本发明涉及一种以甲壳纲动物的壳体为原料进行物质提取的方法，所提取的蛋白或者多肽可应用于炎症性肠病的治疗。
背景技术：
1、炎症性肠病(inflammatory bowel disease,ibd)炎症性肠病(inflammatorybowel disease：ibd)是胃肠道的一种慢性非特异性炎性疾病，其特征是黏膜结构破坏，肠道微生物组成紊乱和全身生化指标异常。其包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,uc)、克罗恩病(crohn disease,cd)和未定型结肠炎(indeterminate colitis,ic)。
2、ibd病因与发病机制至今仍未完全明确，但公认系遗传、环境及免疫等多种因素综合作用的结果。目前认为其发病机制是由大量肠道细菌诱发的过度肠黏膜免疫反应，在具有遗传易感性的人群中导致肠黏膜损伤。随着现代人饮食配比的西方化、生活方式的城市化以及高度的工业化，我国ibd的发病率急速上升。目前用于ibd治疗的常规药物都存在副作用大、复发率高以及容易产生耐药性等诸多问题，且该病的具体致病机制仍不明确。因此，开发对ibd有效且副作用小的天然产物十分重要。
3、溃疡性结肠炎是第一种类型的炎症性肠病，被认为是一种自身免疫病，其中身体免疫系统攻击结肠并导致炎症。溃疡性结肠炎在直肠中开始并且可以逐渐地扩散到整个结肠。体征和症状通常是腹痛和带血的肠运动。
4、克罗恩病是第二种类型的炎症性肠病，可能涉及从食管和胃至小肠和大肠的消化道的任何部分。它经常具有跳跃性损伤，即患病区域散布在健康组织区域中。
5、所述炎症性肠病(ibd)，尤其是溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,uc)、克罗恩病(crohn disease,cd)现今主要以分步方法使用的药物组合进行控制。最初使用抗炎药物，如果其不成功则可添加抑制免疫系统的药物。在大多数严重病例中，可能需要手术来除去全部或部分的结肠和小肠。对未定型结肠炎的治疗最初是支持性的，使用静脉内流体来使肠稳定并防止脱水。如果未恢复对肠足够的血供，则可能需要手术来除去失去血供的部分肠。
6、基于上述，临床上用于治疗炎症性肠病(ibd)的药物主要有：抗炎药物、免疫抑制剂和微生态制剂治疗等，但这些药物在长期治疗的同时伴随有一定的毒副作用，且很大程度上无法长期使用。
7、虾壳中包含丰富的几丁质、蛋白质和无机化合物等生物资源，其中蛋白质在常规的壳聚糖制备过程中会被强酸或强碱去除，造成一定程度上的资源浪费。同时虾壳蛋白作为其外骨骼重要组成成分之一，其表达特点关乎表皮形成及结构的完整性以及各种生理功能的发挥，进而影响甲壳动物的生长、防御、免疫等各方面。此外近年来研究人员也开始逐渐关注虾壳蛋白水解物的制备，开发出一系列生物活性肽，并逐渐研究确认了从虾、蟹壳废弃物中提取的蛋白质酶解产物在产品应用中具有生物活性。在很大程度上，已经鉴定出来自海洋的物种具有生物重要的肽，这些肽具有辅助代谢紊乱，心血管疾病，高血压，氧化应激，胰岛素抵抗，免疫功能和癌症预防的能力。虾、蟹壳废物蛋白质已被确认为具有巨大潜在生物活性的蛋白质来源，包括抗氧化活性、抗高血压活性和抗微生物活性。
8、然而，目前为止几乎没有关于虾壳废弃蛋白与肽在炎症性肠病的研究报道。
技术实现思路
1、1.要解决的问题
2、本发明的目的在于将以甲壳纲动物的壳体为原料得到的提取物应用于治疗炎症性肠病药物的制备或者炎症性肠病的治疗，所述提取物其表现出了有效的良好的治疗效果，并且应用过程中，具有良好的体内代谢稳定性和生物利用度。
3、2.技术方案
4、为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：
5、[1]根据本发明的目的，本发明第一方面提供了一种以甲壳纲动物的壳体为原料进行物质提取的方法，包括以下步骤：
6、s1.利用酸液处理壳体得到处理液，所述酸液具有数值≤3的ph值；
7、s2.利用碱调节所述处理液，得到提取物，所述提取物包括蛋白质；
8、s3.利用胰蛋白酶对所得提取物进行酶解操作、干燥处理，得到酶解产物，所述酶解产物包括多肽。
9、根据本发明目的的第一方面的任一实施方案，s1.中，所述酸液具有数值≤2.5的ph值；优选所述酸液具有数值≤2的ph值。
10、根据本发明目的的第一方面的任一实施方案，s1.中，按照固液比计算，所述壳体与所述酸液的混合比例为(1～10)g：(10～30)ml；优选为(1～5)g：(15～25)ml；更加优选为(1～2)g：(17～23)ml；最佳优选为1g：(19～21)ml。
11、根据本发明目的的第一方面的任一实施方案，s1.中，所述处理时间为12～24h；
