本发明涉及药物制剂领域，特别是解纤维化与抑制胰腺癌转移协同的纳米药物及其制备方法。
背景技术：
1、致密的纤维化粘连间质是导致胰腺癌治疗失败的主要原因之一，它作为胰腺癌的典型组织病理学特征，是胰腺癌天然的保护性物理屏障，可以阻断化疗药物的有效输送，而且还可以保护癌细胞不受常规化疗药物的作用，进而导致化疗耐药性的产生。任何有效的化疗都必须克服纤维化粘连间质的障碍，因此如何高效地解纤维化一直是胰腺癌治疗的瓶颈问题。另一方面，由于胰腺癌细胞的强侵袭性，解纤维化会增加胰腺癌的转移风险，因此如何在高效解纤维化的同时有效抑制胰腺癌细胞的转移成为胰腺癌治疗的另一个难题。因此，构建既能高效解纤维化，同时又能有效抑制癌细胞转移的药物递送体系对胰腺癌的治疗具有重要的意义。
2、纳米药物为改善癌症的治疗效果开辟了新的道路。相对于小分子药物，纳米药物具有许多优点，例如纳米药物的体内血液循环时间更长，能在肿瘤部位更高效地富集，功能化的纳米药物能在肿瘤微环境特异性释放药物等。可见，纳米药物能够有效提高药物的靶向性和生物利用度，从而降低治疗的副作用。目前，纳米药物主要依赖于脂质体或聚合物等赋形剂来形成纳米颗粒。由于赋形剂占据了纳米药物的大部质量，使得纳米药物的载药量通常很低，常常会因为达不到有效药物浓度而导致治疗效果不理想，若是增加给药量，则难以避免赋形剂带来的系统毒性。基于小分子自组装的纳米药物正好完美解决了上述问题。无赋形剂使得其具有高载药率，最大限度避免了赋形剂所带来的毒副作用，在治疗上具有更可靠的安全性，而且小分子自组装纳米药物的制备方法往往更简单更环境友好。
3、近年，为了提高胰腺肿瘤的治疗效率，科研工作者开发了各种纳米药物递送系统对胰腺癌纤维化粘连间质进行调控。其中的策略主要包括：(1)以聚合物或脂质体作为载体对tgf-β/smad信号通路抑制剂(梣酮、二甲双胍、α-倒捻子素等)进行递送，通过抑制胰腺星状细胞的激活通路，减少癌症相关成纤维细胞的生成，以降低纤维化粘连间质的形成；(2)用脂质体或无机纳米粒子作为载体对胰腺星状细胞活性抑制剂(吡非尼酮、全反式维甲酸)进行递送，通过抑制胰腺星状细胞活性，以减缓纤维化粘连间质的形成；(3)以脂质体作为载体对光热治疗剂进行递送，通过光热作用对胰腺癌纤维化粘连间质进行融蚀。上述解纤维化的研究极大促进了解纤维化纳米药物的应用，但也存在诸多的不足之处：其一，难以同时实现解纤维化与抑制转移；其二，借助于特定载体，仅通过简单的包裹或吸附的方式进行载药，载药率低，难以实现响应性释放，选择性差；其三，信号通路调节相对单一，难以形成协同作用，解纤维化效率低。
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本发明提供了一种解纤维化与抑制胰腺癌转移协同的纳米药物及其制备方法。
2、为达到上述目的，本发明是按照以下技术方案实施的：
3、本发明的目的之一是要提供一种解纤维化与抑制胰腺癌转移协同的纳米药物的制备方法，包括以下步骤：
4、s1、取摩尔比为1:1:1的三氟乙酸、卡托普利cap与肉桂醛ca混合，在三氟乙酸的催化作用下，卡托普利cap的巯基与肉桂醛ca的醛基发生缩合反应，卡托普利cap与肉桂醛ca通过ros敏感的tk键连接，得到小分子前药cap-tkca-cap；并对小分子前药cap-tkca-cap进行处理得到小分子前药纳米粒子cap-tkca-cap nps；
5、s2、制备激活的巨噬细胞/成纤维细胞的杂化细胞膜；
6、s3、利用获得的激活的巨噬细胞/成纤维细胞的杂化细胞膜对小分子前药纳米粒子cap-tkca-capnps进行包覆得到纳米药物cap-tkca-cap@cm。
