本发明属于生物医药，尤其涉及microrna-455-5p在制备检测肉鸡肢体内外翻畸形试剂盒中的应用。
背景技术：
1、由于肉鸡的集约化选育，腿部疾病已成为危及肉鸡生长发育、经济效益和动物福利的重要因素。常见的肉鸡腿部疾病包括股骨头坏死(femoral head necrosis，fhn)、胫骨发育不良(tibial dyschondroplasia，td)和肢体内外翻畸形(valgus-varus deformity，vvd)。
2、fhn主要发生在养殖后期，其典型解剖特征是肉鸡养殖后期软骨下骨抗性下降，整个股骨头的软骨像一顶帽子，经常脱落。td的病理特征是胫跗骨近端生长板软骨组织出现明显的无血管未矿化的区域，发病病因常为环境毒物、药物和重金属等。vvd是一种病因复杂的肉鸡腿部畸形，最初被称为“腿部扭曲”，后更正为肢体内外翻畸形。其主要特征是双侧或单侧胫附骨和跗跖骨出现一定角度的外翻(向外成角)或内翻(向内成角)。这种畸形的行走姿势会导致腿部骨骼结构的损伤和不正常发育，进而影响整体生理和生化状态，降低免疫功能，增加对外部环境因素(如细菌感染)的脆弱性。
3、长骨的生长发育主要取决于软骨内骨化。软骨生长板发育异常是腿部疾病最重要的损伤过程之一。大量研究证实，td和fhn肉鸡软骨组织发育异常，如血管侵袭少、发育不良、矿化障碍、软骨细胞排列紊乱和凋亡等。且研究初步发现，vvd肉鸡骨小梁稀疏，长骨骨骼强度降低，并含有白色非矿化区。然而，vvd肉鸡生长板软骨的组织病理学变化和生长状况仍不清楚。
4、通常来说，腿病软骨组织的检测主要依靠染色技术和电镜技术，染色常见于he染色、番红固绿染色、甲苯胺蓝染色及阿利新蓝染色，这些方法可区分软骨组织和成骨组织，结合电镜技术能发现其一定的病理变化，但其软骨组织制作切片的繁琐性，电镜的费用是影响其发展的主要因素，因此考虑到便利性、广泛性和特异性，这两种方法目前仍存在一定的缺陷，仍需一种特异性强、快速等的用于明确腿病出现关节软骨的异常生长发育。
5、外泌体是一种典型的细胞外囊泡，机体大多数细胞均可分泌，直径大约为30-150nm之间，外泌体分布广泛，可以在不同的生物体液中被发现，包括血液、渗出液、唾液、腹水、乳汁和尿液。其主要包含mrna、microrna(mirna)、蛋白质和少量dna分子，经循环体液运输至靶细胞，从而发挥细胞间通讯的功能。其中mirna是研究最为透彻的分子之一，mirna可通过作用于其靶基因进而调控机体生长发育。mir-455是一个广泛保守的mirna家族成员。根据mir-455前体的5’端臂和3’端臂的加工不同，分为mir-455-5p和mir-455-3p。早期研究表明，mir-455-5p/3p在关节软骨组织和软骨细胞中均高表达，且可被sox9上调，两者靶向hif-2α，调节软骨稳态；mir-455-5p可以通过靶向抑制runx2表达来缓解张力诱导的终板软骨细胞变性。然而，mir-455-5p在肉鸡肢体内外翻畸形的研究目前处于空白，明确mir-455-5p是如何调控肉鸡肢体内外翻畸形关节软骨发育是本发明的研究重点。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本发明提出了microrna-455-5p(mir-455-5p)在制备检测肉鸡肢体内外翻畸形试剂盒中的应用，本发明证实了肢体内外翻畸形的肉鸡关节软骨异常发育，明确了mir-455-5p在软骨组织中显著高表达；并且发现血浆外泌体可传递mir-455-5p调节软骨生长发育，探明了mir-455-5p是通过抑制其靶基因rps6kb1减少rps6磷酸化水平，进而抑制软骨生长发育，发现了mir-455-5p及其调控轴对肉鸡肢体内外翻畸形关节软骨调节具有重要意义。
2、为实现上述目的，本发明提供了microrna-455-5p在制备检测肉鸡肢体内外翻畸形试剂盒中的应用，所述microrna-455-5p的核苷酸序列如seq id no.1所示。
3、优选的，所述microrna-455-5p通过抑制rps6kb1基因的表达，抑制rps6磷酸化，进而抑制二型胶原的合成，抑制关节软骨细胞的增殖。
4、优选的，所述rps6kb1基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。
5、本发明还提供了一种以所述microrna-455-5p为诊断标志物的肉鸡肢体内外翻畸形检测试剂盒。
6、本发明还提供了所述microrna-455-5p在制备rps6kb1基因表达抑制剂中的应用。
7、本发明还提供了一种rps6kb1基因表达抑制剂，所述rps6kb1基因表达抑制剂包括microrna-455-5p。
8、本发明还提供了所述microrna-455-5p在制备关节软骨细胞增殖抑制剂中的应用。
9、本发明还提供了一种关节软骨细胞增殖抑制剂，所述关节软骨细胞增殖抑制剂包括microrna-455-5p。
10、本发明还提供了一种抑制所述microrna-455-5p表达的试剂在制备治疗肉鸡肢体内外翻畸形试剂中的应用。
11、本发明还提供了一种抑制所述microrna-455-5p表达的试剂在制备关节软骨细胞增殖促进剂中的应用。
12、与现有技术相比，本发明具有如下优点和技术效果：
13、本发明通过明确肢体内外翻畸形的肉鸡具有关节软骨发育异常的现象，结合前期血浆外泌体关键mir-455-5p，从根本上探究出mir-455-5p调控关节软骨异常发育的具体机制，明确了mir-455-5p调控轴应对肉鸡肢体内外翻畸形关节软骨发育异常的潜在价值。本发明首次公开了肢体内外翻畸形肉鸡的关节软骨生长特性和mir-455-5p调控轴，为丰富肉鸡腿病研究提供了新的思路，在肉鸡腿病上进一步治疗和研发新型靶向药物的选择上提供了理论和实验依据。
1.microrna-455-5p在制备检测肉鸡肢体内外翻畸形试剂盒中的应用，其特征在于，所述microrna-455-5p的核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述microrna-455-5p通过抑制rps6kb1基因的表达，抑制rps6磷酸化，进而抑制二型胶原的合成，抑制关节软骨细胞的增殖。
3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述rps6kb1基因的核苷酸序列如seq idno.2所示。
4.一种以权利要求1中所述microrna-455-5p为诊断标志物的肉鸡肢体内外翻畸形检测试剂盒。
5.如权利要求1中所述microrna-455-5p在制备rps6kb1基因表达抑制剂中的应用。
6.一种rps6kb1基因表达抑制剂，其特征在于，所述rps6kb1基因表达抑制剂包括权利要求1中所述microrna-455-5p。
7.如权利要求1中所述microrna-455-5p在制备关节软骨细胞增殖抑制剂中的应用。
8.一种关节软骨细胞增殖抑制剂，其特征在于，所述关节软骨细胞增殖抑制剂包括权利要求1中所述microrna-455-5p。
9.一种抑制权利要求1中所述microrna-455-5p表达的试剂在制备治疗肉鸡肢体内外翻畸形试剂中的应用。
10.一种抑制权利要求1中所述microrna-455-5p表达的试剂在制备关节软骨细胞增殖促进剂中的应用。