12、所述处理温度为4～8℃。
13、根据本发明目的的第一方面的任一实施方案，s2.中，利用碱液调节所述处理液；其所述碱液具有数值≥10的ph值；
14、利用碱调节所述处理液，直至无明显蛋白析出得到提取物。
15、根据本发明目的的第一方面的任一实施方案，首选，对所述提取物进行干燥处理，然后，进行酶解操作。
16、根据本发明目的的第一方面的任一实施方案，s3.中，按照质量比计算，所述提取物(干重)的用量与所述胰蛋白酶的用量之比为1000～2000；
17、根据本发明目的的第一方面的任一实施方案，s3.中，按照质量比计算，所述提取物的用量与所述胰蛋白酶的用量之比可以为取自以下任一组数值范围内的任一数值：
18、1000～2000、1000～1900、1000～1800、1000～1700、1000～1600、1000～1500、1000～1400、1000～1300、1000～1200、1000～1100、1100～2000、1100～1900、1100～1800、1100～1700、1100～1600、1100～1500、1100～1400、1100～1300、1100～1200、1200～2000、1200～1900、1200～1800、1200～1700、1200～1600、1200～1500、1200～1400、1200～1300、1300～2000、1300～1900、1300～1800、1300～1700、1300～1600、1300～1500、1300～1400、1400～2000、1400～1900、1400～1800、1400～1700、1400～1600、1400～1500、1500～2000、1500～1900、1500～1800、1500～1700、1500～1600、1600～2000、1600～1900、1600～1800、1600～1700、1700～2000、1700～1900、1700～1800、1800～2000、1800～1900、1900～2000。
19、根据本发明目的的第一方面的任一实施方案，s3.中，按照质量比计算，所述提取物的用量与所述胰蛋白酶的用量之比优选为1000～1500；进一步优选为1100～1400，更加优选为1200～1300。
20、根据本发明目的的第一方面的任一实施方案，s3.中，所述酶解操作在弱碱性溶液中进行ph7～9；
21、所述提取物与所述弱碱性溶液的混合比例为的混合比例为(1～10)g：(10～30)ml；优选为(1～5)g：(15～25)ml；更加优选为(1～2)g：(17～23)ml；最佳优选为1g：(19～21)ml。
22、所述胰蛋白酶与所述弱碱性溶液的混合比例为的混合比例为(1～10)mg：(10～30)ml；
23、优选为(1～5)mg：(15～30)ml；
24、更加优选为(1～5)mg：(20～30)ml；
25、最佳优选为(1～2)mg：(23～27)ml。
26、根据本发明目的的第一方面的任一实施方案，s3.中，所述酶解操作的温度为30～40℃；优选温度为35～40℃。
27、根据本发明目的的第一方面的任一实施方案，s3.中，所述酶解操作的时间为10～20h；所述酶解操作的优选时间为15～20h；
28、优选时间为10～15h；
29、进一步优选为10～13h；
30、更加优选为10～12h。
31、根据本发明目的的第一方面的任一实施方案，
32、s3.中，所述酶解产物中的多肽，其分子量小于10kda；优选为1～10kda。
33、根据本发明目的的第一方面的任一实施方案，所述甲壳纲动物包括南美白对虾、雪蟹、龙虾及罗氏虾中的任意一种或者两种以上的组合。
34、根据本发明目的的第一方面的任一实施方案，所述物质为为a～d中的任一种：
35、a.纲动物的壳体为原料的提取物，所述提取物包括蛋白质；
36、b.纲动物的壳体为原料的提取蛋白质，所述蛋白质具有优秀的酸溶性；
37、c.纲动物的壳体为原料，经提取、酶解后的酶解产物，所述酶解产物包括多肽
38、d.纲动物的壳体为原料，经提取、酶解后的多肽，所述多肽具有优秀的水溶性。
39、[2]根据本发明的目的，本发明第二方面提供了一种含有蛋白质的提取物，所述提取物，来源于甲壳纲动物的壳体；
40、所述提取物中，蛋白质的质量占比不低于10％；
41、优选地，所述提取物中含有的蛋白质的质量占比不低于15％；
42、最为优选地，所述提取物中含有的蛋白质的质量占比不低于20％。
43、根据本发明目的的第二方面的任一实施方案，所述提取物根据本发明目的的第一方面的任一实施方案所述的方法得到。
44、[3]根据本发明的目的，本发第三方面提供了一种含有多肽的酶解产物，所述酶解产物中的多肽，其分子量小于10kda；优选地，所述酶解产物中的多肽，其分子量为1～10kda。
