、s87、n88、v91、i92、e95、y107、d109、t111或s127位的氨基酸取代。
4、此外，本发明提供一种融合蛋白，其包含il-2结构域和半衰期延长结构域。
5、本发明提供一种融合蛋白，其包含il-2结构域和作为半衰期延长结构域的白蛋白结合结构域。
6、本发明提供一种融合蛋白，其包含il-2结构域、白蛋白结合结构域和任选的肽接头；其中白蛋白结合结构域的羧基末端(c末端)直接或通过肽接头连接至il-2结构域的氨基末端(n末端)。
7、本发明提供一种融合蛋白，其包含il-2结构域、pd-1结合结构域和白蛋白结合结构域。
8、本发明提供一种融合蛋白，其包含il-2结构域、pd-1结合结构域、白蛋白结合结构域和任选的第一和第二肽接头；其中pd-1结合结构域的c末端直接或通过第一肽接头连接至白蛋白结合结构域的n末端，且白蛋白结合结构域的c末端直接或通过第二肽接头连接至il-2结构域的n末端。
9、本发明提供一种融合蛋白，其包含il-2结构域、第一和第二pd-1结合结构域、白蛋白结合结构域和任选的第一、第二和第三肽接头；其中第一pd-1结合结构域的c末端直接或通过第一肽接头连接至第二pd-1结合结构域的n末端、第二pd-1结合结构域的c末端直接或通过第二肽接头连接至白蛋白结合结构域的n末端，且白蛋白结合结构域的c末端直接或通过第三肽接头连接至il-2结构域的n末端。
10、本发明提供一种融合蛋白，其包含il-2结构域和作为半衰期延长结构域的可结晶片段(fc)结构域。
11、本发明提供一种融合蛋白，其包含il-2结构域、包含第一和第二肽链的fc结构域以及任选的肽接头；其中fc结构域的第一肽链的c末端直接或通过肽接头连接至il-2结构域的n末端。
12、本发明提供一种融合蛋白，其包含第一和第二il-2结构域、包含第一和第二肽链的fc结构域以及任选的第一和第二肽接头；其中fc结构域的第一肽链的c末端直接或通过第一肽接头连接至第一il-2结构域的n末端，且fc结构域的第二肽链的c末端直接或通过第二肽接头连接至第二il-2结构域的n末端。
13、本发明提供一种融合蛋白，其包含il-2结构域、pd-1结合结构域和fc结构域。
14、本发明提供一种融合蛋白，其包含il-2结构域、第一和第二pd-1结合结构域、包含第一和第二肽链的fc结构域以及任选的肽接头；其中第一pd-1结合结构域的c末端直接或通过肽接头连接至fc结构域的第一肽链的n末端，且fc结构域的第一肽链的c末端直接或通过肽接头连接至il-2结构域的n末端；且其中第二pd-1结合结构域的c末端直接或通过肽接头连接至fc结构域的第二肽链的n末端。
15、本发明提供一种融合蛋白，其包含第一和第二il-2结构域、第一和第二pd-1结合结构域、包含第一和第二肽链的fc结构域以及任选的第一和第二肽接头；其中第一pd-1结合结构域的c末端直接或通过肽接头连接至fc结构域的第一肽链的n末端，且fc结构域的第一肽链的c末端直接或通过肽接头连接至il-2结构域的n末端；且其中第二pd-1结合结构域的c末端直接或通过肽接头连接至fc结构域的第二肽链的n末端，且fc结构域的第二肽链的c末端直接或通过第二肽接头连接至第二il-2结构域的n末端。
16、本发明提供一种融合蛋白，其包含il-2结构域和抗pd-1抗体。
17、本发明提供一种融合蛋白，其包含il-2结构域、包含第一和第二轻链与第一和第二重链的抗pd-1抗体以及任选的肽接头，其中抗pd-1抗体的第一重链的c末端直接或通过肽接头连接至il-2结构域的n末端。
18、本发明提供一种融合蛋白，其包含第一和第二il-2结构域、包含第一和第二轻链与第一和第二重链的抗pd-1抗体以及任选的第一和第二肽接头；其中抗pd-1抗体的第一重链的c末端直接或通过第一肽接头连接至第一il-2结构域的n末端；且其中抗pd-1抗体的第二重链的c末端直接或通过第二肽接头连接至第二il-2结构域的n末端。
19、本发明提供一种药物组合物，其包含il-2突变蛋白或融合蛋白和药学上可接受的赋形剂。
20、本发明提供一种治疗、预防或缓解受试者中由pd-1介导的病症、疾病或病况的一种或多种症状的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的il-2突变蛋白或融合蛋白。
21、本发明提供一种治疗、预防或缓解受试者中由il-2介导的病症、疾病或病况的一种或多种症状的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的il-2突变蛋白或融合蛋白。
22、本发明提供一种治疗、预防或缓解受试者的增殖性疾病的一种或多种症状的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的il-2突变蛋白或融合蛋白。
23、本发明提供一种抑制细胞生长的方法，其包括使细胞与有效量的il-2突变蛋白或融合蛋白接触。
24、附图简单说明
25、图1示出了例示性融合蛋白的结构：(i)il-2融合蛋白，其包含第一和第二il-2结构域以及pd-l1结合结构域，例如包含第一和第二轻链与第一和第二重链的完整抗pd-1抗体；其中抗pd-1抗体的第一重链的c末端通过肽接头连接至第一il-2结构域的n末端，且抗pd-1抗体的第二重链的c末端通过肽接头连接至第二il-2结构域的n末端；和(ii)il-2融合蛋白，其包含il-2结构域和pd-l1结合结构域，例如包含第一和第二轻链与第一和第二重链的完整抗pd-1抗体；其中抗pd-1抗体的第一重链的c末端通过肽接头连接至il-2结构域的n末端；且其中抗pd-1抗体是杵臼结构。
