本发明涉及了一种多磺酸粘多糖的用途，确切的说涉及了以硫酸软骨素a为原料，通过降解和磺酸化制备一种多磺酸粘多糖mps，还提供了其制备方法，以及其在抗炎、美白和抗衰过程中的用途。
背景技术：
1、粘多糖是一类含氮的磺酸化多糖，广泛存在于哺乳动物的结缔组织和各类器官的细胞内，具有保持结缔组织的水分、调节金属离子在组织中的分布和润滑关节等作用。重要的粘多糖包括了肝素、硫酸皮肤素、硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素和透明质酸等由不同的二糖单位重复连接而成的链状多糖。多磺酸化后的粘多糖因其具有抑制血液凝固、阻止血栓形成及抗炎等功能而成为研究及应用热点。其中，多磺酸粘多糖（mucopolysaccharidepolysulfate, mps），是由具有若干磺酸基 (-so3h) 基团的β-d-葡萄糖醛酸 (glca) 和n-乙酰-d-半乳糖胺的二糖重复单元组成，分子量在5-15 kda之间。如多磺酸粘多糖乳膏（商品名：喜辽妥）在临床上被用于静脉曲张性静脉炎及其术后的恢复治疗，挫伤、水肿以及疤痕、痘印的消除等。多磺酸粘多糖具有良好的生物活性可作为原料药用于化妆品的开发，但该化合物存在生产工艺复杂，反应条件苛刻同时环境污染较大等缺陷，目前国内少有公司对其进行工业化生产，同时该多糖在美白抗衰及抗炎方面的研究甚少，限制了多磺酸粘多糖在化妆品方面的应用和相关产品的开发。
技术实现思路
1、本发明用一种简单有效的以硫酸软骨素a（csa）为原料，制备符合药用规范的多磺酸粘多糖mps的工艺和方法，可实现工业化生产。通过体外实验证明，该多糖能够抑制b16细胞中的酪氨酸酶活性，抑制h2o2诱导的hacat衰老模型的细胞衰老，促进lps脂多糖诱导的raw264.7细胞炎症模型的细胞增殖和抑制raw264.7细胞的一氧化氮 (no) 释放。因此，所述的多磺酸粘多糖mps具有潜在的美白抗衰和抗炎的作用，该多糖有望成为有效的化妆品成分并用于新型化妆品的开发。
2、为解决上述发明目的，本发明提供了一种多磺酸粘多糖mps，由具有若干磺酸基(-so3h) 基团的β-d-葡萄糖醛酸 (glca) 和n-乙酰-d-半乳糖胺的二糖重复单元组成，分子量在5-15 kda之间。优选地，所述mps具有如下结构：
3、
4、其中，n = 11-13
5、所述的多磺酸粘多糖mps的分子量范围在5-15 kda之间，优选为8.39 kda。
6、（1）硫酸软骨素a（csa）的降解：30%的双氧水溶液溶解csa，100 °c油浴下降解6h，加入naoh终止反应并促进h2o2分解，对反应液进行浓缩，去离子水透析 (mwco：3, 500 da)48 h，收集透析袋内液进行冷冻干燥，得降解多糖；
7、（2）降解多糖的磺酸化：首先将降解多糖溶解于甲酰胺溶液中，缓慢加入氯磺酸与甲酰胺的混酸溶液，50 °c油浴中持续加热搅拌3 h。关闭加热，加入4 m的naoh溶液终止反应并调节溶液ph值至中性，反应液装入透析带(mwco：3,500 da),去离子水透析24 h。浓缩透析内液进行冷冻干燥，得多磺酸化粘多糖mps。
8、（3）mps特殊官能团及化学结构的鉴定：通过高效液相对其进行纯度及分子量的测定，通过红外及核磁共振对其特殊官能团和化学结构进行鉴定。
9、（1）mps抑制b16细胞增殖及其酪氨酸酶的生物活性研究：通过mtt实验探究mps对b16细胞增殖和细胞形态的影响；通过检测b16细胞中的酪氨酸酶对左旋多巴的催化情况，探究mps对b16细胞中酪氨酸酶活性的影响。
10、（2）mps抑制h2o2诱导hacat细胞衰老的生物活性研究：通过双氧水处理hacat细胞，以此构建细胞衰老模型，通过mtt细胞增殖实验探究最佳的衰老模型所需的h2o2浓度，同时探究mps对衰老的hacat细胞增殖的影响。
11、（3）mps抑制lps诱导raw264.7炎症的生物活性研究：给予raw264.7细胞1μg/ml的lps构建炎症模型，通过mtt细胞增殖实验，检测mps对lps刺激的raw264.7细胞的增殖情况，同时通过no检测试剂盒检测不同浓度mps处理后lps刺激的raw264.7细胞的培养上清液中no的含量。
12、本发明同时也提供了多磺酸粘多糖mps作为酪氨酸酶抑制剂药物、作为抗衰老抑制剂添加剂、炎症抑制剂等药物中的应用。实验结果显示：mps能够抑制b16细胞中的酪氨酸酶活性，抑制h2o2诱导的hacat衰老模型的细胞衰老，抑制raw264.7细胞中一氧化氮 (no)的释放。因此，所述的多磺酸粘多糖mps具有潜在的美白抗衰和抗炎的作用，该多糖有望成为潜在的新型化妆品有效添加剂并用于化妆品的开发。
13、本发明主要解决了目前多磺酸粘多糖工业化生产困难的问题，重点考察了通过硫酸软骨素a制备多磺酸粘多糖mps的工艺流程及通过现代分析技术解析及表征所得到的mps的化学结构，本发明主要的难点在于通过双氧水降解技术及氯磺酸甲酰胺磺化技术得到具有特定分子量范围同时具有多个磺酸基团的多磺酸粘多糖mps。
1.一种多磺酸粘多糖mps，其特征在于其由1，4连接的葡萄糖醛酸和1，3连接的n乙酰半乳糖胺交替形成的二糖单位聚合而成,分子量在5, 000-15, 000 da之间的多磺酸化的的降解多糖；具有如下结构：n = 11-13。
2.权利要求1所述的多磺酸粘多糖mps，其特征在于分子量为7, 766 da。
3.权利要求1所述的多磺酸粘多糖mps的制备方法，其特征在于包括以下几个步骤：
4.权利要求1所述的一种多磺酸粘mps在制备作为酪氨酸酶抑制剂药物中的应用。
5.权利要求1所述的一种多磺酸粘mps在制备作为抗衰老抑制剂的添加剂中的应用。
6.权利要求1所述的一种多磺酸粘mps在制备炎症抑制剂药物中的应用。