45、根据本发明目的的第三方面的任一实施方案，所述酶解产物中的多肽质量占比不低于20％；优选地，所述酶解产物中的多肽质量占比不低于40％；最为优选地，所述酶解产物中的多肽质量占比不低于50％。
46、根据本发明目的的第三方面的任一实施方案，所述酶解产物中，含有可溶于水的多肽和蛋白质(即具有水溶性的蛋白质和多肽)，二者合计的质量占比不低于40％；优选地，二者合计的质量占比不低于50％；最为优选地，二者合计的质量占比不低于60％。
47、根据本发明目的的第三方面的任一实施方案，所述的酶解产物根据本发明目的的第一方面的任一实施方案所述的方法得到；或者，
48、所述的酶解产物根据本发明目的的第二方面的任一实施方案所述的蛋白质，经胰蛋白酶酶解处理得到；或者，
49、所述的酶解产物根据本发明目的的第二方面的任一实施方案所述的含有蛋白质的提取物，经胰蛋白酶酶解处理得到。
50、根据本发明目的的第三方面的任一实施方案，以10mg的酶解产物为一份，所述一份酶解产物在溶剂水中的溶解度不低于4mg/ml；优选地，所述一份酶解产物在溶剂水中的溶解度不低于5mg/ml；最为优选地，所述一份酶解产物在溶剂水中的溶解度不低于6mg/ml。
51、[4]根据本发明的目的，本发明第四方面提供了一种组合物，所述组合物包含所述物质为a～d中的任一种：
52、a.纲动物的壳体为原料的提取物，所述提取物包括蛋白质；
53、b.纲动物的壳体为原料的提取蛋白质，所述蛋白质具有优秀的酸溶性；
54、c.纲动物的壳体为原料，经提取、酶解后的酶解产物，所述酶解产物包括多肽
55、d.纲动物的壳体为原料，经提取、酶解后的多肽，所述多肽具有优秀的水溶性。
56、根据本发明目的的第四方面的任一实施方案，本发明提供了一种组合物，所述组合物为组合物一～三中的任一种：
57、组合物一：包括选自a～d中的任意两种物质；例如a和b，或者a和c，或者a和d，或者b和c，或者b和d，或者c和d；
58、组合物二：包括选自a～d中的任意三种物质；例如a和b和c，a和b和d，或者a和c和d，或者b和c和d；
59、组合物三：包括a和b和c和d四种物质。
60、基于本发明目的第一方面，和/或第二方面，和/或第三方面，和/或第四方面，根据本发明的目的之二：
61、[5]根据本发明的目的，本发明第五方面提供了一种甲壳纲动物的壳体提取物在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的用途。
62、根据本发明的目的，本发明第五方面提供了一种甲壳纲动物的壳体提取物中的蛋白质在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的用途。
63、根据本发明的目的，本发明第五方面提供了一种甲壳纲动物的壳体提取物的酶解产物在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的用途。
64、根据本发明的目的，本发明第五方面提供了一种甲壳纲动物的壳体酶解产物中的多肽在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的用途。
65、基于本发明目的的第一方面，和/或第二方面，和/或第三方面，和/或第四方面，和/或第五方面，根据本发明的目的：
66、[6]本发明第六方面提供了一种治疗炎症性肠病的药物，所述药物包括成分甲壳纲动物的壳体提取物、提取物中的蛋白质、所述提取物的酶解产物、所述提取物中的蛋白质的酶解产物、所述酶解产物中的多肽中的任意一种，或者两种，或者三种，或者四种，或者五种。
67、根据本发明目的的第六方面，其优选地实施方案，所述药物包括成分甲壳纲动物的壳体的提取物的酶解产物、所述提取物中的蛋白质的酶解产物和所述酶解产物中的多肽中的任意一种，或者两种，或者三种。
68、进一步地，根据所述优选地实施方案，所述药物包括成分甲壳纲动物的壳体的提取物的酶解产物、和所述提取物中的蛋白质的酶解产物。
69、进一步地，根据所述优选地实施方案，所述药物包括成分甲壳纲动物的壳体的提取物的酶解产物、和所述酶解产物中的多肽。
70、进一步地，根据所述优选地实施方案，所述药物包括成分甲壳纲动物的壳体的提取物中的蛋白质的酶解产物和所述酶解产物中的多肽。
71、进一步地，根据所述优选地实施方案，所述药物包括成分甲壳纲动物的壳体的提取物的酶解产物、和所述提取物中的蛋白质的酶解产物和所述酶解产物中的多肽。
72、根据本发明目的的第六方面的任一实施方案，所述药物还包括药学上可接受的载体或辅料或药学上可接受的盐。