26、图2示出了例示性融合蛋白的结构：(i)il-2融合蛋白，其包含第一和第二il-2结构域、第一和第二pd-1结合结构域(例如，抗pd-1vhh单结构域抗体)和包含第一和第二肽链的fc结构域；其中第一抗pd-1vhh单结构域抗体的c末端直接或通过肽接头连接至fc结构域的第一肽链的n末端，且fc结构域的第一肽链的c末端通过肽接头连接至第一il-2结构域的n末端；且其中第二抗pd-1vhh单结构域抗体的c末端直接或通过肽接头连接至fc结构域的第二肽链的n末端，且fc结构域的第二肽链的c末端通过肽接头连接至第二il-2结构域的n末端；和(ii)il-2融合蛋白，其包含il-2结构域、第一和第二pd-1结合结构域(例如，抗pd-1vhh单结构域抗体)和包含第一和第二肽链的fc结构域；其中第一抗pd-1vhh单结构域抗体的c末端直接或通过肽接头连接至fc结构域的第一肽链的n末端，且fc结构域的第一肽链的c末端通过肽接头连接至第一il-2结构域的n末端；其中第二抗pd-1vhh单结构域抗体的c末端直接或通过肽接头连接至fc结构域的第二肽链的n末端；且其中fc结构域是杵臼结构。
27、图3示出了例示性融合蛋白的结构：(i)il-2融合蛋白，其包含il-2结构域、pd-l1结合结构域(例如，抗pd-1vhh单结构域抗体(sdab))和白蛋白结合结构域(例如，抗hsavhhsdab)；其中抗pd-1vhh sdab的c末端通过肽接头连接至抗hsavhh sdab的n末端，且抗hsavhhsdab的c末端通过肽接头连接至il-2结构域的n末端；(ii)il-2融合蛋白，其包含il-2结构域、第一和第二pd-l1结合结构域(例如，抗pd-1vhh sdab)和白蛋白结合结构域(例如，抗hsavhh sdab)；其中第一抗pd-1vhh sdab的c末端通过肽接头连接至第二抗pd-1vhh sdab的n末端、第二抗pd-1vhh sdab的c末端通过肽接头连接至抗hsavhh sdab的n末端，且抗hsavhhsdab的c末端通过肽接头连接至il-2结构域的n末端；和(iii)il-2融合蛋白，其包含il-2结构域、pd-l1结合结构域(例如，抗pd-1单链可变区片段(scfv))和白蛋白结合结构域(例如，抗hsavhh sdab)；其中抗pd-1scfv的c末端通过肽接头连接至抗hsavhh sdab的n末端，且抗hsavhh sdab的c末端通过肽接头连接至il-2结构域的n末端。
1.一种融合蛋白，其包含白细胞介素-2(il-2)结构域和抗pd-1抗体；其中所述il-2结构域包含：(i)l18、q126或s130位的氨基酸取代；和(ii)用含il-15铰链片段的肽置换n29至l40位的氨基酸残基；n30至l80位的两个氨基酸残基之间形成的二硫键；或e15、h16、d20、k32、r38、m39、l40、t41、f42、k43、f44、y45、k76、s87、n88或i92位的氨基酸取代。
2.一种白细胞介素-2(il-2)突变蛋白，其包含：(i)l18、q126或s130位的氨基酸取代；和(ii)用含il-15铰链片段的肽置换n29至l40位的氨基酸残基；n30至l80位的两个氨基酸残基之间形成的二硫键；或e15、h16、d20、k32、r38、m39、l40、t41、f42、k43、f44、y45、k76、s87、n88或i92位的氨基酸取代。
3.根据权利要求1所述的融合蛋白或根据权利要求2所述的il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含l18位的氨基酸取代。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含l18c的氨基酸取代。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含l18s的氨基酸取代。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含q126位的氨基酸取代。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含q126e、q126k、q126r、q126s或q126t的氨基酸取代。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含q126e、q126k或q126r的氨基酸取代。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含q126e的氨基酸取代。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含s130位的氨基酸取代。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含s130a、s130e、s130q或s130r的氨基酸取代。
12.根据权利要求1至10中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含(i)q126e或q126t；(ii)l18c和q126e、q126k、q126r或q126s；(iii)l18s和q126e；(iv)q126t和s130r；或(v)l18c、q126e和s130e的氨基酸取代。
13.根据权利要求1至11中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含l18s和q126e的氨基酸取代。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含用含il-15铰链片段的肽置换n29至l40位的氨基酸残基和任选的e15、h16、d20、s87、n88或i92位的氨基酸取代。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含用具有seq id no:218或219的氨基酸序列的含il-15铰链片段的肽置换n29至l40位的具有seq id no:217的氨基酸序列的氨基酸残基和任选的e15k、h16e、h16i、h16v、d20a、d20e、d20k、d20t、s87d、n88a、i92a、i92d、i92e或i92g的氨基酸取代。