本发明属于核酸疫苗，具体涉及trna在促进mrna蛋白编码能力、提高mrna表达中的用途，特别涉及一种脂质纳米颗粒lnp共包载trna和mrna的增强型trna+mrna疫苗。
背景技术：
1、核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因（dna或rna）直接导入动物体细胞内，通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生针对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。尽管核酸疫苗的研究始于上世纪80-90年代，但2020年之前尚没有人用核酸疫苗获批上市。sars-cov-2感染显著推动了核酸疫苗的研发进程，随着sars-cov-2 mrna疫苗的广泛应用，许多与mrna和脂质纳米颗粒（lipid nanoparticles, lnp）相关的不良反应逐渐被报道，如中风，心肌梗塞，肺栓塞等，提示增强mrna的编码能力和优化lnp组分具有紧迫性。
2、蛋白质合成是细胞中最耗能的过程之一，高效的翻译对于细胞的适应性和功能至关重要。近年来，为了实现更高的蛋白质产量，研究人员对mrna进行了改造，包括筛选新的具有更高启动概率的帽结构类似物和具有更低免疫原性和更高解码能力的修饰核苷酸；优化密码子的分布和组成；优化5’utr和3’utr的二级结构、长度和序列，以达到更强的核糖体结合活性、更高的稳定性和准确的亚细胞定位；设计具有分支化化学修饰的多聚腺苷酸尾，以增强mrna的稳定性和翻译能力。此外，环状rna（circular rna，circrna）和自扩增rna（self-amplifying rna，sarna）或反式扩增rna（trans-amplifying rna）代表了下一代基于rna的疗法。然而，这些rna的设计、合成、纯化、递送及安全性评估的方法学仍有待进一步研究。总结来说，我们期望开发一种翻译加速器，以实现在相同mrna输入量的情况下产生更多的目的蛋白。
3、翻译是将mrna的遗传信息解码为蛋白质的基本过程。mrna作为翻译指令，其丰度、二级结构、密码子分布和组成等方面直接决定了蛋白质合成的效率。trna是遗传密码的主要解码者，是翻译的中心和动态组成部分。后生动物细胞的trna池是动态变化的，trna的可及性（丰度和修饰水平）以翻译依赖的方式影响mrna和核糖体，与细胞分化或增殖、对细胞压力的反应以及肿瘤转移有关。上调trna的可及性能够增加对应密码子的最优性，提高富含对应密码子的mrna的翻译速率和稳定性。trna被认为是翻译的加速器，可以赋予mrna更强的蛋白编码能力，这表明mrna与trna的联合能够作为实现蛋白质高效生产的可行性策略，称为“trna+”策略。“trna+”策略可用于所有翻译依赖的rna疗法或疫苗，能够实现在相同rna输入量的情况下产生更多的目的蛋白，从而增加rna疗法的治疗效果和rna疫苗的免疫应答效果。基于此，我们提出了一种新型的trna+mrna免疫增强型疫苗。
技术实现思路
1、针对现有技术中mrna疫苗编码能力差、表达水平低、免疫效果不佳的技术问题，本发明的目的是将翻译元件trna应用于提高蛋白的表达水平。
2、发明简述
3、本发明首次提出“trna+”策略能够增加mrna的蛋白编码能力，可作为一种增加目的蛋白产量的通用型策略。
4、本发明首次开发出一种新型的trna+mrna免疫增强型疫苗，所述的增强型疫苗是通过引入一种或多种trna分子的方式增强mrna疫苗的抗原蛋白编码能力，从而激起体内产生更强的体液免疫和细胞免疫应答。
5、本发明涉及一种脂质纳米颗粒lnp共包载trna和mrna的递送系统。本发明所用的trna分子含有第18、26、34、37、47d、46、55、58位的单点或多点组合的修饰核苷酸，具有相较于未经修饰的trna更高的氨酰化效率、更低的免疫原性和更高的解码能力。本发明所用的mrna分子含有以下单种修饰核苷酸的全替换，包括a（6me-a，z），u（psi，n1me-psi，5ome-u，3me-5ome-u），c（5me-c），g（n7me-g）。
6、本发明提出的“trna+”策略涉及一种密码子使用频率和稳定系数联合分析的方法，该方法评估了每种密码子对目的mrna稳定性的贡献值，其中得分高的密码子所对应的trna被认为能够增加目的mrna的翻译水平。所述的trna经过蛋白表达水平验证被证明能够增加目的蛋白的表达水平。
