本发明涉及生物，尤其涉及一种牛孤雌单倍体干细胞及其获取方法与培养液。
背景技术：
1、在有性生殖过程中，精卵结合形成受精卵，胚胎在双亲的遗传物质调控下发育成一个完整的个体，即哺乳动物都是二倍体。通过受精卵可以获得胚胎干细胞（embryonicstem cell，escs），escs具有可自我更新、多向分化以及在体外无限增殖的特性，在医学和生物学研究上起到重要作用。
2、卵母细胞在没有精子参与的情况下，通过化学激活或者是电激活可以发育到囊胚，从囊胚中可获得孤雌单倍体干细胞（parthenogenetic haploid embryonic stemcells，pg-haescs），仅含一套染色体。这些pg-haescs与escs有很多相似特性，是一种未分化的多能干细胞，并且因其产生纯合基因型的优势，已经应用于哺乳动物细胞层面的基因筛选。目前在人、猴、小鼠等动物上均已获得pg-haescs，并且也有了一定水平的研究，但在大型家畜上如牛，pg-haescs细胞系的建立仍属空白。
3、因此，现有技术还有待于改进和发展。
技术实现思路
1、鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种牛pg-haescs及其获取方法与培养液，旨在解决现有牛pg-haescs细胞系的建立仍属空白的问题。
2、本发明的技术方案如下：
3、本发明的第一方面，提供一种适用于牛pg-haescs生长的培养液，其中，所述培养液包括基础培养液和facx培养液，所述基础培养液为mtesr1基础培养液（购于stemcell，85850），所述facx培养液包括成纤维细胞生长因子 2（fgf2）、激活素 a （activin a）、chir99021（cas号：252917-06-9）和xav939（cas号：284028-89-3），
4、所述培养液通过以下方法制备得到：向每500 ml mtesr1基础培养液中添加10-20ng/ml fgf2，1.5-2.5 μm activin a，3-5 μm chir99021，1.5-3 μm xav939。
5、本发明的第二方面，提供一种牛pg-haescs的获取方法，其中，包括：
6、步骤1、将从牛卵巢中得到的卵母细胞进行体外成熟；
7、步骤2、挑取成熟卵母细胞进行孤雌激活，得到孤雌胚胎；
8、步骤3、将所述孤雌胚胎进行体外培养，得到孤雌囊胚；
9、步骤4、将所述孤雌囊胚在本发明所述的适用于牛pg-haescs生长的培养液中培养，得到牛pg-haescs。
10、可选地，所述步骤1具体包括：将从牛卵巢中得到的卵母细胞在体外成熟液中培养20-22 h，利用透明质酸酶脱除卵丘颗粒细胞，挑选排出第一极体的成熟卵母细胞。
11、可选地，所述步骤2具体包括：通过离子霉素激活成熟卵母细胞，得到孤雌胚胎。
12、可选地，所述步骤2具体包括：将挑取出的成熟卵母细胞置于5-10 μmol/l的离子霉素（ionomycin，i）中处理10 min后，放入10-20 μg/ml放线菌铜（cycloheximide，chx），在38.5°c、5%co2饱和湿度条件下培养4-6 h，得到孤雌胚胎。
13、可选地，所述步骤3具体包括：将所述孤雌胚胎在体外g1培养液（购于vitrolife，是一种含有透明质酸的碳酸氢盐缓冲培养基）中培养72 h，然后转移到g2培养液（购于vitrolife，为胚胎提供多种氨基酸和透明质酸，以优化囊胚发育）中，在38.5°c、5%co2饱和湿度条件下培养7.5 d至囊胚，得到孤雌囊胚。
14、可选地，所述步骤4具体包括：将所述孤雌囊胚在本发明所述的适用于牛pg-haescs生长的培养液中培养，通过流式细胞仪分选出牛pg-haescs。
15、可选地，所述步骤4具体包括：将所述孤雌囊胚在本发明所述的适用于牛pg-haescs生长的培养液中培养；通过赫斯特荧光染料33342（hoechst 33342）对培养得到的干细胞进行染色；然后对细胞过筛，去除粘连细胞，再利用流式细胞仪分选出牛pg-haescs。
16、本发明的第三方面，提供一种牛pg-haescs，其中，采用本发明所述的牛孤雌单倍体干细胞的获取方法获取得到。
17、有益效果：本发明提供了一种适用于牛pg-haescs生长的培养液，获得了牛孤雌单倍体干细胞，建立了牛孤雌单倍体干细胞细胞系。本发明所述牛孤雌单倍体干细胞的整个基因组来源于卵母细胞，具有干细胞的自我复制能力与多能性，得到的细胞系为单倍体细胞系，可用于细胞层面的基因筛选。
1.一种适用于牛孤雌单倍体干细胞生长的培养液，其特征在于，所述培养液包括基础培养液和facx培养液，所述基础培养液为mtesr1基础培养液，所述facx培养液包括fgf2、activin a、chir99021和xav939，
2.一种牛孤雌单倍体干细胞的获取方法，其特征在于，包括：
3.根据权利要求2所述的牛孤雌单倍体干细胞的获取方法，其特征在于，所述步骤1具体包括：将从牛卵巢中得到的卵母细胞在体外成熟液中培养20-22 h，利用透明质酸酶脱除卵丘颗粒细胞，挑选排出第一极体的成熟卵母细胞。
4.根据权利要求2所述的牛孤雌单倍体干细胞的获取方法，其特征在于，所述步骤2具体包括：通过离子霉素激活成熟卵母细胞，得到孤雌胚胎。
5.根据权利要求4所述的牛孤雌单倍体干细胞的获取方法，其特征在于，所述步骤2具体包括：将挑取出的成熟卵母细胞置于5-10 μmol/l的离子霉素中处理10 min后，放入10-20 μg/ml放线菌铜，在38.5°c、5%co2饱和湿度条件下培养4-6 h，得到孤雌胚胎。
6.根据权利要求2所述的牛孤雌单倍体干细胞的获取方法，其特征在于，所述步骤3具体包括：将所述孤雌胚胎在体外g1培养液中培养72 h，然后转移到g2培养液中，在38.5°c、5%co2饱和湿度条件下培养7.5 d至囊胚，得到孤雌囊胚。
7.根据权利要求2所述的牛孤雌单倍体干细胞的获取方法，其特征在于，所述步骤4具体包括：将所述孤雌囊胚在权利要求1所述的适用于牛孤雌单倍体干细胞生长的培养液中培养；通过hoechst 33342对培养得到的干细胞进行染色；然后对细胞过筛，去除粘连细胞，再利用流式细胞仪分选出牛孤雌单倍体干细胞。
8.一种牛孤雌单倍体干细胞，其特征在于，采用权利要求2-7任一项所述的牛孤雌单倍体干细胞的获取方法获取得到。
