本发明涉及中药分析，具体涉及养胃抗瘤颗粒指纹图谱的构建方法及其指纹图谱。
背景技术：
1、养胃抗瘤颗粒（参考中国发明专利公开号cn101721545a）是江中药业股份有限公司根据孙桂芝教授临床经验方研制开发的独家品种，由黄芪、人参、三七、白花蛇舌草、白术、枸杞子、苏木、金荞麦、拳参、发酵虫草菌粉组成，益气养血、活血化瘀、补益脾肾、解毒抗癌，临床上用于治疗中晚期胃癌，不仅可防止肿瘤复发、转移，还可延长患者生存周期。
2、对于复方中药制剂的质量控制，目前多采用高效液相色谱法和薄层色谱法对其中的有效成分进行定性、定量鉴别研究。中药指纹图谱是借助于波谱或色谱技术获得的中药化学成分的波谱图或色谱图。中药特别是中药复方，包含多个化学成分，其疗效是整体协同的效果，因此对其物质基础的反映，不能仅仅从一个或几个成分进行说明，需从整体上进行阐述。
3、中药指纹图谱具有整体、宏观和模糊分析等特点，可以通过对整体特性的描述，采取适当模糊的处理方式，达到整体质量控制的目的。相比传统的分析方法，中药指纹图谱技术在多成分草药与中成药的评价和质量控制上具有独特的优势，有利于为目前市面上流通的中成药建立更精确、全面、横跨不同批次的质量控制方法，该法已经得到了国际上的广泛认同。
4、目前，尚无养胃抗瘤颗粒质量的检测方法，来保证产品质量的稳定性及临床用药的安全性和有效性。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的不足，本发明提供了养胃抗瘤颗粒指纹图谱的构建方法。以及用该方法制作的养胃抗瘤颗粒的hplc-dad-elsd标准指纹图谱。在使用相似度进行评价的情况下，可用其标准指纹图谱对养胃抗瘤颗粒的质量进行全面地评价和控制，从而保证了产品质量的稳定性及临床用药的安全性和有效性。
2、本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
3、养胃抗瘤颗粒指纹图谱的构建方法，所述方法采用hplc-dad-elsd法，其中供试品溶液的制备方法包括如下步骤：
4、（1）将部分养胃抗瘤颗粒加水，超声处理，用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液；
5、（2）取剩余养胃抗瘤颗粒，加溶剂1超声处理，滤过，得续滤液；
6、（3）将部分续滤液和正丁醇液混合，蒸干，残渣用溶剂2溶解，即得。
7、优选地，步骤（1）中所述部分为养胃抗瘤颗粒质量的45-55%。
8、优选地，步骤（1）和（2）中所述超声的条件为：频率40-60khz，功率90-100%，超声的时间为20-50min。
9、优选地，步骤（1）中所述提取的次数为1-6次，所述合并正丁醇液后，再用氨试液洗涤2次，取正丁醇液。
10、优选地，步骤（2）中所述滤过前，用溶剂1补足减失重量，溶剂1为甲醇。
11、优选地，步骤（3）中所述部分为续滤液体积的45-55%，溶剂2为甲醇。
12、优选地，养胃抗瘤颗粒的总质量与溶剂2的质量体积比为2g:5ml。
13、优选地，所述方法中色谱条件包括：流动相a为乙腈，流动相b为0.05-0.15％甲酸水溶液，梯度洗脱条件如下：
14、0min，流动相a：3-5%，流动相b：95-97%；
15、15min，流动相a：3-5%，流动相b：95-97%；
16、30min，流动相a：9-12%，流动相b：88-91%；
17、80min，流动相a：18-21%，流动相b：79-82%；
18、90min，流动相a：31-35%，流动相b：65-69%；
19、110min，流动相a：31-35%，流动相b：65-69%。
20、优选地，所述色谱条件包括：流速0.8-1.2ml/min；柱温24-30℃；进样量：5-50μl；dad检测波长为250-270nm；elsd检测器雾化温度35-45℃，漂移管温度55-65℃，载气流量1.0-1.5l/min。
21、本发明再一目的是提供上述构建方法构建的养胃抗瘤颗粒指纹图谱，所述指纹图谱包括hplc-dad指纹图谱和hplc-elsd指纹图谱；其中hplc-dad指纹图谱共有12个峰，其中包含没食子酸峰、4-对香豆酸峰和毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰，hplc-elsd指纹图谱共有5个峰，其中按保留时间从小到大依次为三七皂苷r1峰、人参皂苷rg1峰、人参皂苷re峰、人参皂苷rb1峰、黄芪甲苷峰。