7、本发明所述的新型trna+mrna免疫增强型疫苗是通过引入一种或多种trna分子的方式增强mrna疫苗的抗原蛋白编码能力，从而激起体内产生更强的体液免疫和细胞免疫应答。trna+mrna疫苗包含三大组成要素：脂质纳米颗粒lnp（递送载体），mrna（抗原编码的模板），trna（提高抗原蛋白表达的促进剂）。
8、本发明涉及一种脂质纳米颗粒lnp共包载trna和mrna的递送系统，其特征在于trna和mrna的质量比为1:1、氮磷摩尔比为3:1、颗粒粒径在80~90 nm之间、包封率大于95%。
9、本发明涉及到编码抗原蛋白的mrna，其特征在于：所述的mrna包含以下单种修饰核苷酸的全替换，包括a（6me-a，z），u（psi，n1me-psi，5ome-u，3me-5ome-u），c（5me-c），g（n7me-g）。
10、本发明涉及到能够促进mrna翻译的单点或多点修饰的trna，其特征在于：所述的trna携带亮氨酸（leu），其包含的单点或多点的修饰核苷酸如下：第18位替换为gm（gm18）；第26位替换为m2,2g（m2,2g26）；第34位替换为m5c（m5c34）；第34位替换为cm（cm34）；第37位替换为m1g（m1g37）；第47d位替换为m3c（m3c47d）；第46位替换为m7g（m7g46）；第55位替换为ψ（ψ55）；第58位替换为m1a（m1a58）；gm18和ψ55的多点替换；m5c34和 m1g37的多点替换；cm34和m1g37的多点替换；m5c34、m1g37和m1a58的多点替换；cm34、m1g37和m1a58的多点替换；gm18、m5c34、m1g37、ψ55和m1a58的多点替换；gm18、cm34、m1g37、ψ55和m1a58的多点替换。
11、发明详述
12、本发明提供trna在促进mrna的蛋白编码能力中的用途，通过过表达trna提高目的蛋白的表达水平。还提供一种新型的trna+mrna免疫增强型疫苗，通过引入一种或多种trna分子的方式增强mrna疫苗的抗原蛋白编码能力，从而激起体内产生更强的体液免疫和细胞免疫应答。所述trna+mrna疫苗采用脂质纳米颗粒lnp递送系统；所述trna分子含有第18、26、34、37、47d、46、55、58位的单点或多点组合的修饰核苷酸，具有相较于未经修饰的trna更高的氨酰化效率、更低的免疫原性和更高的解码能力；所述mrna含有以下单种修饰核苷酸的全替换，包括a （6me-a，z），u （psi，n1me-psi，5ome-u，3me-5ome-u），c （5me-c），g（n7me-g）。所述的trna+mrna免疫增强型疫苗可应用于制备免疫效果更强的病毒mrna疫苗、肿瘤mrna疫苗，开发蛋白表达水平更高的蛋白替代mrna疗法，也可以应用于赋能其他形式的rna疗法和疫苗，例如环状rna、自复制rna等。本发明还提供一种用于生产抗体的重组细胞，所述重组细胞过表达能够提高抗体表达量的trna，所述trna包括trna isodecoder家族，优选val-trna-aac, val-trna-cac, ile-trna-aat, gln-trna-ctg。本发明还提供一种用于生产或包装重组aav的重组细胞，其特征在于所述重组细胞过表达能够提高aav包装效率的trna，所述trna包括asp-gtc-2-1, ile-aat-1-1, ile-gat-1-1, leu-taa-1-1,arg-tct-3-2。
13、具体而言：
14、一方面，本技术提供trna促进mrna蛋白编码能力或提高mrna表达的用途，其特征在于所述trna对应的密码子能够促进或提高所述mrna的稳定性。
15、进一步，本发明所述trna促进mrna蛋白编码能力或提高mrna表达的用途，其特征在于所述mrna编码抗体，优选编码单克隆抗体；所述trna提高抗体的表达量。
16、更进一步，本发明所述trna促进mrna蛋白编码能力或提高mrna表达的用途，其特征在于所述单克隆抗体由重组细胞表达，所述trna包括trna isodecoder家族，优选val-trna-aac,val-trna-cac,ile-trna-aat,gln-trna-ctg,ala-trna-agc,asn-trna-gtt,asp-trna-gtc,gly-trna-gcc,lys-trna-ctt,ser-trna-aga,ser-trna-gct,thr-trna-agt。
