本发明属于生物医药技术和医疗美容领域，涉及一种巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物及其制备方法与应用。
背景技术：
1、透明质酸(hyaluronic acid)是一种直链高分子糖胺聚糖，由n-乙酰葡萄糖胺和d-葡萄糖酸组成。透明质酸是动物细胞外基质的主要组成成分，广泛分布在人体的结缔、上皮和神经组织中，具有调控细胞信号、伤口愈合和基质形成等多种生物活性。透明质酸无种属差异性、无免疫原性，具有好的生物相容性、生物降解性、粘弹性，以及极高的亲水性和保水性，因此具有很高的医用价值。近年来，随着对透明质酸功能的深入研究，透明质酸已经被广泛应用于生物医药和医疗美容领域，包括用于制备药物传递系统、治疗骨科疾病和眼科疾病、预防手术后粘连及真皮层填充等。目前市场上透明质酸相关产品所用的原料通常来源于动物组织(如鸡冠、眼玻璃体、脑软骨关节液)提取或细菌(如链球菌、绿脓杆菌等)发酵。透明质酸的平均分子量一般在5kda到10mda之间，常见的分子量大小范围为20kda到4.0mda。
2、尽管天然存在的透明质酸或其钠盐展现出广泛的应用范围和明显的优势，它在的临床应用具有一定的局限性。非交联度透明质酸在体内易被透明质酸酶降解，同时，其高流动性使其在组织中容易被分散，随后被吸收、代谢。因此，非交联透明质酸在体内降解迅速，半衰期通常不超过七天。因而，制备透明质酸凝胶、实现其分子间交联可以一定程度上低透明质酸流动性、提高机械强度，从而延缓其在体内的降解吸收。
3、化学交联的方式被广泛应用在透明质酸凝胶的制备过程中，包括1,4-丁二醇二缩水甘油醚(1,4-butanediol diglycidyl ether，bdde)、二乙烯基砜(divinyl sulfone，dvs)等，例如us5827937a公开的使用bdde作为交联剂制备的透明质酸交联凝胶产品获美国fda批准以商品名上市，并在全球范围内作为组织增强填充剂使用。然而，但这些交联剂难以在终端产品中被清除干净，可能引发多种毒副反应，使用存在安全隐患；并且，在交联反应过程中，小分子交联剂在溶液中很难保持浓度均匀，因此使不能在制备过程中很好的调节交联度和凝胶强度。
4、为避免交联反应中添加额外化学物质而带来的毒副作用，开发交联机制更优的新透明质酸材料是一种具有良好前景的策略。近年来，有多种基于功能化透明质酸的具有新型的交联机制的凝胶产品被开发，包括通过二硫键、亚胺基、半缩硫醛等交联的透明质酸凝胶产品。例如cn108084461b公开了巯基化透明质酸的合成方法及用于形成二硫键交联透明质酸凝胶的实例，cn113929792b公开了一种醛基化修饰的透明质酸(钠)及其合成方法，该功能化透明质酸可以与含氨基或酰肼基的生物材料发生席夫碱缩合反应形成亚胺基交联的水凝胶。cn110128682a公开了一种巯基-醛基交联水凝胶材料，通过半缩硫醛键进行初步交联，可通过加入含有氨基的生物材料进一步通过希夫碱反应进行交联。目前，这些新型的交联透明质酸凝胶仍然存在化学修饰效率低、交联化学键稳定性差等问题，尚未被广泛应用。其他的交联机制包括物理交联、热交联等，例如prophilo是第一个用于治疗皮肤松弛症的、不使用化字交联剂的注射用遊明质酸产品，生产过程中不添加外源性交联剂，而是通过热能交联，副作用较小；cn115869250公开了一种注射用透明质酸或透明质酸钠组合物，通过高分子量透明质酸或透明质酸钠与中和/或低分子量透明质酸或透明质酸钠配制来制备获得低粘度的注射液。但这些交联手段得到透明质酸凝胶/溶液产品在体内维持时间仍然较短，可能导致疗程长、注射次数多、治疗成本居高不下。
5、在实际应用中，交联透明质酸凝胶产品因具有较大的凝胶强度，推挤力大、注射性差，不便于使用；同时，注射时会机械性挤压可能破坏聚合物的非交联位点，使材料变得更易受到体内生化和酶的攻击，从而加速凝胶的降解，进一步影响使用。为解决这一问题，加入非交联成分润滑、或将凝胶造粒均为效果良好的策略。例如由交联透明质酸与非交联透明质酸混合均质制备而成的物理混合双相凝胶能够降低凝胶挤推力，如等，可用于面部填充或关节炎的增粘治疗；cn 117298355 a公开了一种包裹性透明质酸凝胶组合物，由二硫键交联透明质酸凝胶和非交联透明质酸溶液团组成，易于推挤和注射。然而，现有的双相凝胶仍然存在凝胶的交联度、强度不易调节，稳定性差等问题。因此，本领域亟需一种新的透明质酸凝胶产品，兼具安全性良好、便于注射、稳定性好、强度和粘度可调节程度高的优点，以满足生物医疗领域应用的实际需要。
技术实现思路
1、透明质酸凝胶在临床使用时可能会面临一些挑战，例如推挤困难或甚至可能出现爆针的情况。此外，类似凝胶产品还需要在有效期内保持其稳定性和所足够的粘度稳定性和弹性模量，同时具有良好的安全性。
2、为了解决现有技术中存在的技术问题，本发明提供了以下的技术方案：
3、本发明提供了一种巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物，所述巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物包括：巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒和非交联透明质酸溶液；巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒均匀分散于非交联透明质酸溶液中；非交联透明质酸溶液的透明质酸含量为5mg/ml～150mg/ml；巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒的透明质酸含量为5～150mg/ml。
