本发明涉及生物，具体涉及一种抗促甲状腺激素受体单克隆抗体7c3及应用。
背景技术：
1、graves病(gd)是一种自身免疫性甲状腺疾病，由自然、环境及遗传等因素交互作用导致，促甲状腺激素受体(tshr)抗体(trab)是gd发病的核心机制，其主要是针对促甲状腺激素受体(tshr)产生的一种自身抗体。
2、trab不仅在gd的发病机制中发挥着核心作用，与疾病的转归、复发密切相关。trab水平的精确检测是对于gd诊断之初和治疗不同阶段预测病程、指导治疗和防止复发的关键指标。随着生物治疗的蓬勃发展，作为自身免疫性甲状腺疾病所导致的甲亢备受关注，针对trab相关的反义肽及单克隆抗体的研究更是本专业学术的热点。
3、trab是gd患者体内产生的寡克隆抗体igg，最初于1956年在gd甲亢患者体内被发现，起初被称为长效甲状腺刺激剂。trab是一种多克隆抗体，主要分为刺激性抗体(tsab)、阻断性抗体(tbab)和中性抗体。其中主要是tsab结合tshr启动第二信号，在gd甲亢的发病中起主要决定性作用。tbab被认为可能在疾病缓解期起主要作用，可能是gd患者后期并发甲减的原因。中性抗结合tshr可能会诱导甲状腺的凋亡与氧化应激。目前，尽管已经发展了生物分析、应用桥接技术分析检测trab，但临床上对于trab的检测仍然采用传统的竞争性测定。但这种竞争性仅能确定gd患者血清中存在trab，并不能彻底的区分tsab、tbab及中性抗体。而另外两种检测方法由于周期长、检测成分高未能大规模应用于临床检测。这就造成了临床医生在面对gd患者的诊断时，无法准确判断患者处于gd活动期还是缓解期，无法实现对gd患者的个体化精准治疗，可能会导致患者病情的延误与加重。
4、目前临床上对gd甲亢的治疗仍依赖已经使用了几十年的三种方法：抗甲状腺药物(at ds)、131i治疗及甲状腺切除手术。这些治疗仅能在短期内改善部分患者的甲状腺功能，大部分患者自身免疫很快重新激活，血清trab再现甚至较以往更高，而131i治疗后的患者血清trab水平在短期内会出现激增，甚至会引起gd眼病并导致其进程加快。究其根本原因为这些治疗手段未从根本解决gd患者机体异常产生trab的问题，仅通过抑制甲状腺激素产生短期缓解，或患者进展至gd疾病本身缓解期，而131i治疗可能是破坏了机体免疫，导致t细胞活化过度抑制，免疫活性细胞降低，抗体释放失控。而目前新兴的靶向药物如针对淋巴细胞的生物制剂(利妥昔单抗，rtx)、小分子tshr拮抗剂(antag-3、va-k-14及s37a)、tbab活性靶向药物(k1-70)和tshr混合肽(atx-gd-59)也被陆续证实对gd患者的疗效并不显著。
5、基于trab对gd及gd相关疾病发展中至关重要的作用，针对trab的治疗方法越来越受到关注。病理性的刺激性trab(tsab)通过与天然配体tsh竞争结合tshr，启动信号通路产生环磷酸腺苷(camp)，刺激甲状腺激素合成和分泌是gd甲亢的主要发病机制。一直以来，tsabs竞争性拮抗剂-tshr单克隆抗体(mabs)作为gd的潜在治疗药物而备受关注，所有以上研究的焦点便是tshr及trab。
6、tshr属于g蛋白偶联受体超家族的成员之一，存在于甲状腺滤泡上皮细胞的质膜，全长764个氨基酸残基，包括一个大胞外区(ecd)、七螺旋跨膜结构域(tmd)及c末端尾部。ecd包含tshr富含亮氨酸结构域(lrd)和铰链区，结合tsab，通过tmd的构象变化激活g蛋白。去除前21个信号肽，ecd包含22-410个氨基酸残基，有6个糖基化位点。tshr转录翻译后，会裂解为由2个二硫键链接的a亚基和b亚基。其中a亚基是一种分泌的可溶性重糖基化蛋白质，包含tshr氨基酸残基22-289，位于ecd内且囊括了所有的糖基化位点。tshr a亚基主要介导gd患者体内trab对tshr高亲和力的成熟，通过腺病毒编码人tshr基因免疫小鼠发现，脱落的a亚基能诱导大部分小鼠发生甲亢，且能在小鼠的血清中检测到trab的升高。脱落的a亚基可能被释放到甲状腺淋巴细胞，被抗原提呈细胞捕获。这些细胞上表达的甘露糖受体与高度糖基化的a亚基结合，被加工成多肽呈递给t细胞，可能反过来导致tsab反应。因此目前tshr a亚基被认为是gd的主要免疫原。
7、以tshr a亚基为主要免疫原制备单克隆抗体可能有助于加深对tsab结构和功能的探索。尽管目前已有不同实验室采用不同方法、不同tshr抗原片段免疫小鼠、仓鼠制备的动物源单克隆抗体和直接从人外周血分离克隆的人源性单克隆抗体。但这些并未改变临床上gd的诊断与治疗困难的窘迫局面。gd到目前为止仍是一种难治性疾病。本发明尝试筛选并使用trab主要致病位点的抗原片段制备具有针对性的、有一定活性的tshr mabs，以这些tshr mabs为靶点建立相应自身抗体的特异性检测手段与治疗手段，在gd的预测病程、指导治疗和防止复发方面将发挥积极作用，同时也对探讨gd的病理机制具有深远意义。
技术实现思路
1、针对上述技术问题，本发明的目的在于提供一种抗促甲状腺激素受体单克隆抗体7c3及应用。具体包括以下内容：
