本发明涉及中药材安全炮制工艺领域，具体涉及一种安全无毒的葛根蛇毒酒及其制备方法。
背景技术：
1、尖吻蝮蛇毒是尖吻蝮蛇蛇头颚两侧毒腺的分泌物，乳白色或微黄色黏稠液体，具有独特的腥味、微酸。尖吻蝮蛇毒具有显著的抗心血管疾病、抗血栓、抗肿瘤、镇痛、抗炎抗菌等药理功效，特别是在抗炎、镇痛、促凝、抗凝、抗血栓、抗肿瘤、抗菌和抗病毒等方面。但是，目前尖吻蝮蛇的毒液毒性成分复杂，主要为血循毒，含有多肽和多种酶组成的复合物、磷脂酶a2、蛋白酶和激肽释放酶等；其次，新鲜的蛇毒毒液可能携带了致病细菌、病毒、支原体等致病病原体，对人体的健康不利。因此，尖吻蝮蛇毒液制品处理不当，会对人或动物组织造成严重的组织出血、水肿、肌肉降解以及肝肾功能毒性，而且市场缺乏系统有效的评价标准，具有健康威胁，也阻碍了蛇毒酒的研发上市。
2、粉葛(pueraria thomsonii benth)国家卫生健康委员会批准的“既是食品又是中药材的物质”即药食同源植物，具有生津止渴、通经活络等功效。粉葛的活性成分主要包括异黄酮类、葛根苷类、生物碱等，其中异黄酮类化合物如葛根素、大豆苷、大豆苷元、鹰嘴豆芽素a等是粉葛中的主要药用活性成分。现代药理学研究表明，粉葛具有维持心血管系统稳定、保护脑神经、抗氧化、降“三高”、治疗肝肾损伤、解酒护肝、改善代谢与提高免疫力等多种药理功效。
3、现有技术披露了一些蛇毒酒的配方和制备方法，以及在清除血栓、抗癌、治疗心血管疾病、治疗风湿、类风湿关节炎方面的作用。专利《一种清除血栓增强细胞活力的五步蛇毒酒配方及制备方法》(cn202110925035.6)仅涉及一种清除血栓增强细胞活力的五步蛇毒酒配方及制备方法；专利《一种抗癌蛇莓酒及其制备方法》(cn201510359419.0)仅涉及一种抗癌蛇莓酒及其制备方法；专利《尖吻蝮蛇毒酒及其制备方法》(cn201010283762.9)；专利《一种治疗心血管疾病的蛇毒酒及其制备方法》(cn200910144238.0)仅涉及一种治疗心血管疾病的蛇毒酒及其制备方法；专利《一种用于治疗风湿、类风湿关节炎的蛇毒制品》(cn01102835.1)仅涉及一种用于治疗风湿、类风湿关节炎的蛇毒制品。以上技术均存在：①未充分纯化制备蛇毒毒液，去除致病细菌、病毒、支原体等致病病原体对人体健康的干扰；②未对蛇毒产品进行系统的安全性评价，不能科学确认对人体的急性、慢性毒性，不利于产品的推广使用。
技术实现思路
1、本发明的目的是为了研发一种安全无毒的葛根尖吻蝮蛇毒酒及其制备工艺。
2、为实现以上目的，本发明提供的方案如下:
3、一种葛根尖吻蝮蛇毒酒，其特征在于，包括以下成分组成：0.2～0.3g/l的葛根乙醇提取物、2～3g/l的精制尖吻蝮蛇毒，其余为50～55°的高粱白酒。
4、在一些实施方式中，精制尖吻蝮蛇毒由尖吻蝮蛇毒溶解离心和凝胶色谱纯化制得。
5、天然鲜尖吻蝮毒液蛇毒不可避免的携带了致病微生物、病毒等不溶于水的毒性因子成分，而蛇毒活性成分如类凝血酶、神经生长因子为水溶活性蛋白成分。因此,采用pbs溶解和高速离心的方法可以有效的除去鲜尖吻蝮毒液蛇毒中的致病微生物、病毒等不溶于水的毒性因子成分，保证蛇毒酒食用安全性。
6、并且天然鲜尖吻蝮毒液蛇毒含有细胞毒素、出血毒素等有毒蛋白(≤20kda)，而蛇毒活性成分如类凝血酶、神经生长因子为水溶活性蛋白成分的分子量在25-100kda之间。因此,采用凝胶色谱可以有效除去大直径的病毒成分，小分子量的细胞毒素、出血毒素等有毒蛋白(≤20kda)成分，保证蛇毒酒食用安全性。
