本发明属于食品安全分析检测，具体为一种糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法。
背景技术：
1、氨基甲酸乙酯(ec)俗称尿烷，是酒精饮料(白酒、葡萄酒、黄酒等)在生产和贮存过程中产生的一种副产物，易溶于水和乙醇，具有多位点基因毒性，具有潜在的致癌风险，被世界卫生组织的国际癌症机构归为2a类致癌物。
2、国际上检测酒类中ec的方法包括气相色谱法、气质联用仪、高效液相色谱法、薄层色谱法、傅里叶变换近红外光谱法等。国内也出台了ec检测的国家标准和行业标准，如sn/t0285-2012《出口酒中氨基甲酸乙酯残留量检测方法气相色谱-质谱法》，gb 5009.223-2014《食品安全国家标准食品中氨基甲酸乙酯的测定》中分别对葡萄酒、黄酒、啤酒、蒸馏酒、白兰地酒等酒类及酱油中氨基甲酸乙酯的测定方法进行了描述，采用固相萃取(spe)前处理方式结合gcms，利用同位素内标法进行定量。
3、然而，由于酒类中ec的含量在几十至几百微克/千克，含量低，背景干扰强，检测难度大，且结果稳定性差。同时，spe前处理操作复杂、耗材贵且重复性使用率低、预处理时间周期长、会使用较多的有毒萃取试剂，对人体和环境均不友好。
4、相对于白酒中ec的检测，糟醅具有更复杂的基质背景，且由于糟醅中含水状况不同，导致糟醅中ec含量很难准确量化。cn 115166105a中介绍了发酵物中氨基甲酸乙酯的检测方法，采用spe前处理技术结合液质联用仪进行ec的定量，从检测结果来看，ec和内标物的分离效果不太理想，且会经过复杂的前处理过程，耗时长。cn 102608226a中介绍了一种快速测定曲或酒醅或者发酵糟中氨基甲酸乙酯的方法，采用顶空固相微萃取的方式实现固体发酵物中ec的测定。两个专利均与本发明在方法上有明显区别，且操作更复杂，耗时长，涉及的试剂用量和毒性更大。
5、糟醅作为白酒主要的发酵物，在发酵过程中会产生少量ec及其前体物，研究糟醅中ec的含量有利于分析白酒中ec的成因。因此，为了研究蒸馏酒中ec的形成机理，有必要开展酿酒发酵物中ec的定量方法研究，开发一种操作简单，经济快捷的检测糟醅中ec含量的方法。
技术实现思路
1、本发明正是基于现有技术中存在的问题，提供一种操作简单、快捷、低成本的检测糟醅中ec含量的检测方法。在该方法中，采用干糟醅试验能有效避免含水率的差异对ec检测的影响；结合gcms的选择离子模式(sim)，能有效排除其它有机化合物的干扰；利用同位素内标-标准曲线法实现定量，线性关系r2>99.99％；通过方法学验证，结果重现性良好，rsd在1.87％～3.95％，加标回收率在84.7％～93.9％，质控样准确度为97.6～100.6％，能满足检测需要。
2、为了实现以上发明的目的，本发明的技术方案为：
3、一种糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法，其采用干糟醅进行ec的检测；所述方法包括以下步骤：先利用50～70％(v/v)(更优选60％)的乙醇对干糟醅粉末进行超声提取，经离心，过滤后；向得到的上层清液中加入活性炭吸附，再经离心过滤膜后，加入内标，直接进样，用gcms的选择sim离子模式进行检测，采用内标-标准曲线法测定ec的含量。
4、作为本申请中一种较好的实施方式，在所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法中，所述的干糟醅是糟醅经自然晾干或低温烘焙去除糟醅中游离态水份得到的物质。优选自然晾干的时间为48h～72h；低温烘焙的条件为：30～40℃，12h。
5、作为本申请中一种较好的实施方式，在所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法中，所述的干糟醅粉末在进行超声提取前，需采用破壁机进行打碎，以达到样品混合均匀的目的。优选打碎后粒径为过80-200目筛，更优选为过80目筛。
6、作为本申请中一种较好的实施方式，在所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法中，干糟醅粉末进行超声提取，经离心，过滤的具体步骤为：在50ml离心管中用20ml 50～70％(v/v)(更优选为60％)的乙醇溶液浸泡3g粉碎后的干粉末糟醅，用涡旋仪充分混合均匀后置于超声装置中超声提取15min，最后在5000r/min条件下离心，过0.22～0.45μm滤膜。
7、作为本申请中一种较好的实施方式，在所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法中，活性炭的添加量为上层清液质量的3-5％，吸附为超声吸附，时间为15min；离心时取0.9ml上层清液；内标使用液的加入量为0.1ml。
8、作为本申请中一种较好的实施方式，在所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法中，所述的内标物为d5-氨基甲酸乙酯；内标使用液浓度为1.96mg/l。
9、作为本申请中一种较好的实施方式，在所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法中，利用ec标准物质配制5个浓度的梯度，取0.9ml各浓度的ec溶液，加入0.1ml的内标液，混合均匀后分别进样，建立标准曲线，获得线性关系。