7、进一步地，所述步骤s1中，对小分子前药cap-tkca-cap进行处理具体为：
8、将小分子前药cap-tkca-cap溶于二甲基亚砜dmso中得到混合溶液，在超声下将混合溶液缓慢滴入去离子水中，用截留分子量为1000da的透析袋进行透析纯化得到小分子前药纳米粒子cap-tkca-capnps。
9、具体地，所述步骤s2包括：
10、s21、巨噬细胞raw264.7用10ng/ml的lps进行孵育，然后经超声、离心提取得到激活的巨噬细胞膜；
11、s22、正常成纤维细胞nih3t3用10ng/ml的tgf-β1进行孵育，然后经超声、离心提取得到激活的成纤维细胞膜；
12、s23、将激活的巨噬细胞膜与激活的成纤维细胞膜按质量比1：1进行混合超声，通过聚碳酸酯多孔膜反复挤出促进膜融合获得激活的巨噬细胞/成纤维细胞的杂化细胞膜。
13、具体地，所述步骤s3包括：
14、将1mg/ml的小分子前药纳米粒子cap-tkca-cap nps用500万激活的巨噬细胞与500万成纤维细胞的杂化膜混合后超声，通过聚碳酸酯多孔膜挤出获得纳米药物cap-tkca-cap@cm。
15、优选地，所述聚碳酸酯多孔膜的孔径为100-400nm。
16、本发明的目的之二是要提供一种利用上述方法制备的解纤维化与抑制胰腺癌转移协同的纳米药物。
17、本发明制备的纳米药物cap-tkca-cap@cm的机理为：
18、在递送时，杂化膜为纳米药物提供体内长循环，对胰腺癌纤维化粘连间质中的成纤维细胞进行同源靶向，同时对间质中的ha、纤维连接蛋白进行受体蛋白介导的靶向，高效在纤维化粘连间质中累积。在胰腺癌纤维化粘连间质中，高水平的ros裂解cap-tkca-cap的tk键，快速、大量、无痕释放cap和ca；cap和ca分别通过抑制tgf-β/smad信号通路，减少ecm蛋白的分泌，抑制纤维化粘连间质的形成，协同解纤维化。随着解纤维化的进行，仿生纳米药物进一步在胰腺癌细胞内快速响应释放，cap和ca分别通过抑制tgf-β/smad、pi3k/akt信号通路降低胰腺癌细胞的侵袭性，协同抑制转移的发生。
19、与现有技术相比，本发明通过小分子前药自组装实现无赋形剂相关毒性、高载药率，通过杂化膜的包覆实现对纤维化粘连间质的同源靶向、受体蛋白介导的主动靶向，通过前药分子对ros的响应实现在纤维化粘连间质中大量、快速、无痕的药物释放，解除了响应性小分子药物释放的自限性特征；释放的药物cap和ca可以同时抑制纤维化信号/蛋白，协同解纤维化；随着解纤维化的进行，在胰腺癌细胞内快速无痕释放的cap和ca可以同时抑制胰腺癌细胞的转移/侵袭信号通路，协同抑制转移的发生；解纤维化的过程与抑制转移的过程动态协同，为胰腺癌治疗的解纤维化提供一种新的方式。
1.一种解纤维化与抑制胰腺癌转移协同的纳米药物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的解纤维化与抑制胰腺癌转移协同的纳米药物的制备方法，其特征在于，所述步骤s1中，对小分子前药cap-tkca-cap进行处理具体为：
3.根据权利要求1所述的解纤维化与抑制胰腺癌转移协同的纳米药物的制备方法，其特征在于，所述步骤s2包括：
4.根据权利要求1所述的解纤维化与抑制胰腺癌转移协同的纳米药物的制备方法，其特征在于，所述步骤s3包括：
5.根据权利要求3或4所述的解纤维化与抑制胰腺癌转移协同的纳米药物的制备方法，其特征在于，所述聚碳酸酯多孔膜的孔径为100-400nm。
6.一种如权利要求1-5任一所述的方法制备的解纤维化与抑制胰腺癌转移协同的纳米药物。