4、进一步，所述巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒的透明质酸含量为10mg/ml～40mg/ml。
5、进一步，所述非交联透明质酸溶液的透明质酸含量为10mg/ml～40mg/ml。
6、在一些实施方案中，所述巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒的透明质酸含量为5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml、11mg/ml、12mg/ml、13mg/ml、14mg/ml、15mg/ml、16mg/ml、17mg/ml、18mg/ml、19mg/ml、20mg/ml、21mg/ml、22mg/ml、23mg/ml、24mg/ml、25mg/ml、26mg/ml、27mg/ml、28mg/ml、29mg/ml、30mg/ml、31mg/ml、32mg/ml、33mg/ml、34mg/ml、35mg/ml、36mg/ml、37mg/ml、38mg/ml、39mg/ml、40mg/ml、41mg/ml、42mg/ml、43mg/ml、44mg/ml、45mg/ml、46mg/ml、47mg/ml、48mg/ml、49mg/ml、50mg/ml。在一些实施方案中，所述非交联透明质酸溶液的透明质酸含量为5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml、11mg/ml、12mg/ml、13mg/ml、14mg/ml、15mg/ml、16mg/ml、17mg/ml、18mg/ml、19mg/ml、20mg/ml、21mg/ml、22mg/ml、23mg/ml、24mg/ml、25mg/ml、26mg/ml、27mg/ml、28mg/ml、29mg/ml、30mg/ml、31mg/ml、32mg/ml、33mg/ml、34mg/ml、35mg/ml、36mg/ml、37mg/ml、38mg/ml、39mg/ml、40mg/ml、41mg/ml、42mg/ml、43mg/ml、44mg/ml、45mg/ml、46mg/ml、47mg/ml、48mg/ml、49mg/ml、50mg/ml、60mg/ml、70mg/ml、80mg/ml、90mg/ml、100mg/ml、110mg/ml、120mg/ml、130mg/ml、140mg/ml、150mg/ml。
7、进一步，所述巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒的透明质酸原料的分子量为50kda～6000kda。
8、进一步，所述巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒的透明质酸原料的分子量为100kda～4000kda。
9、进一步，所述非交联透明质酸溶液的透明质酸原料的分子量为50kda～6000kda。
10、进一步，所述非交联透明质酸溶液的透明质酸原料的分子量为100kda～4000kda。
11、在一些实施方案中，所述巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒的透明质酸原料的分子量为50kda、100kda、200kda、220kda、300kda、400kda、500kda、600kda、700kda、800kda、900kda、1000kda、1500kda、2000kda、2500kda、3000kda、3500kda、4000kda、4500kda、5000kda、5500kda、6000kda。在一些实施方案中，所述非交联透明质酸溶液的透明质酸原料的分子量为50kda、100kda、200kda、300kda、400kda、500kda、600kda、700kda、800kda、900kda、1000kda、1500kda、2000kda、2500kda、3000kda、3500kda、4000kda、4500kda、5000kda、5500kda、6000kda。
12、进一步，所述巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒的粒径为10μm～500μm。
13、在一些实施方案中，所述巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒的粒径为10μm、20μm、30μm、40μm、50μm、60μm、70μm、80μm、90μm、100μm、150μm、200μm、250μm、300μm、350μm、400μm、450μm、500μm。
14、进一步，所述巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物中非交联透明质酸溶液的重量占比为10％-90％。
15、进一步，所述巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物中非交联透明质酸溶液的重量占比为10％-50％。
16、进一步，所述巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物中巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒的重量占比为10％-90％。
