本发明属于生物工程，具体涉及一种β-琼胶酶突变体及其应用。
背景技术：
1、琼胶作为增稠剂与胶凝剂应用在食品工业中，其附加值较低。而由琼胶降解的琼胶寡糖具有多种有益的生物活性，包括抗炎、抗氧化、益生、抑菌和美白皮肤等，使得琼胶寡糖在食品、医药、农业等领域均具有应用潜力，增加了琼胶的高值化利用，极大地提高了琼胶的经济效益。迄今为止，常用的琼胶寡糖制备方式有两种，化学法和酶法。化学法常用的酸解法在产生琼胶寡糖的过程不易控制，会生产一些非目标产物，需要进一步分离纯化。酶法由于能特异性水解琼胶，并且不会形成有害化合物，被认为是可持续的商业化生产琼胶低聚糖的优选方法。
2、由于琼胶具有热可逆凝胶性的特点，其溶液粘度会随温度的降低而升高，所以在琼胶的工业酶解生产中，为了使底物和酶充分接触，避免反应液粘度过高或凝成胶状，反应液温度一般严格控制；且在工业生产的极端环境中，需要酶具有优良的热稳定性、催化活性等特性。大部分天然来源的琼胶酶热稳定性较差，无法满足工业生产的需要，限制琼胶资源的开发利用。
3、β-琼胶酶ym01-3是嗜琼胶卵链菌ym01t的15种琼胶降解酶中对琼胶降解活性最强的，其最适温度为60℃，主要酶解产物为新琼四糖和新琼六糖。然而，该酶的热稳定性还有待提高，在60℃下孵育1h酶活力急剧下降，只剩不足30％的残余活力，大大限制了其应用和推广。因此，对β-琼胶酶进行合理的改良，优化酶的热稳定性，使得β-琼胶酶在高温条件下水解琼胶的工业生产中具有良好的应用前景。
技术实现思路
1、本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术中的技术问题之一。为此，本发明提出了一种β-琼胶酶突变体及其应用，该突变体的最适反应温度、热稳定性以及催化活性得到了提高。
2、为此，在本发明的第一个方面中，提供一种β-琼胶酶突变体，所述β-琼胶酶突变体是将氨基酸序列如seq id no：1所示的琼胶酶的氨基酸截短，所述β-琼胶酶突变体的氨基酸序列如seq id no：2所示。
3、根据本发明的一种β-琼胶酶突变体，所述β-琼胶酶突变体是将氨基酸序列如seqid no：1所示的来源自嗜琼胶卵链菌ym01t的、全长为420个氨基酸的野生型β-琼胶酶ym01-3通过引物设计截短为包含313个氨基酸的突变体y3r1；使得突变体的热稳定性和催化活性协同提高；与野生型β-琼胶酶ym01-3(wt)相比，突变体y3r1的最适反应温度为65℃，相较于wt提高了5℃；突变体y3r1在60℃和70℃处理1h其残余活力提高了41.9％和20.9％；wt的vmax值为5000u/mg，y3r1的vmax为10000u/mg，突变体y3r1的最大反应速率得到了提升。
4、在本发明的第二方面中，提供了一种编码上述β-琼胶酶突变体的基因，所述基因的核苷酸序列如seq id no：3所示。
5、在本发明的第三个方面中，提供了一种构建体，其包含编码上述β-琼胶酶突变体的基因。
6、在本发明的第四个方面中，提供了一种表达上述β-琼胶酶突变体，或含有上述基因，或含有上述的构建体的重组细胞。
7、在本发明的第五个方面中，提供了上述β-琼胶酶突变体，或上述的编码基因，或上述的构建体，或上述的重组细胞在降解琼胶或制备琼胶寡糖上的应用。
8、本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
1.一种β-琼胶酶突变体，其特征在于，所述β-琼胶酶突变体是将氨基酸序列如seq idno：1所示的琼胶酶的氨基酸截短，所述β-琼胶酶突变体的氨基酸序列如seq id no：2所示。
2.一种编码权利要求1所述的β-琼胶酶突变体的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如seq id no：3所示。
3.一种构建体，其特征在于，包含如权利要求2所述的基因。
4.表达权利要求1所述β-琼胶酶突变体，或含有权利要求2所述基因，或含有权利要求3所述的构建体的重组细胞。
5.如权利要求4所述的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞以大肠杆菌bl21(de3)为宿主细胞。
6.权利要求1所述的β-琼胶酶突变体，或权利要求2所述的编码基因，或权利要求3所述的构建体，或权利要求4或5所述的重组细胞在降解琼胶或制备琼胶寡糖上的应用。
