本申请涉及分子诊断，尤其是涉及ppif基因作为标志物在子宫内膜异位症诊断评估中的应用。
背景技术：
1、子宫内膜异位症是一种影响约10％生育年龄女性的疾病，常常导致不孕。患有子宫内膜异位的患者在卵巢刺激周期中通常能收获较少且质量较差的卵子，这与不理想的妊娠结果有关。来自单细胞rna测序的数据显示，无论是受影响的卵巢还是未受影响的卵巢，子宫内膜异位患者的卵子与健康的卵子捐赠者相比具有独特的转录组特征。此外，从子宫内膜异位患者那里回收的卵子更有可能具有形态异常和较低的线粒体含量，这可能归因于p450芳香化酶活性降低、活性氧(ros)增加和卵泡微环境的破坏。然而，子宫内膜异位症影响患者卵巢功能的机制仍未有定论，如何评估子宫内膜异位症对卵子质量的影响仍未明，也暂无评估子宫内膜异位症患者卵巢功能及卵子质量的特异性标志物。
2、表观遗传调节，包括dna甲基化、组蛋白甲基化和染色质可及性，已被证明对卵子发生至关重要。例如，之前的研究表明，与反复卵母细胞成熟失败相关的piwi相互作用rna异常表达，这些rna参与了形成卵母细胞细胞外基质的基因的表观遗传调节。从初级卵泡开始，dna甲基化逐渐在生长卵泡的卵母细胞中建立，与卵母细胞的发育密切相关。此外，之前的研究发现，h3k4me3组蛋白甲基化在卵泡期卵母细胞中显著增加，并在此后保持高水平。同时，研究还发现，在合子基因组激活之前，大量染色质区域保持开放，这可能有助于早期人类胚胎的重编程。最近的一项研究报告称，作为染色质重塑因子的snf2h可以通过增加其启动子周围染色质的可及性来调节卵母细胞减数分裂基因的转录。鉴于表观遗传调节在染色质组织中的重要性，研究子宫内膜异位患者颗粒细胞的染色质可及性具有重要意义。
3、此外，细胞外囊泡(evs)是由细胞分泌到细胞外空间的脂质包裹的囊泡，evs的产物，包括脂质、核酸和蛋白质，已被认为是细胞间通信的关键媒介，与调节细胞微环境密切相关。研究evs将有助于理解微环境相互作用，并为人类疾病识别新的诊断生物标志物。卵泡内微环境，包括gcs、卵泡液(ff)和卵母细胞，对卵子发生至关重要。ff来源的evs作为gcs和卵母细胞之间传递分子信号和细胞因子的桥梁，尤其重要。更重要的是，evs可以运输gcs释放的营养素或细胞因子来滋养卵母细胞的发育。因此，通过检测卵泡内容物的evs，可以检查卵泡的健康状态。
4、目前用于测定染色质可及性的高通量测序(atac-seq)是一种用于检测全基因组染色质可及性的强大方法，已被广泛用于阐明人类疾病的致病机制。先前的研究报道了多囊卵巢综合症(pcos)和早衰卵巢(poi)妇女的ff来源的ev micro-rna (mirna)谱图显著改变。然而，对子宫内膜异位患者的ff evs的mrna转录组特征仍在探索中。
5、目前，传统的检测方法无法通过子宫内膜异位症影响卵巢功能和卵子质量的微观机制，精确评估子宫内膜异位症患者的卵巢功能和卵子质量。因此，有必要发展新的标志物来更好地诊断内异症患者是否存在卵巢功能障碍及卵子质量下降。
技术实现思路
1、本申请的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种ppif基因作为标志物在子宫内膜异位症诊断评估中的应用。本申请目的在于明确子宫内膜异位症在卵子生长发育中的作用，提供可用于评估子宫内膜异位症患者卵巢功能和卵子质量的生物标志物。
2、为实现上述目的，本申请采取的技术方案为：
3、本申请提供了检测ppif基因在生物样本中表达水平的试剂在制备子宫内膜异位症诊断评估产品中的应用。
4、本申请通过gc atac测序(atac-seq)、gc mrna测序(mrna-seq)和ev mrna-seq在内的多组学方法对子宫内膜异位患者的多种卵泡成分进行分析，发现子宫内膜异位症患者与健康对照人群颗粒细胞和细胞外囊泡中基因表达的差异，确定ppif基因与子宫内膜异位症患者卵子质量和数量有显著的相关性，提供了通过检测颗粒细胞中ppif表达进而评估内异症患者卵巢功能与卵子质量的新方法。因此，ppif可以作为评估子宫内膜异位症患者的卵巢功能及卵子质量的标志物。
