本发明涉及生物工程，具体涉及一种3d细胞nash药物筛选模型及应用。
背景技术：
1、临床前实验所用的nash模型应能够合理地重复模拟临床上观察到的各种疾病表型，如肥胖、胰岛素抵抗、肝脏脂肪堆积等的发病机制，同时需要具有nash的具体特征，包括肝脂肪变性、气球样变、小叶炎症及纤维化。现有技术中，一般采用动物模型或单一细胞模型作为nash模型，进行药物的筛选。
2、对于现有的动物模型，由于啮齿类动物在基因表型上与人类不同，导致在小鼠上成功实验的药物，在进入临床研究时则无药效，且小鼠的实验成本高、实验周期长以及不便于大规模培养等诸多问题，限制了其在高通量药物筛选上的应用。
3、目前绝大多数体外肝脏nash模型仍然通过使用2d细胞培养，通常采用2d细胞模型进行nash病理发展的模拟和药物的筛选，能够以更低的耗费及更高的效率进行药物筛。但是，同时也存在很多不足，比如缺乏细胞因子等细胞功能的关键因素，缺少细胞-细胞相互作用和空间结构，从而影响药物在体外筛选的准确性。而新型的3d细胞培养技术能在一定程度上克服这些困难。但是构建和制备3d细胞模型，特别是类器官模型，通常需要复杂的实验步骤和技术。这不仅需要特殊的细胞培养方法、生物材料的选择和处理、支架或基质的构建等，还涉及多个步骤和参数的控制，因此容易受到实验条件和实验人员技术水平的影响。除此之外，大部分3d细胞模型需要更多的资源和时间来完成制备和维护的操作。这涉及到更多的细胞、培养基、生物材料和设备，以及更长的培养时间，增加了实验的成本和时间投入。不仅如此，由于3d细胞模型的制备过程较为复杂，缺乏统一的标准化方法和准确的质量评估指标，使得不同实验室之间的结果难以对比和重复。这使得实验人员在使用3d细胞模型时面临着一定的困惑和挑战。最后，由于3d细胞模型的制备过程中存在多个变量和参数，如细胞类型、生物材料、支架结构等，导致模型之间存在很大的变异性和异质性。这使得对于模型的一致性和可靠性的评估变得更加困难。因此，如何解决目前3d模型中存在的一系列问题，开发应用这个具有巨大潜力的模型，是工程应用上亟待解决的问题。目前已经提出多种体外3d细胞模型，但均存在无法高通量筛选、筛选结果差和模型构建费用高等一系列问题。
技术实现思路
1、针对现有技术的上述不足，本发明提供了一种能够实现高通量筛选，且模型构建简单，用于筛选时，结果准确有效的3d细胞nash药物筛选模型及应用。
2、为达到上述发明目的，本发明所采用的技术方案为：
3、提供一种3d细胞nash药物筛选模型，其采用肝实质细胞l02和肝星状细胞lx2进行共培养并使用棕榈酸和油酸制备的诱导液进行诱导构建得到；
4、所述诱导液的制备方法为：
5、a1：向棕榈酸中添加水和无水乙醇，混匀，加入油酸后加热，使油酸溶解；
6、a2：将混合物中加入10mm氢氧化钠溶液，混匀后再加入10％的bsa牛血清白蛋白溶液；
7、a3：使用0.22μm滤膜过滤后，液相即为诱导液。
8、进一步的，所述诱导液中，棕榈酸与水和无水乙醇的比例为5.25～17mg∶0.5ml∶0.5ml；棕榈酸和油酸的质量比为1∶2～2∶1；且氢氧化钠溶液与水的体积比为1∶25；bsa溶液与水的体积比为18∶1。
9、进一步的，3d细胞nash药物筛选模型的构建方法具体为：
10、s1：将肝实质细胞l02和肝星状细胞lx2按24∶1的比例接种在吸附孔板上，添加培养基后培养48h-144h；
11、s2：对培养好成球的细胞组织使用含诱导液的培养基进行诱导，诱导时间为24h-72h，即可得到3d细胞nash药物筛选模型。
12、进一步的，步骤s1中接种的细胞量为1000～5000个。
13、进一步的，步骤s1中培养基的用量为200μl。
14、进一步的，对培养好成球的细胞组织进行诱导前，将吸附孔板内剩余的培养基吸出，并使用pbs缓冲液冲洗1-2次后，再添加含诱导液的培养基。
15、进一步的，含诱导液的培养基中诱导液的含量为500μm-750μm。
16、进一步的，含诱导液的培养基中诱导液的含量为750μm。
17、上述的3d细胞nash药物筛选模型在nash潜在药物筛选中的应用。
18、本发明的有益效果为：
19、本发明提供了一种构建过程简单，材料简单，便于在各个实验室中推广的体外3d细胞模型，不仅能够统一细胞模型的标准，而且还能最大程度上模拟人体内的nash病理真实环境，能够实现高通量nash药物筛选，在对nash药物的筛选过程中，具有良好的准确性。
1.一种3d细胞nash药物筛选模型，其特征在于，采用肝实质细胞l02和肝星状细胞lx2进行共培养并使用棕榈酸和油酸制备的诱导液进行诱导构建得到；
2.根据权利要求1所述的3d细胞nash药物筛选模型，其特征在于，所述诱导液中，棕榈酸与水和无水乙醇的比例为5.25～17mg∶0.5ml∶0.5ml；棕榈酸和油酸的质量比为1∶2～2∶1；且氢氧化钠溶液与水的体积比为1∶25；bsa溶液与水的体积比为18∶1。
3.根据权利要求1所述的3d细胞nash药物筛选模型，其特征在于，所述3d细胞nash药物筛选模型的构建方法具体为：
4.根据权利要求3所述的3d细胞nash药物筛选模型，其特征在于，步骤s1中接种的细胞量为1000～5000个。
5.根据权利要求3所述的3d细胞nash药物筛选模型，其特征在于，步骤s1中培养基的用量为200μl。
6.根据权利要求3所述的3d细胞nash药物筛选模型，其特征在于，对培养好成球的细胞组织进行诱导前，将吸附孔板内剩余的培养基吸出，并使用pbs缓冲液冲洗1-2次后，再添加含诱导液的培养基。
7.根据权利要求6所述的3d细胞nash药物筛选模型，其特征在于，含诱导液的培养基中诱导液的含量为500μm-750μm。
8.根据权利要求7所述的3d细胞nash药物筛选模型，其特征在于，含诱导液的培养基中诱导液的含量为750μm。
9.权利要求1-8任一所述的3d细胞nash药物筛选模型在nash潜在药物筛选中的应用。