73、根据本发明目的的第六方面的任一实施方案，所述成分的量或者待施用的剂量为100～500mg/kg；
74、根据本发明目的的第六方面的任一实施方案，所述成分的量或者待施用的剂量可以为取自以下任一组数值范围内的任一数值：100～500、100～400、100～300、100～200、200～500、200～400、200～300、300～500、300～400、400～500；
75、单位mg/kg。
76、根据本发明目的的第六方面的任一实施方案，所述成分的量或者待施用的剂量优选为100～500mg/kg；
77、进一步优选为200～500mg/kg；
78、更加优选为200～400mg/kg。
79、根据本发明目的的第六方面的任一实施方案，所述成分的量或者待施用的剂量为：单次施用的剂量；或者，
80、每日施用的剂量。
81、根据本发明目的的第六方面的任一实施方案，所述施用频次为，每日施用一次、两次或三次。
82、根据本发明目的的第六方面的任一实施方案，施用方式为经胃肠消化道给药，或者
83、经注射给药，或者
84、经皮下包埋给药方式给药；
85、优选为经胃肠消化道给药。
86、根据本发明目的的第六方面的任一实施方案，所述药物的剂型包括粉剂、散剂、片剂、丸剂、胶囊剂、缓释剂、控速释剂、注射剂、输液剂或混悬剂。
87、[7]根据本发明的目的，本发明第七方面提供了一种利用以下物质来治疗炎症性肠病的方法；其中
88、所述物质包括甲壳纲动物的壳体提取物、提取物中的蛋白质、所述提取物和/或蛋白质的酶解产物、所述酶解产物中的多肽中的任意一种，或者两种，或者三种，或者四种。
89、根据本发明目的的第七方面的任一实施方案，本发明提供了一种利用甲壳纲动物的壳体提取物来治疗炎症性肠病的方法。
90、根据本发明目的的第七方面的任一实施方案，本发明提供了一种利用甲壳纲动物的壳体提取物中的蛋白质来治疗炎症性肠病的方法。
91、根据本发明目的的第七方面的任一实施方案，本发明提供了一种利用所述提取物的酶解产物来治疗炎症性肠病的方法。
92、根据本发明目的的第七方面的任一实施方案，本发明提供了一种利用所述提取物中的蛋白质的酶解产物来治疗炎症性肠病的方法。
93、根据本发明目的的第七方面的任一实施方案，本发明提供了一种利用所述酶解产物中的多肽来治疗炎症性肠病的方法。
94、根据本发明目的的第七方面的任一实施方案，本发明提供了一种利用提取物的酶解产物和/或提取物中的蛋白质的酶解产物，和酶解产物中的多肽来治疗炎症性肠病的方法。
95、根据本发明目的的第七方面的任一实施方案，所述物质的施用剂量为100～500mg/kg；
96、根据本发明目的的第七方面的任一实施方案，所述物质的施用剂量为可以为取自以下任一组数值范围内的任一数值：100～500、100～400、100～300、100～200、200～500、200～400、200～300、300～500、300～400、400～500；
97、单位mg/kg。
98、根据本发明目的的第七方面的任一实施方案，所述物质的施用剂量优选为100～500mg/kg；
99、进一步优选为200～400mg/kg；
100、更加优选为200～300mg/kg。
101、根据本发明目的的第七方面的任一实施方案，所述施用剂量为：单次施用的剂量；或者，
102、每日施用的剂量。
103、根据本发明目的的第七方面的任一实施方案，所述施用频次为，每日施用一次、两次或三次。
104、根据本发明目的的第七方面的任一实施方案，施用方式为经胃肠消化道给药，或者
105、经注射给药，或者，
106、经皮下包埋给药方式给药；
107、优选为经胃肠消化道给药。
108、[8]根据本发明目的的第一～七任一所述的方面，及任一所述方面的任一实施方案，所述炎症性肠病包括：
109、以体重减轻为特征的炎症性肠病；或
110、以结肠缩短为特征的炎症性肠病；或
111、以结肠炎症为特征的炎症性肠病；或
112、以结肠溃疡为特征的炎症性肠病；或
113、以杯状细胞减少为特征的炎症性肠病；或
114、以促炎细胞因子ifn-γ、tnf-α或il-22浓度升高为特征的炎症性肠病；或
115、以肠道微生态失衡为特征的炎症性肠病；或
116、以血清lps浓度升高为特征的炎症性肠病。
117、[9]根据本发明目的的第一～七任一所述的方面，及任一所述方面的任一实施方案，所述的炎症性肠病包括溃疡性结肠炎、克罗恩病、和未定型结肠炎；
118、优选地，所述炎症性肠病为溃疡性结肠炎。
119、关于技术方案的进一步说明
120、本发明的任一方面的任一实施方案，在不出现矛盾的前提下，均可以与其他实施方案进行组合。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，在不出现矛盾的前提下，任一技术特征可以适用于其他实施方案中的该技术特征。