17、进一步，本发明所述trna促进mrna蛋白编码能力或提高mrna表达的用途，其特征在于所述mrna编码aav包装相关蛋白，优选编码aav衣壳蛋白、重组外源基因；所述trna提高重组aav病毒的包装效率。
18、进一步，本发明所述trna促进mrna蛋白编码能力或提高mrna表达的用途，其特征在于所述aav是采用两质粒系统或三质粒系统包装产生的重组aav，所述trna包括asp-gtc-2-1, ile-aat-1-1, ile-gat-1-1, leu-taa-1-1, arg-tct-3-2。
19、进一步，本发明所述trna包含选自以下的单点或多点的修饰核苷酸：trna分子上第18、26、34、37、47d、46、55、58位；并且所述的修饰核苷酸选自：gm，m2,2g，m5c，cm，m3c，m1g，m7g，ψ，m1a。
20、优选的，所述trna包含的单点或多点的修饰核苷酸选自下组：
21、（1）第18位替换为gm（gm18）；
22、（2）第26位替换为m2,2g（m2,2g26）；
23、（3）第34位替换为m5c（m5c34）；
24、（4）第34位替换为cm（cm34）；
25、（5）第37位替换为m1g（m1g37）；
26、（6）第47d位替换为m3c（m3c47d）;
27、（7）第46位替换为m7g（m7g46）；
28、（8）第55位替换为ψ（ψ55）；
29、（9）第58位替换为m1a（m1a58）；
30、（10）第18位替换为gm（gm18）+第55位替换为ψ（ψ55）；
31、（11）第34位替换为m5c（m5c34）+第37位替换为m1g（m1g37）；
32、（12）第34位替换为cm（cm34）+第37位替换为m1g（m1g37）；
33、（13）第34位替换为m5c（m5c34）+第37位替换为m1g（m1g37）+第58位替换为m1a（m1a58）；
34、（14）第34位替换为cm（cm34）+第37位替换为m1g（m1g37）+第58位替换为m1a（m1a58）；
35、（15）第18位替换为gm（gm18）+第34位替换为m5c（m5c34）+第37位替换为m1g（m1g37）+第55位替换为ψ（ψ55）+第58位替换为m1a（m1a58）；
36、（16）第18位替换为gm（gm18）+第34位替换为cm（cm34）+第37位替换为m1g（m1g37）+第55位替换为ψ（ψ55）+第58位替换为m1a（m1a58）。
37、进一步，本发明所述trna促进mrna蛋白编码能力或提高mrna表达的用途，其特征在于：所述trna携带亮氨酸；优选在seq id no:1所示leu-strna-cua的基础上包含单点或多点的修饰核苷酸，或在seq id no:2所示leu-trna-cag的基础上包含单点或多点的修饰核苷酸。
38、进一步，本发明所述trna促进mrna蛋白编码能力或提高mrna表达的用途，其特征在于所述mrna包含单一修饰核苷酸的全部替换，优选的，包括以下修饰：
39、（1）将mrna上全部的a替换为选自6me-a、z的修饰核苷酸；
40、（2）将mrna上全部的u替换为选自psi，n1me-psi，5ome-u，3me-5ome-u的修饰核苷酸；
41、（3）将mrna上全部的c替换为修饰核苷酸5me-c；
42、（4）将mrna上全部的g替换为修饰核苷酸n7me-g。
43、进一步，本发明所述trna促进mrna蛋白编码能力或提高mrna表达的用途，其特征在于所述trna与所述mrna采用了相同的递送系统，优选采用脂质纳米颗粒lnp共包载递送；
44、其中，所述trna和所述mrna的质量比为1:1、氮磷摩尔比为3:1、颗粒粒径在80~90nm之间、包封率大于95%。
45、第二方面，本发明提供trna在制备mrna疫苗中的用途，所述trna作为表达促进剂提高mrna的表达量，并且所述trna对应的密码子能够促进或提高所述mrna的稳定性；优选的，所述trna还包含选自以下的单点或多点的修饰核苷酸：trna分子上第18、26、34、37、47d、46、55、58位；并且所述的修饰核苷酸选自：gm，m2,2g，m5c，cm，m1g，m7g，ψ，m1a。