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含用具有seq id no:218或219的氨基酸序列的含il-15铰链片段的肽置换n29至l40位的具有seq id no:217的氨基酸序列的氨基酸残基。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含用具有seq id no:218或219的氨基酸序列的含il-15铰链片段的肽置换n29至l40位的具有seq id no:217的氨基酸序列的氨基酸残基和任选的e15k的氨基酸取代。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含用具有seq id no:218或219的氨基酸序列的含il-15铰链片段的肽置换n29至l40位的具有seq id no:217的氨基酸序列的氨基酸残基和任选的h16e、h16f、h16i或h16v的氨基酸取代。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含用具有seq id no:218或219的氨基酸序列的含il-15铰链片段的肽置换n29至l40位的具有seq id no:217的氨基酸序列的氨基酸残基和任选的d20a、d20e、d20k或d20t的氨基酸取代。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含用具有seq id no:218或219的氨基酸序列的含il-15铰链片段的肽置换n29至l40位的具有seq id no:217的氨基酸序列的氨基酸残基和任选的s87d的氨基酸取代。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含用具有seq id no:218或219的氨基酸序列的含il-15铰链片段的肽置换n29至l40位的具有seq id no:217的氨基酸序列的氨基酸残基和任选的n88a的氨基酸取代。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含用具有seq id no:218或219的氨基酸序列的含il-15铰链片段的肽置换n29至l40位的具有seq id no:217的氨基酸序列的氨基酸残基和任选的i92a、i92d、i92e或i92g的氨基酸取代。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含用具有seq id no:218或219的氨基酸序列的含il-15铰链片段的肽置换n29至l40位的具有seq id no:217的氨基酸序列的氨基酸残基和一个或两个e15k、h16i、d20t、n88a或i92a的氨基酸取代。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含e15、h16、d20、k32、r38、l40、f42、k76、s87、n88或i92位的氨基酸取代。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含e15、d20、h16、n88或i92位的氨基酸取代。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含e15位的氨基酸取代。
27.根据权利要求1至26中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含e15k的氨基酸取代。
28.根据权利要求1至27中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含h16位的氨基酸取代。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含h16e、h16i或h16v的氨基酸取代。
30.根据权利要求1至29中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含d20位的氨基酸取代。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含d20a、d20e、d20k或d20t的氨基酸取代。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含k32位的氨基酸取代。
33.根据权利要求1至32中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含k32e的氨基酸取代。
34.根据权利要求1至33中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含r38位的氨基酸取代。
35.根据权利要求1至34中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含r38e或r38n的氨基酸取代。
36.根据权利要求1至35中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含l40位的氨基酸取代。
37.根据权利要求1至36中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含l40t的氨基酸取代。
38.根据权利要求1至37中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含f42位的氨基酸取代。
39.根据权利要求1至38中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含f42a或f42k的氨基酸取代。
40.根据权利要求1至39中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含k76位的氨基酸取代。