121、在不出现矛盾的前提下，本发明任一方面或该任一方面的任一实施方案所具有的任一技术特征同样适用其它任一实施方案或其它任一方面的任一实施方案，当然在相互之间适用时，必要时可对相应特征作适当修饰。下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。
122、本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。
123、除非另有说明，否则应当理解的是，列表中的每个单独元素和该列表中的单独元素的每个组合将被解释为不同的实施例。例如，表示为“a、b或c”的实施例的列表应被解释为包括实施例“a”、“b”、“c”、“a或b”、“a或c”、“b或c”或“a、b或c”。
124、在本公开中，冠词“一”、“一个”和“该”的单数形式还包括相应的复数个提及物，并且对特定数值的提及至少包括该特定值，除非上下文另有明确说明。因此，例如，对“物质”的提及是对这种物质及其等同物中的至少一种的提及。
125、包括诸如“第一”和“第二”的序数的术语可用于解释各种组件或者流体，但这些组件、流体不受这些术语的限制。因此，在没有背离本公开的教导的情况下，这些术语仅用于将该组件/流体与另一组件/流体区分开来。
126、当通过使用结合性术语“……和/或……”等来描述项目时，描述应被理解为包括相关联的所列项目中的任何一个以及其中的一个或多个的所有组合。
127、通常，术语“约”的使用表示可以根据通过所公开的主题所获得的期望特性而变化的近似值，并且将基于功能以依赖于上下文的方式来解释。因此，本领域普通技术人员将能够在个案的基础上解释一定程度的差异。在一些情况下，表达特定值时使用的重要数字的数量可以是用于确定由术语“约”允许的差异的代表性技术。在其它情况下，可以使用一系列值中的渐变来确定由术语“约”允许的差异的范围。进一步地，本公开中的所有范围都是包含性的和可组合的，并且对范围中所述的值的提及包括该范围内的每个值。
128、本发明中，术语“包含”或“含有”表示各种成分可一起应用于本发明的组合物中。因此，术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“包含”或“含有”中。
129、除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同；本文所使用的术语和/或包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
130、为了使本发明的技术方案和优势，下面将对本发明实施例中的技术方案进行完整的描述。
131、【本发明提供的以甲壳纲动物的壳体为原料进行含有蛋白质的提取物的提取方法】
132、所述方法包括以下步骤：
133、s1.利用酸液处理壳体得到处理液，所述酸液具有数值≤3的ph值；所述处理时间为12～24h；所述处理温度为4～8℃；
134、s2.利用碱调节所述处理液，得到提取物，所述提取物包括蛋白质；
135、在本发明上下文中，所述的“壳体”，其来源于甲壳纲动物，所述甲壳纲动物包括虾、蟹、龙虾及罗氏虾中的任意一种或者两种以上的组合；出于提取效果的考虑，建议对所述“壳体”进行破碎处理，使其呈粉末状，然后再利用所述“酸液”进行处理。
136、在本发明上下文中，所述的“虾”，例如可以举出：磷虾、对虾罗氏虾、基围虾等中的任何一种，或者任意混合的几种；
137、在本发明上下文中，所述的“蟹”，例如可以举出：雪蟹、中华绒螯蟹、梭子蟹等中的任何一种，或者任意混合的几种；
138、在本发明上下文中，所述的“龙虾”，例如可以举出：澳大利亚岩龙虾、波纹龙虾、黑白纹龙虾等中的任何一种，或者任意混合的几种；
139、在本发明上下文中，所述的“固液比”，是指所加固体原料的重量与液体介质的体积之比。比如，如前所述的固体原料为壳体，液体介质为酸液，二者的固液比为(1～10)g：(10～30)ml，也可以表示为(1～10)：(10～30)g/ml；再如下述实施例1中所述，固体原料为壳体，液体介质为酸液，二者的固液比为1g：20ml，也可以表示为1：20g/ml，或者表示为0.05g/ml，三者具有相同的意思表示。
140、在本发明上下文中，所述的“酸液”，包括“酸”，或者包括“酸和溶剂”；
141、在本发明上下文中，所述的“酸”，其种类没有特别限定。例如可以举出：乙酸、乳酸、盐酸。等中的任何一种，或者任意混合的几种作为“酸”使用；若所述“酸”本身为液态，且所具有的ph值满足使用要求，可直接作为“酸液”进行始于；
