本发明属于生物，具体涉及一种胎盘羊膜间充质干细胞分离提取方法及其在产后恢复中的应用。
背景技术：
1、间充质干细胞（mesenchymal stem cells，简称mscs）是一类成体干细胞，具有多向分化潜能和自我更新的能力。这些细胞可以分化成多种中胚层衍生的细胞类型，包括但不限于骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞和纤维母细胞等。此外，间充质干细胞还显示出向非中胚层衍生的细胞类型分化的潜力，如神经元样细胞。间充质干细胞的主要特征包括：自我更新能力：能够在体外长期培养并保持未分化状态。多向分化潜能：在适当的条件下，可以分化成多种细胞类型。
2、免疫调节功能：具有免疫抑制特性，能够影响多种免疫细胞的功能，包括t细胞、b细胞、自然杀伤细胞和抗原呈递细胞等。归巢和迁移能力：在体内可以迁移到损伤或炎症部位，参与组织修复和再生。间充质干细胞的来源多样，包括但不限于：骨髓：最经典的来源，但提取过程较为侵入性。脂肪组织：相对容易获取，含有丰富的间充质干细胞。脐带和胎盘组织：新生儿出生后可以采集，避免了伦理争议，且细胞年轻、活性高。牙髓、皮肤、肌肉和其他结缔组织：这些来源的间充质干细胞也在研究中被探索。间充质干细胞在临床和研究中的应用非常广泛，包括：组织工程和再生医学：用于修复受损的组织和器官。免疫和炎症疾病治疗：利用其免疫调节作用治疗自身免疫性疾病和炎症。心血管疾病：用于心肌梗死后的心脏修复。神经系统疾病：如帕金森病、阿尔茨海默病和脊髓损伤的治疗。代谢性疾病：如糖尿病的治疗，通过分化为胰岛细胞。美容和皮肤修复：用于皮肤再生和抗衰老。
3、胎盘羊膜间充质干细胞（amniotic membrane mesenchymal stem cells, amscs）是从胎盘的羊膜层分离出来的一种干细胞类型。这些干细胞具有多种生物学特性，包括多向分化潜能、免疫调节能力和自我更新的能力。它们可以分化为多种不同的细胞类型，并且能够分泌多种生长因子和细胞因子，这使得它们在组织修复和再生医学领域具有潜在的应用价值。
4、间充质干细胞能够分化为多种类型的细胞，包括上皮细胞、肌肉细胞和神经细胞等，从而有助于受损组织的修复和再生。它们具有免疫调节特性，能够抑制炎症反应，减少产后炎症和促进愈合过程。干细胞分泌的因子可以刺激血管生成，改善局部血液循环，加快组织修复速度。有研究表明，间充质干细胞移植能够增加子宫内膜厚度，减轻纤维化，增加腺体数量，这对于产后子宫内膜的恢复具有重要意义。
5、但是目前现有技术胎盘羊膜间充质干细胞的分离制备存在分离效率低、操作复杂、成本高的问题。
技术实现思路
1、本发明的目的是提供一种胎盘羊膜间充质干细胞分离提取方法及其在产后恢复中的应用。
2、为了实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：
3、一种胎盘羊膜间充质干细胞分离提取方法，包括以下步骤：
4、（1）将胎盘放置在处理盘中，将羊膜沿脐带和胎盘连接处从胎盘上剥离，用清洗液清洗2-4次，再用体积分数75％的酒精漂洗2-4次；
5、（2）将漂洗过的羊膜剪碎至1-2cm2的羊膜组织，再用清洗液清洗2-3次，将清洗后的羊膜组织放入试管中加入i型和ii胶原酶、磷酸盐缓冲液组成的混合物，在35-36℃处理30-40分钟；
6、（3）继续将处理过的羊膜组织用清洗液清洗2-4次，加入胶原酶i、dnase i和生理盐水，在35-36℃下160-180rpm震荡消化30-40分钟；
7、（4）震荡消化后，加入生理盐水，在35-36℃温度下1400-1500rpm离心5-10分钟，弃上清，得到离心后的细胞；
8、（5）离心后的细胞加入新鲜培养基中，在co2培养箱中培养。
9、进一步地，步骤（2）中i型和ii型胶原酶质量比为1：1.2~1.7。
