本发明属于分子生物学dna标记，具体涉及一种禾花鲤三碱基重复微卫星位点及引物。
背景技术：
1、禾花鲤又名又名禾花乌鲤、禾花鱼和乌鲤，原产于广西桂西北地区，因以稻田禾花为食而称禾花鱼，属于中国土著鱼类，皮薄肉嫩无腥味，集美食与观赏于一体，是极具地方特色的一种优质养殖品种。禾花鲤因味道鲜甜，肉质细嫩，品质高，深受广大养殖者和消费者的欢迎，是当地发展农村经济一条重要途径和主导产业，也为当地水产养殖业的发展，特别是提高山区农户经济收入做出了重要的贡献。目前，有些地区的禾花鲤出现种质退化和资源混杂现象，严重影响了其种质质量及经济效益。因此，为保证该产业的可持续发展和维护地方种质资源品质，对其开展遗传选育工作已是势在必行。
2、微卫星标记具有分布广泛、多态性信息高、共显性、符合孟德尔分离规律、易于pcr扩增、再现性好等优点，已经被广泛应用于水产生物的遗传连锁图谱构建和遗传育种等领域。三碱基重复微卫星标记在应用和操作上具有一些独特的优势。人们在对水稻基因组中微卫星dna序列的分析中，得出在蛋白质编码区有较多三碱基重复微卫星dna序列的结论(temnykh et al,2001)；另外有研究表明香港牡蛎基因组中三碱基重复微卫星标记与功能基因的相关性明显高于两碱基重复微卫星标记(ma et al,aquaculture)，因此三碱基重复微卫星标记在基因定位、遗传育种等方面更有优势。因此需要针对禾花鲤筛选三碱基重复微卫星标记用于遗传育种相关的遗传分析。
技术实现思路
1、本发明目的是提供禾花鲤的三碱基重复微卫星位点及多态性引物，即提供2个稳定性高、特异性强的禾花鲤三碱基重复微卫星位点，以及相应的多态性微卫星引物，为禾花鲤遗传育种提供有效的工具。
2、本发明解决技术问题的技术方案：禾花鲤三碱基重复微卫星位点dna分子标记，包括构建禾花鲤三碱基重复微卫星(cat)16、(aca)16富集文库，筛选禾花鲤多态性微卫星引物及利用20个禾花鲤野生个体对这些三碱基重复微卫星位点进行遗传多态性检测，确定了禾花鲤2个多态性丰富的三碱基重复微卫星标记：ccr201、ccr202，其核苷酸序列分别为seqid no.1-no.2。
3、因此，本发明第一个目的是提供了禾花鲤三碱基重复微卫星dna分子标记，所述的禾花鲤三碱基重复微卫星dna分子标记为ccr201或ccr202，所述的ccr201的核苷酸序列分别为seq id no.1所示，所述的ccr202的核苷酸序列如seq id no.2所示。
4、本发明的第二个目的是提供一种禾花鲤群体遗传结构分析和分子标记辅助育种的引物组，其包括：
5、f：gtcgctatcctcatcagaaac，r：ggcatgacacctcaaagaa；
6、或f：gctatttgactacagcgcaa，r：gaccggacacctaaacaatatg。
7、本发明的第三个目的是提供一种禾花鲤群体遗传结构分析和分子标记辅助育种的试剂盒，其包括上述引物组。
8、本发明的第四个目的是提供上述禾花鲤三碱基重复微卫星dna分子标记、引物组或试剂盒在禾花鲤群体遗传结构分析和分子标记辅助育种中的应用。
9、本发明的第五个目的是提供一种禾花鲤群体遗传结构分析和分子标记辅助育种的方法，其是提取待测样品的基因组dna，然后用上述引物组进行pcr扩增，pcr产物用毛细管电泳进行分型并确定条带大小。
10、优选，所述的pcr扩增，其反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，变性至延伸三个步骤重复25次，72℃延伸10min。
11、优选，所述的pcr扩增，其反应体系为25ul，包括dna模板30ng，buffer 10mm，引物各0.2mm，dntp 0.2mm，mg2+2.0mm，taq dna聚合酶1u，用灭菌水补足25μl。
12、本发明提供了2个禾花鲤的三碱基重复微卫星位点及扩增这2个微卫星位点的引物序列和扩增方法，具有稳定性高、特异性强的优点，可应用于禾花鲤的群体遗传结构分析和分子标记辅助育种等领域，是一种可靠有效的分子标记。
1.禾花鲤三碱基重复微卫星dna分子标记，其特征在于，所述的禾花鲤三碱基重复微卫星dna分子标记为ccr201或ccr202，所述的ccr201的核苷酸序列分别为seq id no.1所示，所述的ccr202的核苷酸序列如seq id no.2所示。
2.一种禾花鲤群体遗传结构分析和分子标记辅助育种的引物组，其特征在于，包括：
3.一种禾花鲤群体遗传结构分析和分子标记辅助育种的试剂盒，其特征在于，包括权利要2所述的引物组。
4.权利要求1所述的禾花鲤三碱基重复微卫星dna分子标记、权利要求2所述的引物组或权利要求3所述的试剂盒在禾花鲤群体遗传结构分析和分子标记辅助育种中的应用。
5.一种禾花鲤群体遗传结构分析和分子标记辅助育种的方法，其特征在于，是提取待测样品的基因组dna，然后用权利要求2所述的引物组进行pcr扩增，pcr产物用毛细管电泳进行分型并确定条带大小。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的pcr扩增，其反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，变性至延伸三个步骤重复25次，72℃延伸10min。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的pcr扩增，其反应体系为25ul，包括dna模板30ng，buffer 10mm，引物各0.2mm，dntp 0.2mm，mg2+2.0mm，taq dna聚合酶1u，用灭菌水补足25μl。