142、在本发明上下文中，所述的“溶剂”，其主要的作用是与“酸”混合，以形成满足要求的ph值的“酸液”，所述“溶剂”的种类没有特别限定。优选水作为“溶剂”使用。
143、更具体的，s2.中，所述“碱”优选配置成相应的“碱液”进行使用，一般要求所述“碱液”具有的ph值≥10。
144、在本发明上下文中，所述的“碱”，其主要的作用是调节所述“处理液”的酸碱度，以达到沉降得到提取物的目的。基于此，所述“碱”的种类例如可以举出：氢氧化钠、氢氧化钾中的任何一种，或者任意混合的几种作为“碱剂”使用。
145、基于上述s1.～s2.，本发明提供了由甲壳纲动物的壳体提取所得到的提取物，以及由甲壳纲动物的壳体提取所得到的提取物中含有的蛋白质。
146、在本发明上下文中，对于所得到的“提取物”，其包括蛋白质；
147、其中，所述“提取物”中含有的蛋白质，所述蛋白质为酸溶性蛋白；
148、并且，所述提取物中，所包含的蛋白质的质量占比不低于10％。
149、在本发明上下文中，所述的“提取物中含有的蛋白质的质量占比”，均是指所述“提取物”经过干燥处理后的，干重状态下的占比。
150、在本发明上下文中，所述的“蛋白质”，主要是指“具有大于10kda的分子量范围”。
151、【本发明提供的以甲壳纲动物的壳体为原料进行含有多肽的酶解产物的制备方法】
152、s3.利用胰蛋白酶对前述步骤s2.中所得到的提取物进行酶解操作，得到酶解产物，所述酶解产物包括多肽；
153、或者，利用胰蛋白酶对前述步骤s2.中所得到的提取物中的蛋白质进行酶解操作，得到酶解产物；所述酶解产物包括多肽。
154、更具体的，s3.中，首选，对s2.中得到的提取物进行干燥处理，然后，将胰蛋白酶和对干燥处理后的提取物加入到弱碱性溶液中，所述弱碱性溶液具有7～9的ph值，在37℃下进行酶解处理10～20h，酶解后对产物进行干燥处理，得到酶解产物；
155、按照质量比计算，所述提取物的用量与所述胰蛋白酶的用量之比为1000～2000；
156、并且，按照固液比计算，所述提取物与所述弱碱性溶液的混合比例为的混合比例为(1～10)g：(10～30)ml。
157、在本发明上下文中，所述的“弱碱性溶液”，例如可以举出浓度为0.05m的碳酸氢铵溶液、浓度为0.05m的碳酸氢钠溶液。
158、在本发明上下文中，所述的“提取物与所述弱碱性溶液的混合比例”，是指所述“提取物”经过干燥处理后的干重，与所述弱碱性溶液的混合比例。
159、在本发明上下文中，所述的“提取物与所述胰蛋白酶的混合比例”，是指所述“提取物”经过干燥处理后的干重，与所述胰蛋白酶的混合比例。
160、在本发明上下文中，所述的“干燥处理”，可以采样发方式有冷冻干燥、烘干、常温干燥等。从多肽活性保存的角度考虑，优选冷冻干燥。
161、在本发明上下文中，所得到的“酶解产物”，其包括多肽；其中，所述“酶解产物”中含有的多肽具有的分子量≤10kda；
162、并且，正常的室温温度(15～35℃)下，以10mg的酶解产物为一份，所述一份酶解产物在溶剂水中的溶解度不低于4mg/ml。例如，将所述10mg酶解产物，置于1ml溶剂水中，其能够溶解的量不低于4mg，主要是具有水溶性的多肽，其次是具有水溶性的蛋白质。即反映了，所述酶解产物所含有的水溶性多肽和水溶性蛋白质的合计占比量。
163、在本发明上下文中，所述的“所述的酶解产物在溶剂水中的溶解度”是指所述“酶解产物”经过干燥处理后，干重状态下在水中的溶解度。
164、在本发明上下文中，所述的酶解产物中含有的具有水溶性的多肽和蛋白质的质量占比不低于40％。
165、在本发明上下文中，所述的酶解产物中含有的多肽的质量占比不低于20％。
166、在本发明上下文中，所述的“酶解产物中含有的多肽的质量占比”、“所述的酶解产物中含有的具有水溶性的多肽和蛋白质的质量占比”，均是指所述“酶解产物”经过干燥处理后，干重状态下的占比。
167、基于上述s1.～s3.，本发明可以提供a～d四种物质：
168、a.由甲壳纲动物的壳体提取所得到的提取物；
169、b.由甲壳纲动物的壳体提取所得到的蛋白质；
170、c.由甲壳纲动物的壳体提取、酶解后所得到的提取物的酶解产物；
171、d.由甲壳纲动物的壳体提取、酶解后所得到的多肽。
172、应当理解为，所述a、b、c、d四种物质，中的任何一种物质、或者两种组合的组合物、或者三种组合的组合物、或者四种的组合物，都可以用于治疗炎症性肠病。在治疗炎症性肠病时的施用方式可以为经胃肠消化道给药，或者经注射给药，或者经皮下包埋给药方式给药；优选为经胃肠消化道给药。
173、通常是将其应用于制备用于治疗炎症性肠病的药物，得到含有相应物质，或者相应组合物的药物。