17、在一些实施方案中，所述巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物中非交联透明质酸溶液的重量占比为10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％。在一些实施方案中，所述巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物中巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒的重量占比为10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％。
18、进一步，所述巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒通过透明质酸乙烯化衍生物ha-a和透明质酸巯基化衍生物ha-sh交联后过筛造粒形成。
19、进一步，所述ha-sh的巯基取代度为5％～80％。
20、在一些实施方案中，所述ha-sh的巯基取代度为5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％。
21、进一步，所述ha-a的乙烯基取代度为5％～30％。
22、在一些实施方案中，所述ha-a的乙烯基取代度为5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％。
23、进一步，所述巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒中ha-sh(透明质酸巯基化衍生物)与ha-a(透明质酸乙烯化衍生物)的质量比为1:5～5:1。
24、进一步，所述ha-sh的巯基取代度为10％～40％。
25、进一步，所述ha-a的乙烯基取代度为10％～25％。
26、进一步，所述ha-sh包括半胱氨酸、胱氨、胱氨酸二甲酯或其他含有巯基的化合物修饰的透明质酸或透明质酸钠。
27、进一步，所述ha-a包括丙烯酸酯类修饰的透明质酸或透明质酸钠。
28、在一些实施方案中，所述巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物中，含有巯基的透明质酸衍生物可通过透明质酸的巯基化改性制备，也包括各种透明质酸衍生物(如羧甲基透质酸、乙酰化透明质酸及其钠盐、钾盐等)进一步过改性所制备的巯基化衍生物，例如中国专利cn113943382a、cn103724455b、cn103113495a等在先文件所公开的多种透明质酸巯基化衍生物制备方法均可用于制备本发明所述的透明质酸凝胶复合物。
29、在一些实施方案中，所述巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物中，含有乙烯的透明质酸衍生物可通过透明质酸的乙烯基化改性制备，也包括各种透明质酸衍生物(如羧甲基透质酸、乙酰化透明质酸及其钠盐、钾盐等)进一步过改性所制备的乙烯基化衍生物，例如中国专利cn103613686b、cn104892962a、cn 108084461a等在先文件所公开的多种透明质酸巯乙烯基衍生物制备方法均可用于制备本发明所述的透明质酸凝胶复合物。
30、进一步，所述透明质酸还包括透明质酸的可药用盐。
31、进一步，所述可药用盐包括酸加成盐、碱加成盐。
32、进一步，所述酸加成盐包括但不限于fty720的盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、磷酸盐、硫酸盐、硝酸盐、乙磺酸盐、甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐和水杨酸盐、丙二酸盐、己二酸盐、己酸盐、精氨酸盐、富马酸盐、烟酸盐、邻苯二甲酸盐或草酸盐中的任意一种或至少两种的组合。
33、进一步，所述碱加成盐包括但不限于fty720的锂盐、钠盐、钾盐、钡盐、钙盐、镁盐、铝盐、铁盐、亚铁盐、铜盐、锌盐，或fty720与吗啉、二乙胺、三乙胺、异丙胺、三甲胺、赖氨酸或组胺酸组成的盐。
34、进一步，所述可药用盐从酸中获得，所述酸包括有机酸或无机酸。
35、进一步，所述无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸。
36、进一步，所述有机酸如甲酸、乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖苷酸(pyranosidyl acid)、α-羟基酸如柠檬酸或酒石酸、氨基酸、芳香酸、磺酸。
37、进一步，所述可药用盐包括碱加成盐，具体地包括碱金属盐(如钠盐、钾盐等)及碱土金属盐(如钙盐、镁盐等)等。
38、进一步，所述巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物还包括药学上可接受的辅料。
39、进一步，所述辅料包括赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、增味剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、稳定剂、等渗剂、ph调节和/或缓冲剂、溶剂、表面活性剂或乳化剂。
40、进一步，所述巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物通过口服施用、栓剂施用、病灶周围施用、病灶表面施用、局部点用、角膜基质注射施用、结膜下注射施用、静脉施用、肠胃外施用、腹腔施用、肌肉施用、病灶内施用、鞘内施用、鼻内施用或皮下施用。
