本发明涉及动物病毒学及分子生物学，尤其涉及一种用于检测牛羊肠道小rna病毒的引物对及其应用。
背景技术：
1、小rna病毒(picornavirus)即小核糖核苷酸病毒，为无囊膜、呈二十面体结构的单股正链rna病毒，属于小rna病毒科。许多小rna病毒是重要的人类和动物病原体，可引起中枢神经系统、呼吸道和胃肠道、心脏、肝脏的疾病。截至2022年3月，该科共有158种，分68个属，涵盖80多个物种。随着新一代测序技术的广泛应用，小rna病毒家族不断扩大，牛羊肠道小rna病毒(boosepivirus，boov)是2020年提出的小rna病毒科的一个新属(https://www.picornaviridae.com/ensavirinae/boosepivirus/boosepivirus.htm)，被认为是一种潜在的腹泻病原体，并且可以跨种传播，但其致病性和发病机制有待进一步研究。
2、病毒的检测方法包括体外细胞培养、组织免疫荧光、中和试验、elisa、pcr/rt-pcr等。牛羊肠道小rna病毒是首次通过高通量测序技术在腹泻犊牛粪便样本中发现的。目前，在国内外尚未建立起有效的牛羊肠道小rna病毒体外细胞培养模型和相关的快速检测方法，如组织免疫荧光、中和试验、elisa和pcr/rt-pcr等。
3、因此，亟需开发一种高效、便捷的检测牛羊肠道小rna病毒的方法。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种用于检测牛羊肠道小rna病毒的引物对，还提供了非诊断目的的检测牛羊肠道小rna病毒的方法，该检测方法特异性强、灵敏度高、稳定性好，在时间成本、工作量等方面具有明显的优势，从核酸提取到琼脂糖凝胶电泳进行结果分析判定，可在3h内完成，耗时少、且成本低廉，解决了牛羊肠道小rna病毒无法分离鉴定的问题。
2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
3、本发明提供了一种用于检测牛羊肠道小rna病毒的引物对，所述引物对包括上游引物和下游引物；
4、所述上游引物的序列如seq id no:1所示；
5、所述下游引物的序列如seq id no:2所示。
6、本发明还提供了所述的引物对在制备检测牛羊肠道小rna病毒的试剂盒中的应用。
7、本发明还提供了一种检测牛羊肠道小rna病毒的试剂盒，所述试剂盒包括所述的引物对。
8、本发明还提供了一种非诊断目的的检测牛羊肠道小rna病毒的方法，包括如下步骤：
9、(1)将待测样本的rna反转录为cdna；
10、(2)以cdna为模板，采用所述的引物对进行pcr扩增，得到扩增产物；
11、(3)使用琼脂糖凝胶电泳法检测扩增产物的扩增情况，判断是否扩增到牛羊肠道小rna病毒核酸片段。
12、作为优选，所述pcr扩增的反应体系为：8～12μl 2×es taqmastermix，0.5～1.5μl上游引物，0.5～1.5μl下游引物，1～3μl模板，2～10μl rnase-free water。
13、作为优选，所述上游引物的浓度为5～15μmol/l；所述下游引物的浓度为5～15μmol/l。
14、作为优选，所述pcr扩增的反应条件为：92～96℃预变性3～7min；92～96℃变性20～40s，58～62℃退火20～40s，70～74℃延伸20～40s，共32～36个循环；70～74℃延伸8～12min。
15、作为优选，若扩增到316bp的条带，则待测样本中含有牛羊肠道小rna病毒；若未扩增到316bp的条带，则待测样本中不含有牛羊肠道小rna病毒。
16、本发明的有益效果：
17、本发明提供了一种用于检测牛羊肠道小rna病毒的引物对，使用该引物对检测牛羊肠道小rna病毒，具有以下优势：
18、1)特异性强
19、本发明的检测方法可以检测出牛羊肠道小rna病毒，所检测的牛冠状病毒、牛肠道病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛副流感病毒3型、牛库布病毒、牛轮状病毒、牛星状病毒、大肠杆菌和水对照均无阳性结果；
20、2)灵敏度高
21、本发明的检测方法灵敏度高，最小检测限为4.85×10-7ng/μl；
22、3)耗时少、成本低廉
23、目前，在国内外尚未建立起有效的牛羊肠道小rna病毒体外培养模型和相关快速检测方法，本发明的检测方法，在时间成本、工作量等方面具有明显的优势，从核酸提取到琼脂糖凝胶电泳进行结果分析判定，可在3h内完成，耗时少、且成本低廉，解决了牛羊肠道小rna病毒无法分离鉴定的问题；
24、4)稳定性好
25、重复性试验结果表明本发明的检测方法重复性好。
1.一种用于检测牛羊肠道小rna病毒的引物对，其特征在于，所述引物对包括上游引物和下游引物；
2.权利要求1所述的引物对在制备检测牛羊肠道小rna病毒的试剂盒中的应用。
3.一种检测牛羊肠道小rna病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物对。
4.一种非诊断目的的检测牛羊肠道小rna病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述pcr扩增的反应体系为：8～12μl 2×es taq mastermix，0.5～1.5μl上游引物，0.5～1.5μl下游引物，1～3μl模板，2～10μlrnase-free water。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述上游引物的浓度为5～15μmol/l；所述下游引物的浓度为5～15μmol/l。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述pcr扩增的反应条件为：92～96℃预变性3～7min；92～96℃变性20～40s，58～62℃退火20～40s，70～74℃延伸20～40s，共32～36个循环；70～74℃延伸8～12min。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，若扩增到316bp的条带，则待测样本中含有牛羊肠道小rna病毒；若未扩增到316bp的条带，则待测样本中不含有牛羊肠道小rna病毒。