174、出于治疗效果更优的角度考虑，优选的方案是，c、d两种物质，中的任何一种物质、或者两种组合的组合物、或者与a(或b)构成的三种组合的组合物、或者与a和b构成的四种的组合物，都可以应用于制备用于治疗炎症性肠病的药物，得到含有相应物质，或者相应组合物的药物。此外，所述药物还可能包括药学上可接受的载体或辅料或药学上可接受的盐。
175、最终，制备所得的药物的剂型可以说粉剂、散剂、片剂、丸剂、胶囊剂、缓释剂、控速释剂、注射剂、输液剂或混悬剂。
176、在本发明上下文中，所述“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应))即有合理的效益/风险比的物质。
177、在本发明上下文中，所述“药学上可接受的盐”是指化合物与无毒性酸的酸的加成盐，包括无机酸、有机酸、碱金属或碱土金属等反应生成的盐。这些盐包括但不限于：
178、(1)与如下无机酸形成的盐：如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸；
179、(2)与如下有机酸形成的盐，如乙酸、草酸、丁二酸、酒石酸、甲磺酸、马来酸、或精氨酸。其它的盐包括与碱金属或碱土金属(如钠、钾、钙或镁)形成的盐，以酯、氨基甲酸酯，或其它常规的“前体药物”的形式。
180、在本发明上下文中，所述“药学上可接受的载体”是用于将本发明的物质或者组合物送给动物或人的药学上或食品上可接受的溶剂、悬浮剂或赋形剂。载体可以是液体或固体。
181、在本发明上下文中，所述“药学上可接受的载体或辅料”包括但不限于防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂等。
182、在本发明上下文中，所述药物可作为唯一的药物使用，或者可以与一种或多种其他生理活性上与本发明物质具有协同和/或增效作用的药物联合使用。联合治疗可通过将各个治疗组分同时、顺序或隔开给药来实现。
183、应当理解为，所述a、b、c、d四种物质，中的任何一种物质、或者两种组合的组合物、或者三种组合的组合物、或者四种的组合物，都可以用于治疗炎症性肠病。在治疗炎症性肠病时的施用方式可以为经胃肠消化道给药，或者经注射给药，或者经皮下包埋给药方式给药；优选为经胃肠消化道给药。
184、可改变本发明药物中各物质(a、b、c、d任何一种物质)或者组合物(a、b、c、d中任意两种的组合物、或者任意三种的组合物、或者任意四种的组合物)的实际剂量水平和给药方式，以便所得的活性物质量能有效针对具体患者得到所需的治疗反应。剂量水平须根据具体活性物质的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是，本领域的做法是，活性物质的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。
185、当用于上述本发明治疗和/或预防或其他治疗和/或预防时，治疗和/或预防有效量的一种本发明药物组合物可以以单独的形式应用。或者，本发明的药物可以与一种或多种药物可接受的载体或辅料的组合形式给药。
186、本发明中术语“治疗”意指出于抗击病症(例如疾病或障碍)的目的管理并护理患者。该术语预期包括对患者所患的给定病症的治疗的完整范围，例如给予组合物以缓解症状或并发症、以延迟病症的进展、和/或以治愈或消除该病症。
187、本发明中术语“治疗和/或预防有效量”的本发明药物组合物指足以在包括给予所述组合物的治疗性介入中治愈、缓解或部分阻止给定疾病及其并发症的临床表现的量。将足以实现以上的量定义为“治疗和/或预防有效量”。用于各目的的有效量将取决于疾病或损伤的严重程度以及受试者的体重及一般状态。但应认识到，本发明药物组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体药物的活性；所采用的具体药物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体药物组合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的药物组合使用或同时使用的其它药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，药物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。
188、在本发明中使用的药物中的物质(a、b、c、d任何一种物质)或者组合物(a、b、c、d中任意两种的组合物、或者任意三种的组合物、或者任意四种的组合物)，可以单剂量或多剂量作为药剂单独给予，或者与药学上可接受的载体或辅料组合给予。根据本发明的药物可以用药学上可接受的载体或辅料以及任何其他已知的佐剂和赋形剂根据常规技术配制。