41、进一步，所述巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物还包含药物，所述药物选自抗-细胞凋亡剂、有丝分裂抑制剂、免疫调节剂、用于基因疗法的核酸、烷化剂、抗-血管生成剂、抗-代谢物、含硼剂、化疗保护剂、激素剂、抗-激素剂、抗病毒药物、光敏治疗剂、寡核苷酸、放射性核素剂、放射致敏剂、拓扑异构酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、抗生素药物。
42、进一步，所述放射性核素剂包括131i、32p、89sr、90y、223ra、125i、103pd。
43、进一步，所述烷化剂包括双氯乙基甲胺、苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、溴丙哌嗪、松龙苯芥、磷雌氮芥、环磷酰胺、六甲密胺、异磷酰胺、福替目丁、三胺硫磷、卡氮芥、链唑霉素、英丙舒凡、氮烯咪胺、顺铂、奥沙利铂、卡铂。
44、进一步，所述抗代谢物包括甲氨喋呤、5-氟脲嘧啶、氟苷、5-氟脱氧尿嘧啶、卡培他滨、阿糖胞苷、氟达拉滨、6-巯基嘌呤、2-氯脱氧腺苷、5-氮杂胞苷、2，2-二氟脱氧胞嘧啶核苷、克拉屈滨、脱氧柯福霉素、喷司他丁。
45、进一步，所述有丝分裂抑制剂包括紫杉萜、长春碱、紫杉醇、长春新碱、长春酰胺、长春瑞滨。
46、进一步，所述抗-血管生成剂包括普啉司他、坦诺司他、伊洛马司他、丙亚胺、马马司他、巴马司他、cgs-27023a、溴氯哌喹酮、col-3、新伐司他、bms-275291、沙立度胺。
47、进一步，所述抗-激素剂包括托瑞米芬、雷洛昔芬、它莫西芬、阿纳托唑、来曲唑、屈洛昔芬、奥多昔芬、依西美坦、尼鲁米特、比卡鲁胺、安体舒通、氟他米特、非那司提、醋酸环丙氯地孕酮、西咪替丁。
48、进一步，所述免疫调节剂包括白介素、肿瘤坏死因子、干扰素、蘑菇多糖、西佐糖、罗喹美克、匹多莫特、甲氧聚乙二醇琥珀酰胺腺甙脱氨酶、胸腺肽制剂。
49、进一步，所述抗生素药物包括头孢菌素类，喹诺酮类和荧光喹诺酮类，青霉素类，青霉素类，β-内酰胺酶抑制剂，氨基糖苷类钝化酶，单菌胺类，大环内酯类，林可胺类，糖肽类，利福平，噁唑烷酮类，四环素类，氨基糖苷类，链阳菌素类，磺胺类，柔红霉素，阿霉素，去甲氧正定霉素，光神霉素，丝裂霉素c，戊柔比星，盐酸米托蒽醌，博来霉素，更生霉素，光辉霉素，甲基苄肼。
50、进一步，所述抗病毒药物包括阳离子类固醇抗微生物药、亮抑酶肽、抑蛋白酶肽、金刚烷胺、金刚乙胺、奥司他韦、扎那米韦、利巴韦林或干扰素-α2b。
51、进一步，所述激素剂包括泼尼松类、甲泼尼松龙类、倍他米松类、泼尼松龙类、氢化可的松类、可的松类、地塞米松类。
52、进一步，所述巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物需灌装、灭菌。
53、在一些实施方案中，本发明提供的巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物中巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒均匀分散于非交联透明质酸溶液中。当这种凝胶在使用时，非交联透明质酸溶液作为外相，增加了凝胶颗粒的润滑性，从而降低了凝胶的推挤力。而交联透明质凝胶微粒的存在则增加了凝胶的粘度稳定性和弹性模量，同时微粒团在注射时能够发生破裂和形变，不会阻碍推挤。这种设计使得透明质酸凝胶更容易在临床使用中操作，并且能够保持所需的特性。
54、在一些实施方案中，所述巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物根据不同临床适应症，可以直接灌装于容器中，容器为各种管制器具，包括注射器。
55、本发明提供了一种前面所述巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶复合物的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
56、ha-a和ha-sh分别溶于缓冲液中得到溶液a和溶液b，将溶液a和溶液b混合，得到巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶，巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶过筛得到巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒，将巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒均匀分散在非交联透明质酸溶液中，得到最终的巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶复合物。
57、进一步，所述缓冲液为磷酸一氢钠、磷酸二氢钠、磷酸盐缓冲液中的任意一种的水溶液或几种的混合溶液。
58、进一步，所述缓冲液的ph值为6-9。
59、在一些实施方案中，所述缓冲液的ph值为6、6.5、7、7.5、8、8.5、9。
60、进一步，所述缓冲液的渗透压为280mosm/l～320mosm/l。
61、在一些实施方案中，所述缓冲液的渗透压为280mosm/l、290mosm/l、300mosm/l、310mosm/l、320mosm/l。
62、进一步，所述溶液a和溶液b的ph值为5-9。
63、进一步，所述溶液a和溶液b的ph值为6-8。
64、在一些实施方案中，所述溶液a和溶液b的ph值为5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9。
