本发明涉及微生物，特别涉及一种烟用山楂提取物的制备方法及在卷烟中的应用。
背景技术：
1、山楂又名山里红、红果，含有多种香味成分和丰富的微量元素，主要含黄酮类、有机酸和三萜类等化学成分，目前已被公认为是加工保健食品的优质原料之一，在食品、保健品、日化、烟草行业得到广泛应用。
2、目前，传统加工烟用山楂提取物的方法是采用低度乙醇连续萃取而得到山楂酊剂，这种方法所得产品中除香气成分外，主要为糖类和果胶类物质，糖苷类香味前体物质很难释放出来，一定程度上限制了烟用山楂提取物的应用，为了提高香气量，也有采用酶制剂或微生物对山楂进行进一步发酵的处理，但大都集中在果胶、纤维素的降解，依然无法满足进一步提高烟用山楂提取物品质的需求，黄酮类作为山楂中主要活性成分(如槲皮素、芸香苷)，直接添加于烟草制品中会与口腔唾液中的蛋白质和糖朊结合，使其失去对口腔的润滑作用，并引起舌面的上皮组织收缩，产生口腔干燥、舌面发涩和口腔不干净等感觉，黄酮体糖苷如裂解产生糖朊，可以补充口腔唾液中的糖朊的含量，余味舒适干净，吸味醇和，糖朊在氧化酶作用下，降解生成醇类和呋喃类等香味物质，黄酮类糖苷在氧化酶作用下可生成聚合多醌，经过烘焙降解生成呋喃酮类，吡喃酮类等。现有技术中，未有较好的降解黄酮类物质提高烟用山楂提取物品质的研究，因此，对于烟用山楂提取物的制备和应用仍有进一步研究的必要。
技术实现思路
1、本发明所要解决的技术问题是提供一种烟用山楂提取物的制备方法及在卷烟中的应用，其施加于卷烟产品后具有增加烟气透发性、柔和烟气、增甜的作用。
2、本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：
3、一种烟用山楂提取物的制备方法，包括以下步骤：
4、(1)将芸香苷与水按照质量比1：(1-7)混合，121℃下灭菌15min；
5、(2)将副黄假单胞菌zy-03接种于ypd液体培养基、枯草芽孢杆菌smxp-58、微球菌zy02、膜醭毕赤酵母分别接种至lb培养基，在30℃，150r/min，发酵24-48h，形成种子液；
6、(3)将副黄假单胞菌zy-03种子液和枯草芽孢杆菌smxp-58种子液按质量比(9-12)：(8-11)混合，总接种量10-15％接种至芸香苷溶液，25-40℃条件下发酵72-96h，发酵结束后得到发酵产物1；
7、(4)将山楂干磨碎至40-100目，山楂干与水按质量比1:10混合，60℃加热90min，过滤，滤液与在121℃下灭菌15min，在无菌条件下将灭菌后的滤液与发酵产物1按质量比10:1-30:1混合，成为混合液；
8、(5)将副黄假单胞菌zy-03种子液、膜醭毕赤酵母种子液、微球菌zy02种子液以及枯草芽孢杆菌smxp-58种子液按以下质量比混合(35-55)：(20-30)：(10-20)：(25-45)，总接种量2-6％接种于混合液，25-40℃条件下120-180r/min发酵48-96h；
9、(6)发酵后的混合液与有机溶剂混合，在70-80℃回流提取2-4h，其中混合液与有机溶剂的体积比1:1-1.5:1，所述有机试剂由乙酸乙酯、乙醇、正己烷按质量比(20-30):(50-65):(5-10)组成，提取后离心，取上清液，在60℃，60-100mbar旋蒸至密度1.09±0.01，按照体积比1:1加入乙醇，在-22℃放置24h，离心得上清液，加入30％丙二醇得到烟用山楂提取物。
10、优选地，上述技术方案中，步骤(1)中，所述芸香苷与水的质量比为1：3。
11、优选地，上述技术方案中，所述副黄假单胞菌(pseudomonas parafulva)zy-03，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通生物中心(cgmcc)，保藏编号为cgmccno.24422；所述枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)smxp-58，现保藏于中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏编号为cctcc no：m 2016083；所述微球菌(micrococcaceae pribram)zy02，现保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，保藏编号为cgmccno.21313；所述膜醭毕赤酵母(pichia membranifuciens)cgmcc 2.4059。
12、优选地，上述技术方案中，所述lb液体培养基包括：nacl 10g/l，蛋白胨10g/l，酵母浸粉5g/l，在121℃高压灭菌15min后制得；所述ypd液体培养基包括：酵母粉10g/l、蛋白胨20g//l以及葡萄糖20g/l，在121℃高压灭菌15min后制得。