46、进一步，本发明所述trna在制备mrna疫苗中的用途，特征在于所述trna通过提高mrna的表达量，激发机体产生更强的体液免疫应答和细胞免疫应答。
47、进一步，本发明所述trna在制备mrna疫苗中的用途，其特征在于：所述trna包含的单点或多点的修饰核苷酸选自下组：
48、（1）第18位替换为gm（gm18）；
49、（2）第26位替换为m2,2g（m2,2g26）；
50、（3）第34位替换为m5c（m5c34）；
51、（4）第34位替换为cm（cm34）；
52、（5）第37位替换为m1g（m1g37）；
53、（6）第47d位替换为m3c（m3c47d）;
54、（7）第46位替换为m7g（m7g46）；
55、（8）第55位替换为ψ（ψ55）；
56、（9）第58位替换为m1a（m1a58）；
57、（10）第18位替换为gm（gm18）+第55位替换为ψ（ψ55）；
58、（11）第34位替换为m5c（m5c34）+第37位替换为m1g（m1g37）；
59、（12）第34位替换为cm（cm34）+第37位替换为m1g（m1g37）；
60、（13）第34位替换为m5c（m5c34）+第37位替换为m1g（m1g37）+第58位替换为m1a（m1a58）；
61、（14）第34位替换为cm（cm34）+第37位替换为m1g（m1g37）+第58位替换为m1a（m1a58）；
62、（15）第18位替换为gm（gm18）+第34位替换为m5c（m5c34）+第37位替换为m1g（m1g37）+第55位替换为ψ（ψ55）+第58位替换为m1a（m1a58）；
63、（16）第18位替换为gm（gm18）+第34位替换为cm（cm34）+第37位替换为m1g（m1g37）+第55位替换为ψ（ψ55）+第58位替换为m1a（m1a58）。
64、进一步，本发明所述trna在制备mrna疫苗中的用途，其特征在于：所述trna携带亮氨酸；优选在seq id no:1所示leu-strna-cua的基础上包含单点或多点的修饰核苷酸，或在seq id no:2所示leu-trna-cag的基础上包含单点或多点的修饰核苷酸。
65、进一步，本发明所述trna在制备mrna疫苗中的用途，其特征在于所述mrna包含单一修饰核苷酸的全部替换，优选的，包括以下修饰：
66、（1）将mrna上全部的a替换为选自6me-a、z的修饰核苷酸；
67、（2）将mrna上全部的u替换为选自psi，n1me-psi，5ome-u，3me-5ome-u的修饰核苷酸；
68、（3）将mrna上全部的c替换为修饰核苷酸5me-c；
69、（4）将mrna上全部的g替换为修饰核苷酸n7me-g。
70、进一步，本发明所述trna在制备mrna疫苗中的用途，其特征在于所述trna与所述mrna采用了相同的递送系统，优选采用脂质纳米颗粒lnp共包载递送；
71、其中，所述trna和所述mrna的质量比为1:1、氮磷摩尔比为3:1、颗粒粒径在80~90nm之间、包封率大于95%。
72、第三方面，本发明提供一种疫苗组合物，包括：
73、（1）mrna，所述mrna编码一个或多个抗原表位；
74、（2）trna，所述trna对应的密码子能够促进或提高所述mrna的稳定性从而能够提高mrna的表达量，优选的所述trna还包含单点或多点的修饰核苷酸；
75、以及，可选的
76、（3）递送系统。
77、进一步，本发明所述疫苗组合物，其特征在于：所述trna包含的单点或多点的修饰核苷酸选自下组：
78、（1）第18位替换为gm（gm18）；
79、（2）第26位替换为m2,2g（m2,2g26）；
80、（3）第34位替换为m5c（m5c34）；
81、（4）第34位替换为cm（cm34）；
82、（5）第37位替换为m1g（m1g37）；
83、（6）第47d位替换为m3c（m3c47d）;
84、（7）第46位替换为m7g（m7g46）；
85、（8）第55位替换为ψ（ψ55）；
86、（9）第58位替换为m1a（m1a58）；
87、（10）第18位替换为gm（gm18）+第55位替换为ψ（ψ55）；
88、（11）第34位替换为m5c（m5c34）+第37位替换为m1g（m1g37）；