65、进一步，所述溶液a和溶液b的浓度为1％-10％。
66、进一步，所述溶液a和溶液b的的浓度为2％-4％。
67、在一些实施方案中，所述溶液a和溶液b的的浓度为1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％。
68、进一步，所述溶液a和溶液b混合后进行交联步骤，交联时间为3min-240min。
69、进一步，所述溶液a和溶液b混合后进行交联步骤，交联时间为10min-120min。
70、在一些实施方案中，所述溶液a和溶液b混合后进行交联步骤，交联时间为3min、5min、10min、20min、30min、40min、50min、60min、70min、80min、90min、100min、110min、120min、130min、140min、150min、160min、170min、180min、190min、200min、210min、220min、230min、240min。
71、进一步，所述溶液a和溶液b混合后进行交联步骤，交联温度为0℃～60℃。
72、进一步，所述溶液a和溶液b混合后进行交联步骤，交联温度为25℃～37℃。
73、在一些实施方案中，所述溶液a和溶液b混合后进行交联步骤，交联温度为0℃、5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、37℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃。
74、进一步，巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶过筛得到巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒包括以下步骤：
75、巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶通过一个或多个筛网进行凝胶的破碎。
76、进一步，所述筛网的数量为2-10个。
77、进一步，所述筛网的数量为3-5个。
78、在一些实施方案中，所述筛网的数量为2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个。
79、进一步，所述筛网的网眼大小相同。
80、进一步，所述筛网的网眼大小不同。
81、进一步，所述巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶按照大网眼筛网到小网眼筛网的顺序通过筛选。
82、进一步，所述按照大网眼筛网到小网眼筛网的顺序排列的相邻筛网之间的网眼差异为1％-500％。
83、进一步，所述按照大网眼筛网到小网眼筛网的顺序排列的相邻筛网之间的网眼差异为20％-80％。
84、在一些实施方案中，所述按照大网眼筛网到小网眼筛网的顺序排列的相邻筛网之间的网眼差异为1％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、250％、300％、350％、400％、450％、500％。
85、进一步，所述筛网的网眼直径为30-500μm。
86、进一步，所述筛网的网眼直径为50-200μm。
87、在一些实施方案中，所述筛网的网眼直径为30μm、40μm、50μm、60μm、70μm、80μm、90μm、100μm、110μm、120μm、130μm、140μm、150μm、160μm、170μm、180μm、190μm、200μm、250μm、300μm、350μm、400μm、450μm、500μm。
88、进一步，所述将巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒均匀分散在非交联透明质酸溶液中包括如下步骤：
89、通过机械搅拌的方法使巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒在非交联透明质酸溶液中混合均匀，所述机械搅拌的搅拌转速为50-3000rpm，搅拌时间为5-120min。
90、进一步，所述机械搅拌的搅拌转速为1000-2000rpm。
91、进一步，所述搅拌时间为20-40min。
92、在一些实施方案中，所述机械搅拌的搅拌转速为50rpm、100rpm、200rpm、300rpm、400rpm、500rpm、600rpm、700rpm、800rpm、900rpm、1000rpm、1100rpm、1200rpm、1300rpm、1400rpm、1500rpm、1600rpm、1700rpm、1800rpm、1900rpm、2000rpm。在一些实施方案中，所述搅拌时间为5min、10min、15min、20min、25min、30min、35min、40min、50min、60min、70min、80min、90min、100min、110min、120min。
93、本发明提供了前面所述的巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物，或前面所述的制备方法在制备外科防粘连、骨性关节炎增粘治疗、软组织填充与增强、真皮层注射改善肤质的产品中的应用。
94、本文中使用的术语“抗生素药物”应指用于治疗，预防，或其他减轻任何细菌病症或任何其并发症，包括由此产生和/或本文所述的任何疾患，疾病或并发症的任何药物。
95、本文中使用的术语“抗病毒药物”指用来治疗、预防或减轻受试者中病毒性感染的任何抗感染药物或疗法。
96、本文中使用的术语“糖皮质激素”又名肾上腺皮质激素，主要是由肾上腺皮质分泌的一类甾体激素，糖皮质激素不仅包括内源性物质，还包括很多经过结构优化人工合成药物。