13、优选地，上述技术方案中，步骤(2)中，种子液的培养条件为：30℃，150r/min，发酵24-48h，od600值为1.2-2.0。
14、优选地，上述技术方案中，步骤(3)具体为：将副黄假单胞菌zy-03种子液和枯草芽孢杆菌smxp-58种子液按质量比1：1混合，总接种量10％接种至芸香苷溶液，30℃条件下发酵84h，发酵结束后得到发酵产物1。
15、优选地，上述技术方案中，步骤(5)中，副黄假单胞菌zy-03种子液、膜醭毕赤酵母种子液、微球菌zy02种子液以及枯草芽孢杆菌smxp-58种子液按以下质量比混合4：2：1：3，总接种量4％接种于混合液，30℃条件下180r/min发酵96h。
16、优选地，上述技术方案中，步骤(6)中，乙酸乙酯、乙醇、正己烷按质量比6:10:1。
17、一种烟用山楂提取物在卷烟中的应用，所述烟用山楂提取物是根据上述制备方法制备得到的。
18、优选地，上述技术方案中，将烟用山楂提取物与水按照质量比1:(50-500)稀释，而后添加0.5-1ul/支到常规卷烟或加热卷烟中；或者，所得烟用山楂提取物与水按照质量比1:(5000-50000)稀释，按照10-15％喷洒于烟丝上，放置2-6h。
19、本发明上述技术方案，具有如下有益效果：
20、本申请利用特定组合微生物混合发酵芸香苷和山楂，可提高发酵效果，降解芸香苷等黄酮类物质和山楂中大分子物质转化为香气成分，改善烟用山楂提取物品质。
1.一种烟用山楂提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种烟用山楂提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述芸香苷与水的质量比为1：3。
3.根据权利要求1所述的一种烟用山楂提取物的制备方法，其特征在于，所述副黄假单胞菌(pseudomonas parafulva)zy-03，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通生物中心(cgmcc)，保藏编号为cgmccno.24422；所述枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)smxp-58，现保藏于中国典型培养物保藏中心(cctcc)，保藏编号为cctcc no：m2016083；所述微球菌(micrococcaceae pribram)zy02，现保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，保藏编号为cgmccno.21313；所述膜醭毕赤酵母(pichia membranifuciens)cgmcc 2.4059。
4.根据权利要求1所述的一种烟用山楂提取物的制备方法，其特征在于，所述lb液体培养基包括：nacl 10g/l，蛋白胨10g/l，酵母浸粉5g/l，在121℃高压灭菌15min后制得；所述ypd液体培养基包括：酵母粉10g/l、蛋白胨20g//l以及葡萄糖20g/l，在121℃高压灭菌15min后制得。
5.根据权利要求1所述的一种烟用山楂提取物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，种子液的培养条件为：30℃，150r/min，发酵24-48h，od600值为1.2-2.0。
6.根据权利要求1所述的一种烟用山楂提取物的制备方法，其特征在于，步骤(3)具体为：将副黄假单胞菌zy-03种子液和枯草芽孢杆菌smxp-58种子液按质量比1：1混合，总接种量10％接种至芸香苷溶液，30℃条件下发酵84h，发酵结束后得到发酵产物1。
7.根据权利要求1所述的一种烟用山楂提取物的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，副黄假单胞菌zy-03种子液、膜醭毕赤酵母种子液、微球菌zy02种子液以及枯草芽孢杆菌smxp-58种子液按以下质量比混合4：2：1：3，总接种量4％接种于混合液，30℃条件下180r/min发酵96h。
8.根据权利要求1所述的一种烟用山楂提取物的制备方法，其特征在于，步骤(6)中，乙酸乙酯、乙醇、正己烷按质量比6:10:1。
9.一种烟用山楂提取物在卷烟中的应用，其特征在于，所述烟用山楂提取物是通过权利要求1-8任一所述制备方法制备得到的。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，将烟用山楂提取物与水按照质量比1:(50-500)稀释，而后添加0.5-1ul/支到常规卷烟或加热卷烟中；或者，所得烟用山楂提取物与水按照质量比1:(5000-50000)稀释，按照10-15％喷洒于烟丝上，放置2-6h。
