本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种cxcr-2突变体及其制备方法和应用。
背景技术：
1、脑出血急性期由于血肿体积相对较小，手术清除血肿的危险系数可能会高于治疗效果，并且手术操作难免会影响正常的脑组织和神经，导致不可逆的副作用。内科干预脑血肿的手段主要是应用降压药和止血药，但其旨在控制血肿扩大，而非促进血肿吸收，应用止血药还存在血栓栓塞事件发生的风险，且长期获益不确定。近年来，随着脑部精准立体定向技术的发展，微创手术联合药物的原位给药有效地提高了脑出血的治疗效果，研究表明脑出血后72小时内进行微创手术和溶栓药物治疗，有改善180天神经功能的趋势。因此，研发能促进脑血肿清除的药物，借助微创手术建立的手术通道行原位治疗，可为脑出血的治疗提供一种新思路，有望提高脑出血的治疗效果。
2、现有研究表明，脑血肿的自身清除主要通过三种途径：小神经胶质/巨噬细胞系统是脑出血的第一道防线，是介导血肿清除的主要吞噬系统；部分清道夫受体(如cd36、cd47、sra等)参与胞吞作用，对维持脑内平衡和吞噬作用有很重要的意义，能进一步促进脑血肿的清除；此外，一些上游调节系统(如nrf2、ppar-γ)也可间接促进脑血肿的清除。其中，越来越多的证据显示，小神经胶质细胞在血肿的清除过程中起着关键性的作用，当脑血肿形成时，小神经胶质细胞迅速被激活，可极化为m1和m2两种表型。m1型会表达一系列炎症因子，从而导致神经元细胞凋亡、神经传导束断裂、血脑屏障损坏等。相反，m2型主要表达抗炎因子，可促进死亡细胞和血液碎片被吞噬，从而促进脑血肿的清除。因此，针对脑血肿的第一道防线-小神经胶质细胞，研发可调控其向m2型极化的药物，有助于促进脑血肿的清除，也是当前脑出血后继发性脑损伤神经学研究的重点。
技术实现思路
1、本发明公开了一种cxcr-2突变体及其制备方法，这种突变体可以提高与配体趋化因子2的结合，可促进脑血肿的吸收。本发明的第二目的在于提供该cxcr-2突变体的应用。
2、为了实现上述第一目的，本发明的技术方案为：一种cxcr-2突变体，其特征在于：氨基酸序列为mgeirvdnfs ledffsgdid synyssdppf tlsdaapcps anldinryat tttytqttqqsqtgqsqtmq ttqynrstcs vtdtyqqqqa tadqyyaqtq ptwaaskvng wifgsflckt ysyqqettyysstqqqacts mdrylaivha tstliqkrhl vkytcttmwy qsqtqsqpty tqrttvkanp stvvcyenignntskwrttq rtqpqtygyq qpqqtmqycy gftlrtlfka hmgqkhramr ttyattqtyq qcwqpyqttqytdtlmrtkl iketcerqne inkaleatet qgyqhscqqp ttyafigqkf rhgllkiman yglvskeflakegrpsfvgs ssantsttl hhhhhhhhhh。
3、所述cxcr-2突变体蛋白的方法，其特征在于：包括以下步骤：
4、(1)重组质粒制备；
5、(2)载体转化：从-80℃中取出bl21(de3)感受态细胞，在冰上解冻；将质粒dna加入bl21(de3)菌株中，轻轻混合，冰上孵育；在42℃下热冲击静置加热，再冰浴；添加常温lb培养液，200rpm,37℃，振荡孵育；将菌液涂布于含氨苄西林的lb琼脂平板上，37℃孵育过夜；
6、(3)蛋白表达：挑选琼脂平板上的单菌落，接种于含氨苄西林的lb培养基中，200rpm,37℃，振荡培养过夜；将菌液接种于lb培养基中扩大培养，200rpm,37℃，振荡培养至菌液od600到达0.6-0.8；加入终浓度为0.5mm的iptg,37℃振荡诱导；
7、(4)裂解洗涤：
8、收集iptg诱导后的菌液，8000rpm，4℃，离心，收集沉淀；加b-per溶液，冰浴下超声破碎，混匀重复裂解一次；离心，11500rpm，4℃，弃上清；加buffer1洗涤沉淀，超声，离心，11500rpm，4℃，25min，弃上清；加buffer2超声；离心，11500rpm，4℃，弃上清；加ml buffer1超声；离心，11500rpm，4℃，25min，弃上清；
9、(5)蛋白纯化：
10、加deb溶解沉淀，磁力搅拌或层析柜混悬过夜；离心，11500rpm，4℃，收集上清；过ni柱层析纯化，收集纯化样品，用透析袋或者超滤管透析除去deb，获得纯化蛋白。
11、一种cxcr-2突变体作为清除脑部损伤药物的应用。
12、所述脑部损伤包括脑血肿。
13、有益效果：
14、趋化因子受体-2(cxcr-2)会在一些中枢神经系统疾病的小神经胶质细胞中表达，cxcr-2与配体趋化因子2(cxcl2)结合后，可促使小神经胶质细胞向m1型转化，阻断cxcl2-cxcr-2信号通路，可扭转这种转化，促进m1向m2型转化。本发明根据cxcr-2的序列进行设计，得到了一种全新的蛋白序列，该序列可进行蛋白重组表达，获得水溶性较好的重组蛋白，在胶原蛋白酶诱导的脑出血大鼠模型中，本重组蛋白可促进大鼠脑血肿的吸收。能有效地改善脑出血预后。
1.一种cxcr-2突变体，其特征在于：氨基酸序列为mgeirvdnfs ledffsgdidsynyssdppf tlsdaapcpsanldinryat tttytqttqq sqtgqsqtmq ttqynrstcsvtdtyqqqqatadqyyaqtq ptwaaskvng wifgsflcktysyqqettyy sstqqqacts mdrylaivha tstliqkrhlvkytcttmwy qsqtqsqpty tqrttvkanp stvvcyenignntskwrttq rtqpqtygyq qpqqtmqycygftlrtlfkahmgqkhramr ttyattqtyq qcwqpyqttq ytdtlmrtkliketcerqne inkaleatetqgyqhscqqp ttyafigqkfrhgllkiman yglvskefla kegrpsfvgs ssantsttlhhhhhhhhhh。
2.一种制备权利要求1所述cxcr-2突变体蛋白的方法，其特征在于：包括以下步骤：
3.一种cxcr-2突变体作为清除脑部损伤药物的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述脑部损伤包括脑血肿。