97、本发明中使用的术语“药学上可接受的辅料”是指可接受的稀释剂、载体、赋形剂以及稳定剂为在所采用的剂量和浓度下对接受者无毒的那些，并且包括缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐以及其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁基或苄基醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇以及间甲酚)；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天门冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖以及其它碳水化合物类，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如edta；糖类，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐反离子，诸如钠；金属络合物(例如zn-蛋白络合物)；和/或非离子型表面活性剂，诸如tweentm、pluronicstm或聚乙二醇(peg)。活性药物成分还可例如通过凝聚技术或通过界面聚合包裹在所制备的微胶囊中，分别例如羟基甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊；包裹在胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球体、微乳液、纳米颗粒以及纳米胶囊)或粗乳液中。
98、在本发明使用的术语“可药用盐”在被施用的量和浓度下是无毒的。在不阻止其发挥生理效应的情况下，通过改变化合物的物理特性，这样的盐的制备可以便于药理学应用。
99、本发明的优点和有益效果：
100、本发明提供一种可注射巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶复合物，由巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒和非交联透明质酸溶液组成，同时具有以下明显优势和创新性：1)不需要额外添加交联剂，安全性良好；2)粘度、强度调节灵活，高度可控；2)易推挤和注射，便于使用。
1.一种巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物，所述巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物包括：巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒和非交联透明质酸溶液；巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒均匀分散于非交联透明质酸溶液中；非交联透明质酸溶液的透明质酸含量为5mg/ml～150mg/ml；巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒的透明质酸含量为5～150mg/ml。
2.如权利要求1所述的巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物，所述巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒的透明质酸含量为10mg/ml～40mg/ml；
3.如权利要求1所述的巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物，所述巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒通过透明质酸乙烯化衍生物ha-a和透明质酸巯基化衍生物ha-sh交联后过筛造粒形成；
4.如权利要求1所述的巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物，所述巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物还包括药学上可接受的辅料；
5.一种权利要求1-4任一项所述巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶复合物的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
6.如权利要求5所述的制备方法，所述缓冲液为磷酸一氢钠、磷酸二氢钠、磷酸盐缓冲液中的任意一种的水溶液或几种的混合溶液；
7.如权利要求5所述的制备方法，所述溶液a和溶液b混合后进行交联步骤，交联时间为3min-240min；
8.如权利要求5所述的制备方法，巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶过筛得到巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒包括以下步骤：
9.如权利要求5所述的制备方法，所述将巯基-乙烯基交联透明质酸凝胶微粒均匀分散在非交联透明质酸溶液中包括如下步骤：
10.权利要求1-4任一项所述的巯基-烯交联透明质酸凝胶复合物，或权利要求5-9任一项所述的制备方法在制备外科防粘连、骨性关节炎增粘治疗、软组织填充与增强、真皮层注射改善肤质的产品中的应用。