41.根据权利要求1至40中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含k76e的氨基酸取代。
42.根据权利要求1至41中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含s87位的氨基酸取代。
43.根据权利要求1至42中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含s87d的氨基酸取代。
44.根据权利要求1至43中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含n88位的氨基酸取代。
45.根据权利要求1至44中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含n88a的氨基酸取代。
46.根据权利要求1至45中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含i92位的氨基酸取代。
47.根据权利要求1至46中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含i92a、i92d、i92e或i92g的氨基酸取代。
48.根据权利要求1至47中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含i92a的氨基酸取代。
49.根据权利要求1至48中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含i92a和q126e的氨基酸取代。
50.根据权利要求1至49中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含r38和l40位的氨基酸取代。
51.根据权利要求1至50中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含r38n和l40t的氨基酸取代。
52.根据权利要求1至51中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含e15、r38和l40位的氨基酸取代。
53.根据权利要求1至52中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含e15k、r38n和l40t的氨基酸取代。
54.根据权利要求1至53中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含e15、k32、r38和l40位的氨基酸取代。
55.根据权利要求1至54中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含e15k、k32e、r38n和l40t的氨基酸取代。
56.根据权利要求1至55中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含e15、r38、l40和k76位的氨基酸取代。
57.根据权利要求1至56中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含e15k、r38n、l40t和k76e的氨基酸取代。
58.根据权利要求1至57中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白是n-糖基化的。
59.根据权利要求1至58中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含r38和f42位的氨基酸取代。
60.根据权利要求1至59中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含r38e和f42a或f42k的氨基酸取代。
61.根据权利要求1至60中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含k32、r38和f42位的氨基酸取代。
62.根据权利要求1至61中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含k32e、r38e和f42a或f42k的氨基酸取代。
63.根据权利要求1至61中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含e15、k32、r38和f42位的氨基酸取代。
64.根据权利要求1至63中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含e15k、k32e、r38e和f42a或f42k的氨基酸取代。
65.根据权利要求1至59中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含r38、f42和k76位的氨基酸取代。
66.根据权利要求1至59和65中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含r38e、f42a或f42k和k76e的氨基酸取代。
67.根据权利要求1至59中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含e15、r38、f42和k76位的氨基酸取代。
68.根据权利要求1至59和67中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含e15k、r38e、f42a或f42k和k76e的氨基酸取代。
69.根据权利要求1至68中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含n30至l80位中的两个不同氨基酸残基之间形成的二硫键。