189、有益效果
190、(1)以虾壳为例，所述甲壳纲动物壳体中包含丰富的几丁质、蛋白质和无机化合物等生物资源，其中蛋白质在常规的壳聚糖制备过程中会被强酸或强碱去除，造成一定程度上的资源浪费。基于此，本发明提供了一种自甲壳纲动物壳体进行提取、并进一步进行酶解处理得到相应多肽的方法，所述方法可以实现诸如甲壳纲动物壳体中蛋白质的利用，避免了资源的浪费；
191、(2)目前为止几乎没有关于甲壳纲动物壳体中的废弃蛋白质及其提取物多肽，在炎症性肠病中的研究报道。本发明首次首提供了来源于甲壳纲动物壳体中的蛋白质，尤其是酶解处理后的多肽，在治疗炎症性肠病方面的应用，并且经本发明研究表明来源于甲壳纲动物壳体中的蛋白质，尤其是酶解处理后的多肽在炎症性肠病的治疗方面具有很好的应用前景，尤其适合炎症性肠病的口服治疗。
192、(3)实际上，生物体在空腹状态下，胃酸的ph值可低于3，甚至是低于2，进食时，由于水分、食物的加入，包括胃酸分泌，会发生ph值的迅速上升，在胃排空的高峰期可能居于偏中性，ph值为7.0，而食物排空后，又可以迅速下降。本发明提供的来源于甲壳纲动物壳体中的废弃蛋白，尤其是酶解处理后的多肽，其首先通过酸碱法先提取甲壳纲动物壳体中的酸溶性蛋白，再将所得蛋白进行酶解，制备出虾肽(即多肽)混合物。基于此，本发明的工艺，一方面，可以结合甲壳纲动物壳体进行壳聚糖提取的工艺，实现常规的壳聚糖提取过程中会被强酸或强碱去除的废弃蛋白的再利用；另一方面，经过强酸、碱与胰蛋白酶的处理后(一定程度上接近体内胃肠消化的过程)，得到的多肽，经证明应用过程中，具有良好的体内代谢稳定性和生物利用度。
193、说明书附图
194、图1为本发明实施例2、3中不同组小鼠的体重变化图；
195、图2为本发明实施例2、3中不同组小鼠的结肠长度变化图；
196、图3为本发明实施例2、3中不同组小鼠的脾脏系数变化图；
197、图4为本发明实施例2、3中为不同组小鼠的血清lps浓度图；
198、图5为本发明实施例1-1中，液质联用分析识别的特征多肽；
199、图6为本发明实施例1-1、1-2中，不同的酶解时间下，所得酶解产物中肽的含量；
200、图7为本发明实施例1-1、1-2中，不同的酶解时间下，所得酶解产物的样品sds-page电泳图；
201、图8为实施例1-1中，所得酶解产物中肽的特征分子量maldi-tof-ms分析。
1.甲壳纲动物的壳体提取物在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的用途，其特征在于，
2.根据权利要求1所述的甲壳纲动物的壳体提取物在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的用途，其特征在于，所述的甲壳纲动物的壳体提取物作为唯一有效成分用于治疗炎症性肠病的药物的制备。
3.一种治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述药物的有效成分包括：
4.根据权利要求3所述的治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述药物的有效成分为：
5.根据权利要求3或者4任一所述的治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述药物的有效成分的量或者待施用的剂量为100～500mg/kg；和/或，
6.根据权利要求5所述的治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述药物每日施用一次、两次或三次。
7.根据权利要求5所述的治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述药物的剂型包括粉剂、散剂、片剂、丸剂、胶囊剂、缓释剂、控速释剂、注射剂、输液剂或混悬剂。
8.根据权利要求5所述的治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述药物在临床上的给药方式为：
9.根据权利要求1或2任一所述的甲壳纲动物的壳体提取物的用途，或者根据权利要求3～8任意一项中所述的治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述炎症性肠病包括：
10.根据权利要求1或2任一所述的甲壳纲动物的壳体提取物的用途，或者根据权利要求3～8任意一项中所述的治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述炎症性肠病包括：