10、进一步地，步骤（2）中每克脂肪组织使用1mli型和ii胶原酶、磷酸盐缓冲液组成的混合物，处理时间为1-1.5小时。
11、进一步地，步骤（3）中离心管中胶原酶i的浓度为0 .1wt％，dnase i的浓度为0.02wt％。
12、进一步地，步骤（5）中所述新鲜培养基由基础培养基和添加在基础培养基中的添加成分组成，所述基础培养基为dmem/f12培养基，所述添加成分为l-谷氨酰胺、非必须氨基酸、l-抗坏血酸、亚硒酸钠、纤连蛋白、乙醇胺、胰蛋白酶抑制剂、人转铁蛋白、辅酶 a、丙酮酸钠和egf。
13、进一步地，所述添加成分为：l-谷氨酰胺的浓度为2-3mm，非必须氨基酸的浓度为1-1.5mm，l-抗坏血酸的浓度为20-30mg/l，亚硒酸钠的浓度为5-12µg/l，纤连蛋白的浓度为20-28mg/l，乙醇胺的浓度为2-3mg/l，胰蛋白酶抑制剂的浓度为1-2mg/l，人转铁蛋白的浓度为3-7mg/l，辅酶a的浓度为60-70mg/l，丙酮酸钠的浓度为2-4mm，egf的浓度为10-15µg/l。
14、进一步地，步骤（5）中所述培养的培养温度为35-37℃。
15、进一步地，新鲜培养基的ph值为7.1-7.3，渗透压为250-300mosm。
16、进一步地，非必须氨基酸为质量比1:1.2-1.5:0.4-0.7的谷氨酸、天冬氨和甘氨酸。
17、本发明还提供了上述提取方法制得的胎盘羊膜间充质干细胞在产后恢复中的应用。
18、与现有技术相比，本发明的优点和有益效果为：本发明提供了一种胎盘羊膜间充质干细胞分离提取方法，本发明提出的提取方法和提取专用培养基能在较小损伤干细胞的情况下，快速获得胎盘羊膜间充质干细胞。干细胞纯度高，具有较高的增殖和分化能力，可以应用于产后恢复中。
1.一种胎盘羊膜间充质干细胞分离提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的胎盘羊膜间充质干细胞分离提取方法，其特征在于，步骤（2）中i型和ii型胶原酶质量比为1：1.2~1.7。
3.根据权利要求1所述的胎盘羊膜间充质干细胞分离提取方法，其特征在于，步骤（2）中每克脂肪组织使用1mli型和ii胶原酶、磷酸盐缓冲液组成的混合物，处理时间为1-1.5小时。
4.根据权利要求1所述的胎盘羊膜间充质干细胞分离提取方法，其特征在于，步骤（3）中离心管中胶原酶i的浓度为0 .1wt％，dnase i的浓度为0 .02wt％。
5.根据权利要求1所述的胎盘羊膜间充质干细胞分离提取方法，其特征在于，步骤（5）中所述新鲜培养基由基础培养基和添加在基础培养基中的添加成分组成，所述基础培养基为dmem/f12培养基，所述添加成分为l-谷氨酰胺、非必须氨基酸、l-抗坏血酸、亚硒酸钠、纤连蛋白、乙醇胺、胰蛋白酶抑制剂、人转铁蛋白、辅酶 a、丙酮酸钠和egf。
6.根据权利要求5所述的胎盘羊膜间充质干细胞分离提取方法，其特征在于，所述添加成分为：l-谷氨酰胺的浓度为2-3mm，非必须氨基酸的浓度为1-1.5mm，l-抗坏血酸的浓度为20-30mg/l，亚硒酸钠的浓度为5-12µg/l，纤连蛋白的浓度为20-28mg/l，乙醇胺的浓度为2-3mg/l，胰蛋白酶抑制剂的浓度为1-2mg/l，人转铁蛋白的浓度为3-7mg/l，辅酶a的浓度为60-70mg/l，丙酮酸钠的浓度为2-4mm，egf的浓度为10-15µg/l。
7.根据权利要求1所述的胎盘羊膜间充质干细胞分离提取方法，其特征在于，步骤（5）中所述培养的培养温度为35-37℃。
8.根据权利要求1所述的胎盘羊膜间充质干细胞分离提取方法，其特征在于，新鲜培养基的ph值为7.1-7.3，渗透压为250-300mosm。
9.根据权利要求6所述的胎盘羊膜间充质干细胞分离提取方法，其特征在于，非必须氨基酸为质量比1:1.2-1.5:0.4-0.7的谷氨酸、天冬氨和甘氨酸。
10.一种权利要求1-9任一项所述的提取方法制得的胎盘羊膜间充质干细胞在产后恢复中的应用。