7、本申请还提供上述葛根尖吻蝮蛇毒酒的制备方法，包括以下制备步骤：
8、步骤一：尖吻蝮蛇毒粗制，取鲜尖吻蝮毒液蛇毒用ph 6.7～8.2的磷酸盐缓冲液溶解(pbs，0.1～0.2mol/l)，5000～6000rpm/min离心10～12min去除沉淀；
9、步骤二：尖吻蝮蛇毒精制，选择琼脂糖和葡聚糖凝胶为填料(粒径20～40μm)，计算步骤一的鲜尖吻蝮毒液体积，20～25倍体积琼脂糖和葡聚糖凝胶装柱，采用pbs洗脱(0.1～0.2mol/l，ph 6.7～8.2)，洗脱温度设置为3～4℃，按总洗脱体积1/4收集为一组分，收集到第三个组分即为目标洗脱液，浓缩并冷冻干燥，为精制尖吻蝮蛇毒；
10、步骤三：高粱酒炮制，按每升高粱酒加2～3g/l的精制尖吻蝮蛇毒和0.2～0.3g/l的葛根乙醇提取物配置，密封6～7d进行炮制处理。
11、在一些实施方式中，凝胶柱的高度h和直径d的比例应为20≤h/d≤30。琼脂糖和葡聚糖凝胶的物理性能，分辨率高、硬度大、流速快，化学性质稳定，非特异性吸附低，回收率高，易于放大，具有良好的分离效率。
12、在一些实施方式中，炮制处理为避光常温处理。天然鲜尖吻蝮毒液蛇毒中含有丝氨酸蛋白酶家族、金属蛋白酶家族、磷脂酶a2蛋白家族毒性蛋白等有毒物质，中毒会对人或动物组织造成严重的组织出血、水肿、肌肉降解以及肝肾功能毒性，具有健康威胁，也阻碍蛇毒酒的研发上市。高粱酒含有富含乙酸乙酯、己酸乙酯、辛酸乙酯、3-甲基丁醇、糠醛、壬醛等多种酯类、醇类、醛酮类、烷烃类活性成分，更能有效中和、变性细胞毒素、出血毒素、磷脂酶a2、蛋白酶和激肽等有毒物质，获得可以安全食用的尖吻蝮蛇毒酒。
13、同时葛根乙醇提取物富含葛根素、大豆苷、大豆苷元、鹰嘴豆芽素等异黄酮活性成分，其具有显著的解酒护肝活性；异黄酮活性成分也能有效中和变性细胞毒素、出血毒素、磷脂酶a2、蛋白酶和激肽等有毒物质，获得可以安全食用的尖吻蝮蛇毒酒。
14、本发明提供了一种葛根尖吻蝮蛇毒酒及其制备方法。具备以下有益效果：本申请通过各成分的作用可以降低尖吻蝮蛇毒中的有毒组分，制备了一种安全无毒的葛根蛇毒酒。本申请通过尖吻蝮蛇毒的粗制和精制处理，去除了对人体有毒的丝氨酸蛋白酶家族、金属蛋白酶家族、磷脂酶a2蛋白家族毒性蛋白等有毒成分。通过高粱酒炮制的尖吻蝮蛇毒酒不具有出血、水肿、肌肉、肝肾毒性。
1.一种葛根尖吻蝮蛇毒酒，其特征在于，包括以下成分组成：0.2～0.3g/l的葛根乙醇提取物、2～3g/l的精制尖吻蝮蛇毒，其余为50～55°的高粱白酒。
2.根据权利要求1所述的葛根尖吻蝮蛇毒酒，其特征在于：所述精制尖吻蝮蛇毒由尖吻蝮蛇毒溶解离心和凝胶色谱纯化制得。
3.一种葛根尖吻蝮蛇毒酒的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤一中用磷酸盐缓冲液溶解后，在3～4℃下超声1～2h。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，凝胶柱的高度h和直径d的比例应为20≤h/d≤30。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，炮制处理为避光常温处理。