2、第一方面，本发明提供了一种抗促甲状腺激素受体单克隆抗体7c3，所述单克隆抗体7c3包括抗体重链和抗体轻链；
3、所述抗体重链的可变区cdr包括氨基酸序列如seq id no.1所示的cdr1、氨基酸序列如seq id no.2所示的cdr2和氨基酸序列如seq id no.3所示的cdr3；
4、所述抗体轻链的可变区cdr包括氨基酸序列如seq id no.10所示的cdr1、氨基酸序列如seq id no.11所示的cdr2和氨基酸序列如seq id no.12所示的cdr3。
5、优选地，所述抗体重链的可变区fr包括氨基酸序列如seq id no.4所示的fr1、氨基酸序列如seq id no.5所示的fr2、氨基酸序列如seq id no.6所示的fr3和氨基酸序列如seq id no.7所示的fr4；
6、所述抗体轻链的可变区fr包括氨基酸序列如seq id no.13所示的fr1、氨基酸序列如seq id no.14所示的fr2、氨基酸序列如seq id no.15所示的fr3和氨基酸序列如seqid no.16所示的fr4。
7、优选地，所述抗体重链的可变区的氨基酸序列如seq id no.8所示，所述抗体轻链的可变区的氨基酸序列如seq id no.17所示。
8、第二方面，本发明提供了一种核酸，所述核酸编码上述第一方面所述单克隆抗体7c3的抗体重链和抗体轻链。
9、优选地，编码所述抗体重链的可变区的核苷酸序列如seq id no.9所示，编码所述抗体轻链的可变区的核苷酸序列如seq id no.18所示。
10、第三方面，本发明提供了上述第一方面所述的单克隆抗体7c3在制备抗刺激性trab的特异性治疗药物中的应用。
11、优选地，所述特异性治疗药物为免疫抑制剂。
12、第四方面，本发明提供了上述第一方面所述的单克隆抗体7c3在制备检测trab的试剂或试剂盒中的应用。
13、第五方面，本发明提供了上述第一方面所述的单克隆抗体7c3在制备与tshr相关的疾病的诊断或预测试剂盒中的应用。
14、优选地，所述与tshr相关的疾病为自身免疫性甲状腺疾病。
15、优选地，所述自身免疫性甲状腺疾病包括graves病。
16、第六方面，本发明提供了上述第一方面所述的单克隆抗体7c3在制备构建甲亢动物模型的试剂中的应用。
17、本发明的有益效果是：①本发明首先制备了重组tshr289蛋白，以重组tshr289蛋白免疫小鼠，获得了一种抗促甲状腺激素受体单克隆抗体7c3，所述单克隆抗体7c3包含seqid no.8所示重链可变区和seq id no.17所示的轻链可变区；②所述的单克隆抗体7c3能够结合天然野生型tshr，表明单克隆抗体7c3是一种具有构象表位的抗体，目前的大部分鼠源性抗tshr289单抗都是线性的，不具有生物学特性，而本技术所述的单克隆抗体7c3与天然野生的tshr亲和力高，抗体具有构象型结构，具有生物学特性；③所述的单克隆抗体7c3能竞争抑制gd患者血清中trab与tshr的结合，具有较强的生物学活性，为临床上trab的检测提供了理论依据和有力工具；④所述单克隆抗体7c3具有较高体外和体内的甲状腺刺激性活性，能够诱导小鼠出现甲亢表现，可用于构建甲亢动物模型；且与已有文献报道的来看鼠源性抗tshr单抗相比，本技术所述的单克隆抗体7c3具有更强的甲状腺刺激性活性；⑤所述单克隆抗体7c3能够竞争抑制gd甲亢患者trab与tshr的结合，即使将患者血清稀释到32倍时，仍能有效抑制结合，抑制活性高于现有文献已经报道的相关鼠源抗体，有可能作为一种抗tshr单克隆抗体被动免疫制剂产品或开发体外诊断试剂盒。
1.一种抗促甲状腺激素受体单克隆抗体7c3，其特征在于，所述单克隆抗体7c3包括抗体重链和抗体轻链；
2.如权利要求1所述的单克隆抗体7c3，其特征在于，
3.如权利要求1所述的单克隆抗体7c3，其特征在于，所述抗体重链的可变区的氨基酸序列如seq id no.8所示，所述抗体轻链的可变区的氨基酸序列如seq id no.17所示。
4.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1-3任一所述单克隆抗体7c3的抗体重链和抗体轻链。
5.如权利要求4所述的核酸，其特征在于，编码所述抗体重链的可变区的核苷酸序列如seq id no.9所示，编码所述抗体轻链的可变区的核苷酸序列如seq id no.18所示。
6.如权利要求1-3任一所述的单克隆抗体7c3在制备抗刺激性trab的特异性治疗药物中的应用。
7.如权利要求1-3任一所述的单克隆抗体7c3在制备检测trab的试剂或试剂盒中的应用，或在制备构建甲亢动物模型的试剂中的应用。
8.如权利要求1-3任一所述的单克隆抗体7c3在制备与tshr相关的疾病的诊断或预测试剂盒中的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述与tshr相关的疾病为自身免疫性甲状腺疾病。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述自身免疫性甲状腺疾病包括graves病。
