本发明涉及生物，具体涉及一种基于转录组测序技术预测马繁殖性能的方法。
背景技术：
1、马属动物生长周期长，性成熟晚，繁殖周期长，成为了制约马产业高质量高水平发展的关键一步，同时优秀的退役母马更是国产马发展中的宝贵资源，取得赛事成绩的母马繁育的后代不仅性能优秀而且极具价值。马属动物繁育是马生产中的重要经济性状,是一个受多基因调控的数量性状,高繁殖性能的母马深受养殖者的青睐,因此对马属动物繁殖性能的研究一直是我国畜牧学者研究的重点。
2、因此，通过rna检测的方法对马属动物繁殖能力进行检测或预测成为重要的研究方向。
技术实现思路
1、针对现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种基于转录组鉴定哈萨克马繁殖能力的方法，基于rna表达量检测，检测或预测哈萨克马的繁殖能力，对哈萨克马进行筛选。
2、本发明公开了一种基于转录组测序技术预测马繁殖性能的方法，包括以下步骤：获得哈萨克马的转录组中与繁殖相关的差异基因；根据所述差异基因，获得引物组；利用所述引物组对样本的差异基因进行荧光定量pcr检测，获得荧光强度；判断所述荧光强度是否处于第一阈值区间或者大于第二阈值；若是，预测所述样本的繁殖能力强；若否，预测所述样本的繁殖能力弱。
3、优选的，所述差异基因包括以下任一基因或它们的组合：col14a1、col6a5和col3a1。
4、优选的，所述差异基因为上调基因，分别获得待测样品，以及标准正样品和标准负样品的荧光强度；
5、判断待测样品的荧光强度是否满足以下任一条件或它们的组合：
6、待测样本的荧光强度大于标准正样品的荧光强度*a、且大于标准负样品的荧光强度，其中a表示为系数；
7、若满足，判断待测样本的繁殖能力强。
8、优选的，繁殖能力定级的方法包括：
9、根据所述标准正样品和标准负样品的荧光强度，划分为多个级别，以及相应的阈值区间；
10、将待测样品与所述阈值区间匹配，获得待测样品的级别。
11、优选的，所述引物组包括seq id no.:3和seq id no.:4。
12、优选的，所述引物组还包括seq id no.:1和seq id no.:2。
13、优选的，所述引物组还包括taqman探针。
14、优选的，获得差异基因的方法包括：
15、建立哈萨克马群组，包括第一组(b组)和第二组(y组)，其中第一组的繁殖能力强于第二组；
16、分别提取群组中各个样本的rna，所述rna包括编码rna和非编码rna；
17、对所述rna进行测序，获得下机数据；
18、对所述下机数据进行分析，获得差异基因。
19、优选的，获得下机数据的方法包括：
20、去除各个样本rna中的核糖体rna；
21、将得到的rna随机打断成为短片段；
22、以片断化后的rna为模板，用六碱基随机引物合成cdna第一链；
23、在cdna第一链中加入缓冲液、dntps、rnase h和dna polymerase i合成cdna第二链；
24、纯化cdna后并加eb缓冲液洗脱，经末端修复和加碱基a，再加测序接头；
25、通过ung酶降解第二条链；
26、用琼脂糖凝胶电泳进行片段大小选择后，进行pcr扩增，获得测序文库；
27、通过测序仪对测序文库进行测序，获得下机数据。
28、优选的，对下机数据进行分析的方法包括：
29、对下机数据进行过滤得到清洁数据；
30、将清洁数据的读长用工具hisat2比对到参考基因组上，并利用stringtie重构转录本，得到已知的转录本与新的转录本；
31、对新转录本进行编码能力预测，得到新预测的长链非编码rna和已知基因；
32、分别对样本中的mrna、lncrna进行分析后，进行lncrna和mrna的关联分析。
33、与现有技术相比，本发明的有益效果为：荧光定量pcr的荧光强度反映了差异基因的rna表达量；通过rna表达量预测或检测样本的繁殖能力，实现快速、准确地对哈萨克马进行筛选。
1.一种基于转录组测序技术预测马繁殖性能的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述差异基因包括以下任一基因或它们的组合：col14a1、col6a5和col3a1。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述差异基因为上调基因，分别获得待测样品，以及标准正样品和标准负样品的荧光强度；
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，还包括繁殖能力定级的方法：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述引物组包括seq id no.:3和seq idno.:4。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述引物组还包括seq idno.:1和seq idno.:2。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述引物组还包括taqman探针。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，获得差异基因的方法包括：
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，获得下机数据的方法包括：
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，对下机数据进行分析的方法包括：