22、本发明有益效果：
23、（1）本发明在常规hplc法基础上，联用dad-elsd检测器作为构建指纹图谱的技术手段，对复方中药养胃抗瘤颗粒进行研究，从而获得相应的众多指纹成分，更准确反映养胃抗瘤颗粒的质量，有望为其质量的全面、有效控制提供新的途径。
24、（2）本发明首次提供了养胃抗瘤颗粒 hplc-dad-elsd指纹图谱的建立方法，根据养胃抗瘤颗粒处方成分构成特点，优选供试品溶液的制备、最佳流动相组成及其梯度洗脱程序、流速、检测波长，解决了特征峰难以分开及杂质峰干扰大的难题，所得指纹图谱分离度高、峰形好，各特征峰均实现了基线分离，能更全面、准确地评价养胃抗瘤颗粒的质量。
25、（3）本发明hplc-dad检测方法波长为260nm时，该指纹图谱包括12个峰，其中有没食子酸、4-对香豆酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷，hplc-elsd指纹图谱共有5个峰，随时间推移依次为人三七皂苷r1、人参皂苷rg1、人参皂苷re、人参皂苷rb1、黄芪甲苷，指纹图谱的组成更加丰富、全面，进一步阐明了养胃抗瘤颗粒的化学物质基础。
26、（4）本发明方法操作简单、准确可靠，具有精密度、稳定性和重复性好的特点。可克服现有技术检测指标单一、不能反映养胃抗瘤颗粒过程控制内在质量的不足，实现制剂质量全面、准确评价，从而更有效地保证制剂质量。
1.养胃抗瘤颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述构建方法采用hplc-dad-elsd法，其中供试品溶液的制备方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤（1）中所述部分为养胃抗瘤颗粒质量的45-55%。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤（1）和（2）中所述超声的条件为：频率40-60khz，功率90-100%，超声的时间为20-50min。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤（1）中所述提取的次数为1-6次，所述合并正丁醇液后，再用氨试液洗涤2次，取正丁醇液。
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤（2）中所述滤过前，用溶剂1补足减失重量。
6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤（3）中所述部分为续滤液体积的45-55%。
7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，养胃抗瘤颗粒的总质量与溶剂2的质量体积比为2g:5ml。
8.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述方法中色谱条件包括：流动相a为乙腈，流动相b为0.05-0.15％甲酸水溶液，梯度洗脱条件如下：
9.根据权利要求1-8任意一项所述的构建方法，其特征在于，所述色谱条件包括：流速0.8-1.2ml/min；柱温24-30℃；进样量：5-50μl；dad检测波长为250-270nm；elsd检测器雾化温度35-45℃，漂移管温度55-65℃，载气流量1.0-1.5l/min。
10.一种权利要求1-9任意一项所述的构建方法构建的养胃抗瘤颗粒指纹图谱，其特征在于，所述指纹图谱包括hplc-dad指纹图谱和hplc-elsd指纹图谱；其中hplc-dad指纹图谱共有12个峰，所述峰包含没食子酸峰、4-对香豆酸峰和毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰；hplc-elsd指纹图谱共有5个峰，所述峰按保留时间从小到大依次为三七皂苷r1峰、人参皂苷rg1峰、人参皂苷re峰、人参皂苷rb1峰、黄芪甲苷峰。