89、（12）第34位替换为cm（cm34）+第37位替换为m1g（m1g37）；
90、（13）第34位替换为m5c（m5c34）+第37位替换为m1g（m1g37）+第58位替换为m1a（m1a58）；
91、（14）第34位替换为cm（cm34）+第37位替换为m1g（m1g37）+第58位替换为m1a（m1a58）；
92、（15）第18位替换为gm（gm18）+第34位替换为m5c（m5c34）+第37位替换为m1g（m1g37）+第55位替换为ψ（ψ55）+第58位替换为m1a（m1a58）；
93、（16）第18位替换为gm（gm18）+第34位替换为cm（cm34）+第37位替换为m1g（m1g37）+第55位替换为ψ（ψ55）+第58位替换为m1a（m1a58）。
94、进一步，本发明所述疫苗组合物，其特征在于：所述trna携带亮氨酸；优选在seqid no:1所示leu-strna-cua的基础上包含单点或多点的修饰核苷酸，或在seq id no:2所示leu-trna-cag的基础上包含单点或多点的修饰核苷酸。
95、进一步，本发明所述疫苗组合物，其特征在于所述mrna包含单一修饰核苷酸的全部替换，优选的，包括以下修饰：
96、（1）将mrna上全部的a替换为选自6me-a、z的修饰核苷酸；
97、（2）将mrna上全部的u替换为选自psi，n1me-psi，5ome-u，3me-5ome-u的修饰核苷酸；
98、（3）将mrna上全部的c替换为修饰核苷酸5me-c；
99、（4）将mrna上全部的g替换为修饰核苷酸n7me-g。
100、进一步，本发明所述疫苗组合物，其特征在于所述trna与所述mrna采用了相同的递送系统，优选采用脂质纳米颗粒lnp共包载递送；
101、其中，所述trna和所述mrna的质量比为1:1、氮磷摩尔比为3:1、颗粒粒径在80~90nm之间、包封率大于95%。
102、第四方面，本发明提供一种筛选增强型trna的方法，包括以下步骤：
103、（1）针对目标mrna分析密码子使用频率；
104、（2）利用密码子在转录本上出现的频率和目标mrna半衰期之间的皮尔逊相关性计算r值（r-value），即密码子使用频率与目标mrna稳定性的相关系数；
105、（3）评估每种密码子对目标mrna稳定性的贡献值，选择对目标mrna稳定性贡献值高或促进目标mrna稳定的密码子，将其对应的trna作为增强型trna。
106、进一步，本发明所述筛选增强型trna的方法，其特征在于所述增强型trna是能够促进目标mrna蛋白编码能力或提高目标mrna表达的trna。
107、第五方面，本发明提供一种用于生产抗体的重组细胞，其特征在于所述重组细胞过表达能够提高抗体表达量的trna，所述trna包括trna isodecoder家族，优选val-trna-aac,val-trna-cac,ile-trna-aat,gln-trna-ctg,ala-trna-agc,asn-trna-gtt,asp-trna-gtc,gly-trna-gcc,lys-trna-ctt,ser-trna-aga,ser-trna-gct, thr-trna-agt。
108、第六方面，本发明提供一种用于生产或包装重组aav的重组细胞，其特征在于所述重组细胞过表达能够提高aav包装效率的trna，所述trna包括asp-trna-gtc,ile-trna-aat,ile-trna-gat,leu-trna-taa,arg-trna-tct,phe-trna-gaa,leu-trna-cag,leu-trna-gag,val-trna-cac,ala-trna-agc,tyr-trna-gta,thr-trna-agt,gly-trna-gcc,pro-trna-ggg,asn-trna-att,lys-trna-ttt,glu-trna-ttc。
109、本发明的优点和有益效果：