5、在一些具体实施例中，所述ppif基因来源于颗粒细胞和细胞外囊泡。
6、作为本申请所述应用的优选实施方式，所述产品包括试剂盒或芯片，产品不仅仅局限于此，还包括本领域常见的产品。
7、作为本申请所述应用的优选实施方式，ppif基因与子宫内膜异位症患者的卵子质量和数量有显著的相关性。
8、作为本申请所述应用的优选实施方式，所述试剂包括用于流式细胞术、酶联免疫吸附法、放射性免疫吸附法、定量pcr检测的试剂。
9、作为本申请所述应用的优选实施方式，所述生物样本包括卵泡液，具体来源于卵泡颗粒细胞和卵泡液其它成分。
10、本申请还提供了一种体外筛选子宫内膜异位症诊断评估试剂的方法，利用待选试剂检测生物样本中ppif基因的表达水平，如能实现检测，则所述待选试剂可作为子宫内膜异位症诊断评估试剂。
11、本申请还提供了一种子宫内膜异位症诊断评估试剂盒，所述试剂盒包括检测ppif基因在生物样本中表达水平的试剂。
12、经实验可知，ppif(r＝0.46,p＝0.043)的表达水平与获得的卵母细胞总数呈正相关。ppif(r＝0.43,p＝0.056)的表达水平与囊胚数量有关。
13、使用roc曲线分析ppif作为标记物对子宫内膜异位症患者卵巢功能的评估，结果显示其在86.67％(95％ci：62.12％-97.63％)的灵敏度下，特异性为75％(95％ci：56.64％-87.32％)。
14、作为本申请所述子宫内膜异位症诊断评估试剂盒的优选实施方式，所述试剂包括用于流式细胞术、酶联免疫吸附法、放射性免疫吸附法、定量pcr检测的试剂。
15、作为本申请所述子宫内膜异位症诊断评估试剂盒的优选实施方式，所述生物样本包括卵泡液，具体来源于卵泡颗粒细胞和卵泡液其它成分。。
16、在一些实施方案中，本申请用于检测基因表达的方法是本领域已知的，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请对于检测基因表达的方法可以有各种更改和变化。
17、与现有技术相比，本申请提供了ppif基因作为标志物在子宫内膜异位症诊断评估中的应用，ppif表达是子宫内膜异位症患者卵巢功能受损及卵子质量下降的机制之一，有望作为一种评估子宫内膜异位症患者卵巢功能和卵子质量的标记物加以应用。
1.检测ppif基因在生物样本中表达水平的试剂在制备子宫内膜异位症诊断评估产品中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括试剂盒或芯片。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，ppif基因与子宫内膜异位症患者的卵子质量和数量有显著的相关性。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括用于流式细胞术、酶联免疫吸附法、放射性免疫吸附法、定量pcr检测的试剂。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述生物样本包括卵泡液。
6.一种体外筛选子宫内膜异位症诊断评估试剂的方法，其特征在于，利用待选试剂检测生物样本中ppif基因的表达水平，如能实现检测，则所述待选试剂可作为子宫内膜异位症诊断评估试剂。
7.一种子宫内膜异位症诊断评估试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测ppif基因在生物样本中表达水平的试剂。
8.如权利要求7所述的子宫内膜异位症诊断评估试剂盒，其特征在于，所述试剂包括用于流式细胞术所述试剂包括用于流式细胞术，酶联免疫吸附法、放射性免疫吸附法、定量pcr检测的试剂。
9.如权利要求7所述的子宫内膜异位症诊断评估试剂盒，其特征在于，所述生物样本包括卵泡液。