10、作为本申请中一种较好的实施方式，在所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法中，gcms检测气相条件为：直接进样，进样量1μl，无分流模式；载气为氦气，纯度≥99.999％，载气流速1.0ml/min；进样口温度200℃；程序升温条件：初始温度50℃，保持时间1min,，以8℃升高至180℃，恒温2min；色谱柱选用db-innowax，30m×0.25mm×0.25μm。
11、9.根据权利7或8所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法，其特征在于，gcms的质谱检测条件为：质谱条件：离子源温度230℃；传输线温度260℃；离子源电压70ev；扫描方式：选择离子模式(sim)，氨基甲酸乙酯选择监测离子：m/z 62，d5-氨基甲酸乙酯选择监测离子：m/z 64；溶剂延迟时间11min。
12、以上所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法可用于固态酿酒发酵物中ec的提取和含量测定。
13、与现有技术相比，本发明的有益效果为：
14、(一)本方法采用干糟醅进行试验，有效解决了糟醅中含水率差异对ec检测结果的影响。
15、(二)本方法采用活性炭吸附方式降低基质干扰，并结合gcms的选择离子模式(sim)，有效排除其它有机化合物的干扰，利用同位素内标-标准曲线法实现定量，线性关系r2>99.99％；
16、(三)本方法通过方法学验证，结果重现性良好，rsd在1.87％～3.95％，加标回收率在84.7％～93.9％，质控样准确度为97.6～100.6％，能满足检测需要。
17、(四)本发明操作简单，用时短，适用性强，是一种可以推广的快捷的检测糟醅中氨基甲酸乙酯(ec)的方法。
1.一种糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法，其特征在于采用干糟醅进行ec的检测；所述方法包括以下步骤：先利用50～70％(v/v)的乙醇对干糟醅粉末进行超声提取，经离心，过滤后；向得到的上层清液中加入活性炭超声吸附，再经离心过滤膜后，加入内标，直接进样，用gcms的选择sim离子模式进行检测，采用内标-标准曲线法测定ec的含量。
2.根据权利要求1所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法，其特征在于：所述的干糟醅是糟醅经自然晾干或低温烘焙去除糟醅中游离态水份得到的物质。
3.根据权利要求1所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法，其特征在于：所述的干糟醅粉末在进行超声提取前，需采用破壁机进行打碎，粒径为80～200目。
4.根据权利要求1所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法，其特征在于，干糟醅粉末进行超声提取，经离心，过滤的具体步骤为：在50ml离心管中用20ml 50～70％(v/v)的乙醇溶液浸泡3g粉碎后的干粉末糟醅，用涡旋仪充分混合均匀后置于超声装置中超声提取15min，最后在5000r/min条件下离心，过0.22～0.45μm滤膜。
5.根据权利要求1所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法，其特征在于，活性炭的添加量为上层清液质量的3～5％，吸附为超声吸附，时间为15min；之后离心时取0.9ml上层清液；内标使用液的加入量为0.1ml。
6.根据权利要求1-5中任一所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法，其特征在于：所述的内标物为d5-氨基甲酸乙酯；内标使用液浓度为1.96mg/l。
7.根据权利要求6所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法，其特征在于，利用ec标准物质配制5个浓度的梯度，取0.9ml各浓度的ec溶液，加入0.1ml的内标液，混合均匀后分别进样，建立标准曲线，获得线性关系。
8.根据权利要求7所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法，其特征在于，gcms检测气相条件为：直接进样，进样量1μl，无分流模式；载气为氦气，纯度≥99.999％，载气流速1.0ml/min；进样口温度200℃；程序升温条件：初始温度50℃，保持时间1min，以8℃升高至180℃，恒温2min；色谱柱选用db-innowax，30m×0.25mm×0.25μm。
9.根据权利7或8所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法，其特征在于，gcms的质谱检测条件为：质谱条件：离子源温度230℃；传输线温度260℃；离子源电压70ev；扫描方式：选择离子模式(sim)，氨基甲酸乙酯选择监测离子：m/z 62，d5-氨基甲酸乙酯选择监测离子：m/z64；溶剂延迟时间11min。
10.根据权利要求9所述糟醅中氨基甲酸乙酯的检测方法，其特征在于，所述方法用于固态酿酒发酵物中ec的提取和含量测定。