110、本发明基于真核细胞中mrna翻译的规律，其中 trna的可及性是影响蛋白质生产效率的重要影响因素之一，并提出“trna+”策略，该策略的核心思想是：当某种trna的可及性升高时，能够促进富含同源密码子的mrna的翻译，从而增加目的蛋白的表达水平。通过密码子使用频率和稳定系数联合分析，评估了每种密码子对目的mrna稳定性的贡献，并通过蛋白表达功能实验验证筛选得到了能够促进目的蛋白表达的增效型trna。其次，通过体外转录的方式在mrna中引入修饰核苷酸，验证得到能够提高mrna的蛋白编码能力的有利修饰核苷酸类型。进一步的，借鉴了天然trna的修饰范式，评估了特定位点的特定修饰核苷酸对trna解码能力的影响，从中筛选得到了有利的修饰位点和修饰核苷酸类型。并且，通过分析trna上不同位点的核苷酸之间的相互协同作用，对不同位点的修饰核苷酸进行组合，验证筛选得到了功能更强的修饰位点和核苷酸的组合范式。最后，通过脂质纳米颗粒共包载定点修饰的trna和 sars-cov-2 spike (b.1.1.529) mrna得到trna+mrna疫苗制剂，在小鼠上评价了其体液和细胞免疫应答效果。与现有技术相比，本发明的技术方案至少具有以下有益效果：
111、第一，本发明提出的“trna+”策略经实验验证表明：过表达trna能够显著促进目的蛋白的表达水平。本发明提供一种新型的trna+mrna免疫增强型疫苗，所述增强型疫苗是通过引入一种或多种trna分子的方式增强mrna疫苗的抗原蛋白编码能力，从而激起体内产生更强的体液免疫和细胞免疫应答，表明trna+mrna是一种免疫增强型疫苗。
112、第二，本发明发现不同位点的不同修饰核苷酸对trna的解码能力会产生不同的影响。本发明所用的trna分子含有第18、26、34、37、47d、46、55、58位的单点或多点组合的修饰核苷酸，具有相较于未经修饰的trna更高的氨酰化效率、更低的免疫原性和更高的解码能力。在所有定点修饰的leu-strna-cua中，cm34能够显著增强trna的通读效率，cm34+m1g37、cm34+m1g37+m1a58、gm18+cm34+m1g37+ψ55+m1a58则进一步增强其通读效率。在所有定点修饰的leu-strna-cua中，包含cm34修饰的trna都表现出更优于m5c34修饰的trna的通读能力。在所有定点修饰的leu-trna-cag中， m1g37修饰的trna在单点修饰的trna中表现出最高的解码效率， m5c34+m1g37、cm34+m1g37、m5c34+m1g37+m1a58、cm34+m1g37+m1a58，gm18+m5c34+m1g37+ψ55+m1a58、gm18+cm34+m1g37+ψ55+m1a58则进一步增强其解码效率。在所有定点修饰的leu-trna-cag中，包含m5c34修饰的trna都表现出更优于cm34修饰的trna的解码能力。
113、第三，本发明发现不同的修饰核苷酸对mrna的蛋白编码能力会产生不同的影响。本发明所用的mrna分子含有选自以下单种修饰核苷酸的全替换，包括a（6me-a，z），u（psi，n1me-psi，5ome-u，3me-5ome-u），c（5me-c），g（n7me-g）。其中n1me-putp和putp能够显著提高mrna的蛋白编码能力，其他修饰核苷酸则减弱了mrna的编码效率，但可能在降低mrna免疫原性和提高其结构稳定性方面会有促进效果。
1.trna促进mrna蛋白编码能力或提高mrna表达的用途，所述trna对应的密码子能够促进或提高所述mrna的稳定性。
2.如权利要求1所述trna促进mrna蛋白编码能力或提高mrna表达的用途，其特征在于，所述mrna编码抗体，优选编码单克隆抗体；所述trna提高抗体的表达量。
3.如权利要求2所述trna促进mrna蛋白编码能力或提高mrna表达的用途，其特征在于，所述单克隆抗体由重组细胞表达，所述trna包括trna isodecoder家族，优选val-trna-aac,val-trna-cac,ile-trna-aat,gln-trna-ctg,ala-trna-agc,asn-trna-gtt,asp-trna-gtc,gly-trna-gcc,lys-trna-ctt,ser-trna-aga,ser-trna-gct,thr-trna-agt。
4.如权利要求1所述trna促进mrna蛋白编码能力或提高mrna表达的用途，其特征在于，所述mrna编码aav包装相关蛋白，优选编码aav衣壳蛋白、重组外源基因；所述trna提高重组aav病毒的包装效率。