70.根据权利要求1至69中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含各自独立地位于k35、r38、f42、y45、e62、v69或l72位的两个不同氨基酸残基之间形成的二硫键。
71.根据权利要求1至70中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含k35c与l72c、r38c与l72c、f42c与v69c、y42c与l72c、或y45c与e62c之间形成的二硫键。
72.根据权利要求1至71中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含f42c与v69c之间形成的二硫键。
73.根据权利要求1至72中任一项所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含f42c与v69c之间形成的二硫键和e15k、k32e或k76e的氨基酸取代。
74.根据权利要求73所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含f42c与v69c之间形成的二硫键和e15k的氨基酸取代。
75.根据权利要求73所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含f42c与v69c之间形成的二硫键和k32e的氨基酸取代。
76.根据权利要求73所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含f42c与v69c之间形成的二硫键和k76e的氨基酸取代。
77.根据权利要求73所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含f42c与v69c之间形成的二硫键和e15k和k32e的氨基酸取代。
78.根据权利要求73所述的融合蛋白或il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含f42c与v69c之间形成的二硫键和e15k和k76e的氨基酸取代。
79.根据权利要求1所述的融合蛋白或根据权利要求2所述的il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含seq id no:185至261中任一者的氨基酸序列，其中所述il-2突变蛋白包含l18c、l18s、q126e、q126k、q126r、q126s、q126t、s130a、s130e、s130q或s130r的氨基酸取代；其中t3位的氨基酸残基是t或a，且c125位的氨基酸残基是c或s；且其中当所述il-2突变蛋白包含l18c的氨基酸取代时，所述c125位的氨基酸残基是c。
80.根据权利要求1所述的融合蛋白或根据权利要求2所述的il-2突变蛋白，其中所述il-2结构域或il-2突变蛋白包含seq id no:262至287和301中任一者的氨基酸序列。
81.一种融合蛋白，其包含il-2结构域和半衰期延长结构域，其中所述il-2结构域包含根据权利要求2至80中任一项所述的il-2突变蛋白的氨基酸序列。
82.根据权利要求81所述的融合蛋白，其中所述半衰期延长结构域包含白蛋白结合结构域、可结晶片段(fc)结构域、血清白蛋白、聚乙二醇基团或脂肪酰基。
83.根据权利要求81或82所述的融合蛋白，其中所述半衰期延长结构域是白蛋白结合结构域。
84.根据权利要求82或83所述的融合蛋白，其中所述白蛋白结合结构域是结合人血清白蛋白(hsa)的抗体或其片段。
85.根据权利要求84所述的融合蛋白，其中所述白蛋白结合结构域是抗hsa单结构域抗体。
86.根据权利要求84或85所述的融合蛋白，其中所述白蛋白结合结构域是抗hsa vhh单结构域抗体。
87.根据权利要求81至86中任一项所述的融合蛋白，其包含il-2结构域、抗hsa vhh单结构域抗体和任选的肽接头；其中所述抗hsa vhh单结构域抗体的c末端直接或通过所述肽接头连接至所述il-2结构域的n末端。
88.根据权利要求85至87中任一项所述的融合蛋白，其中所述单结构域抗体包含(i)seq id no:1的cdr1、seq id no:2的cdr2和seq id no:3的cdr3；或(ii)seq id no:9的cdr1、seq id no:10的cdr2和seq id no:11的cdr3。
89.根据权利要求85至88中任一项所述的融合蛋白，其中所述单结构域抗体具有seqid no:8或15的氨基酸序列。
90.根据权利要求81或82所述的融合蛋白，其中所述半衰期延长结构域是fc结构域。
91.根据权利要求90所述的融合蛋白，其包含il-2结构域、包含第一和第二肽链的fc结构域以及任选的肽接头；其中所述fc结构域的第一肽链的c末端直接或通过所述肽接头连接至所述il-2结构域的n末端。
92.根据权利要求81至91中任一项所述的融合蛋白，其还包含程序性细胞死亡-1(pd-1)结合结构域。
93.根据权利要求92所述的融合蛋白，其中所述pd-1结合结构域是抗pd-1单结构域抗体。
94.根据权利要求92或93所述的融合蛋白，其中所述pd-1结合结构域是抗pd-1vhh单结构域抗体。
95.根据权利要求92至94中任一项所述的融合蛋白，其包含il-2结构域、抗pd-1vhh单结构域抗体和fc结构域。
96.根据权利要求92至95中任一项所述的融合蛋白，其包含il-2结构域、第一和第二pd-1结合结构域、包含第一和第二肽链的fc结构域以及任选的肽接头；其中所述第一pd-1结合结构域的c末端直接或通过肽接头连接至所述fc结构域的第一肽链的n末端且所述fc结构域的第一肽链的c末端直接或通过肽接头连接至所述il-2结构域的n末端；且其中所述第二pd-1结合结构域的c末端直接或通过肽接头连接至所述fc结构域的第二肽链的n末端。