5.如权利要求4所述trna促进mrna蛋白编码能力或提高mrna表达的用途，其特征在于所述aav是采用两质粒系统或三质粒系统包装产生的重组aav，所述trna包括asp-trna-gtc, ile-trna-aat, ile-trna-gat, leu-trna-taa, arg-trna-tct, phe-trna-gaa,leu-trna-cag, leu-trna-gag, val-trna-cac, ala-trna-agc, tyr-trna-gta, thr-trna-agt, gly-trna-gcc, pro-trna-ggg, asn-trna-att, lys-trna-ttt, glu-trna-ttc中的至少一种。
6.如权利要求1所述trna促进mrna蛋白编码能力或提高mrna表达的用途，其特征在于，所述trna包含选自以下的单点或多点的修饰核苷酸：trna分子上第18、26、34、37、47d、46、55、58位；并且所述修饰核苷酸选自：gm，m2,2g，m5c，cm，m1g，m3c，m7g，ψ，m1a；
7. 如权利要求1所述trna促进mrna蛋白编码能力或提高mrna表达的用途，其特征在于，所述trna携带亮氨酸；优选在seq id no:1所示leu-strna-cua的基础上包含单点或多点的修饰核苷酸，或在seq id no:2所示leu-trna-cag的基础上包含单点或多点的修饰核苷酸。
8.如权利要求1所述trna促进mrna蛋白编码能力或提高mrna表达的用途，其特征在于，所述mrna包含单一修饰核苷酸的全部替换，优选的，包括以下修饰中的至少一种：
9.如权利要求1所述trna促进mrna蛋白编码能力或提高mrna表达的用途，其特征在于，所述trna与所述mrna采用了相同的递送系统，优选采用脂质纳米颗粒lnp共包载递送；
10. trna在制备mrna疫苗中的用途，其特征在于，所述trna作为表达促进剂提高mrna的表达量，并且所述trna对应的密码子能够促进或提高所述mrna的稳定性；优选的，所述trna包含选自以下的单点或多点的修饰核苷酸：trna分子上第18、26、34、37、47d、46、55、58位；并且所述的修饰核苷酸选自：gm，m2,2g，m5c，cm，m3c，m1g，m7g，ψ，m1a。
11.如权利要求10所述trna在制备mrna疫苗中的用途，其特征在于，所述trna通过提高mrna的表达量，激发机体产生更强的体液免疫应答和细胞免疫应答。
12.一种疫苗组合物，其特征在于，包括：
13.如权利要求12所述的疫苗组合物，其特征在于，所述mrna包含单一修饰核苷酸的全部替换，优选的，包括以下修饰中的至少一种：
14.如权利要求12所述的疫苗组合物，其特征在于，所述trna包含的单点或多点的修饰核苷酸选自下组：
15.一种筛选增强型trna的方法，包括以下步骤：
16.如权利要求15所述筛选增强型trna的方法，其特征在于，所述增强型trna是能够促进目标mrna蛋白编码能力或提高目标mrna表达的trna。
17. 一种用于生产抗体的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞过表达能够提高抗体表达量的trna，所述trna包括trna isodecoder家族，优选val-trna-aac,val-trna-cac,ile-trna-aat,gln-trna-ctg,ala-trna-agc,asn-trna-gtt,asp-trna-gtc,gly-trna-gcc,lys-trna-ctt,ser-trna-aga,ser-trna-gct,thr-trna-agt中的至少一种。
18. 一种用于生产或包装重组aav的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞过表达能够提高aav包装效率的trna，所述trna包括asp-trna-gtc, ile-trna-aat, ile-trna-gat,leu-trna-taa, arg- trna-tct, phe-trna-gaa, leu-trna-cag, leu-trna-gag, val-trna-cac, ala-trna-agc, tyr-trna-gta, thr-trna-agt, gly-trna-gcc, pro-trna-ggg, asn-trna-att, lys-trna-ttt, glu-trna-ttc中的至少一种。