97.根据权利要求94至96中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗pd-1vhh单结构域抗体各自独立地包含：(i)seq id no:119的cdr1、seq id no:120的cdr2和seq id no:121的cdr3；(ii)seq id no:123的cdr1、seq id no:124的cdr2和seq id no:125的cdr3；(iii)seq id no:127的cdr1、seq id no:128的cdr2和seq id no:129的cdr3；(iv)seq id no:131的cdr1、seq id no:132的cdr2和seq id no:133的cdr3；或(v)seq id no:135的cdr1、seq id no:136的cdr2和seq id no:137的cdr3。
98.根据权利要求90至97中任一项所述的融合蛋白，其中所述fc结构域是higg1fc结构域、higg2 fc结构域、higg4 fc结构域或其突变蛋白。
99.根据权利要求90至98中任一项所述的融合蛋白，其中所述fc结构域是杵臼结构。
100.根据权利要求92所述的融合蛋白，其中所述抗pd-1结合结构域和所述fc结构域形成包含两个轻链和两个重链的完整抗pd-1抗体的部分。
101.根据权利要求1至80和100中任一项所述的融合蛋白，其包含il-2结构域和包含两个轻链和两个重链的完整抗pd-1抗体。
102.根据权利要求1至80、100和101中任一项所述的融合蛋白，其包含il-2结构域、包含第一和第二轻链与第一和第二重链的完整抗pd-1抗体以及任选的肽接头；其中所述完整抗pd-1抗体的第一重链的c末端直接或通过所述肽接头连接至所述il-2结构域的n末端。
103.根据权利要求1至80和100中任一项所述的融合蛋白，其包含两个il-2结构域和包含两个轻链和两个重链的完整抗pd-1抗体。
104.根据权利要求1至80、100和103中任一项所述的融合蛋白，其包含第一和第二il-2结构域、包含第一和第二轻链与第一和第二重链的完整抗pd-1抗体以及任选的第一和第二肽接头；其中所述完整抗pd-1抗体的第一重链的c末端直接或通过所述第一肽接头连接至所述第一il-2结构域的n末端，且所述完整抗pd-1抗体的第二重链的c末端直接或通过所述第二肽接头连接至所述第二il-2结构域的n末端。
105.根据权利要求1至80和100至104中任一项所述的融合蛋白，其中所述pd-1抗体包含：
106.根据权利要求1至80和100至105中任一项所述的融合蛋白，其中所述pd-1抗体包含：
107.根据权利要求1至80和100至106中任一项所述的融合蛋白，其中所述pd-1抗体包含：
108.根据权利要求1至80和100至107中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗pd-1抗体是人抗体或人源化抗体。
109.根据权利要求1至80和100至108中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗pd-1抗体是iga、igd、ige、igg或igm抗体。
110.根据权利要求1至80和100至109中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗pd-1抗体是igg抗体。
111.根据权利要求1至80和100至110中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗pd-1抗体是igg1或igg4抗体。
112.根据权利要求1至80和100至111中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗pd-1抗体是杵臼结构。
113.根据权利要求1至80和100至112中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗pd-1抗体是非阻断抗体。
114.根据权利要求1至80和100至112中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗pd-1抗体是阻断抗体。
115.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白是：
116.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至115中任一项所述的融合蛋白或根据权利要求2至80中任一项所述的il-2突变蛋白和药学上可接受的赋形剂。
117.根据权利要求116所述的药物组合物，其中所述药物组合物是单一剂型。
118.根据权利要求116或117所述的药物组合物，其中所述药物组合物是固体。
119.根据权利要求116或117所述的药物组合物，其中所述药物组合物是肠胃外剂型。
120.根据权利要求119所述的药物组合物，其中所述药物组合物是静脉内剂型。
121.根据权利要求116、117、119或120中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物是溶液。
122.一种治疗、预防或缓解受试者的增殖性疾病的一种或多种症状的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至115中任一项所述的融合蛋白、根据权利要求2至80中任一项所述的il-2突变蛋白或根据权利要求116至121中任一项所述的药物组合物。
123.根据权利要求122所述的方法，其中所述增殖性疾病是癌症。
124.根据权利要求122或123所述的方法，其中所述增殖性疾病是转移性癌症。
125.一种抑制细胞生长的方法，其包括使所述细胞与有效量的根据权利要求1至115中任一项所述的融合蛋白、根据权利要求2至80中任一项所述的il-2突变蛋白或根据权利要求116至121中任一项所述的药物组合物接触。
126.根据权利要求125所述的方法，其中所述细胞是癌细胞。
