本发明涉及贝类幼虫期壳分离，特别涉及一种贝类幼虫期快速、高效的壳分离方法。
背景技术：
1、自前寒武纪时期以来，动物逐渐进化出丰富多样的、具有不同生物学功能的生物矿化结构，被认为是动物进化史上的重大革新之一。软体动物的壳是生物矿化骨骼的主要类型之一，其形成过程也是最具代表性的生物矿化过程之一，被认为是研究矿化骨骼的理想模型。
2、全面了解壳的形成过程有助于我们深入理解有壳类软体动物的系统发育关系，并协助完善现有的生物矿化模型。相对于幼虫期壳，成体壳具备易观察、可通过解剖学手段与软组织分离等特点，实验操作简单，因而目前与壳相关的研究主要集中在成体壳上。例如，对软体动物成体壳有机成分和基质蛋白的研究，以及对成体壳的高通量dna测序、宏基因组学等相关研究。
3、幼虫期壳的形成是软体动物壳形成的基础，然而，由于软体动物在其幼虫期壳初始形成阶段体型微小，多在微米级，无法利用解剖学手段进行壳与软组织分离等实验操作，所以对幼虫期壳的相关研究还极其匮乏。因此，如何面对技术层面的挑战，成功分离出足够量的、软体组织污染尽量少的幼虫期壳，是研究软体动物幼虫期壳初始形成的基础。在珠母贝和牡蛎中，研究人员使用1m naoh溶液作为裂解液对其幼虫期壳进行初步分离，但此方式需要过夜处理，长时间的处理过程可能会破坏壳内结构和成分，而且此方法处理的壳上软体组织残留较为严重。
4、因此，针对上述问题提出一种贝类幼虫期快速、高效的壳分离方法。
技术实现思路
1、本发明的目的是建立一种贝类幼虫期快速、高效的壳分离方法，缩短解离时间，减少对壳内结构和成分的破坏，并降低分离后壳的软体组织污染，以弥补现有技术的不足，有效解决贝类幼虫期壳分离的技术难题。
2、为了实现上述目的，本发明具体通过以下技术方案实现：
3、一种贝类幼虫期快速、高效的壳分离方法，包括以下步骤：
4、s1、取扇贝幼虫，置于离心管中，洗涤幼虫，去除海水等残留；
5、s2、洗涤后将裂解液加入离心管中，进行旋转裂解，分离壳与软组织；所述裂解液使用异硫氰酸胍、月桂酰基肌氨酸钠和柠檬酸钠溶液配制，所述裂解液中异硫氰酸胍的浓度为3.5-4.5 mol/l、月桂酰基肌氨酸钠的浓度为15-20 mmol/l；
6、s3、幼虫壳收集和冲洗；
7、s4、幼虫壳分离程度检测。
8、进一步的，所述柠檬酸钠溶液的浓度为0.8-1.2 mol/l，每升裂解液加入柠檬酸钠溶液20-30ml。
9、进一步的，所述柠檬酸钠溶液的浓度为1 mol/l，每升裂解液加入柠檬酸钠溶液25ml。
10、进一步的，所述裂解液中异硫氰酸胍的浓度为4mol/l、月桂酰基肌氨酸钠的浓度为17mmol/l。
11、进一步的，步骤s2中，所述裂解时间为2-4h，裂解温度为3-5℃。更进一步的，4℃旋转裂解3h。
12、进一步的，扇贝幼虫和裂解液的体积比为50-100ul：1-2ml。
13、更进一步的，所述离心管的体积为2-50ml。
14、进一步的，步骤s3中具体操作为：将装有幼虫壳的离心管静置5-10min，分离后的壳分布在中间层；用吸管吸除上层液体，将中间层幼虫壳吸取到新的离心管中，用3x pbs溶液上下颠倒洗涤幼虫壳；将离心管垂直放置，静置5-10min，幼虫壳聚集在离心管底部，用吸管吸除上层洗涤液，重复洗涤3-5次。
15、进一步的，步骤s4中，取洗涤后的幼虫期壳于显微镜下观察，检测幼虫壳的分离程度，确认壳上无软体组织残留。
16、进一步的，步骤s1中，用3×pbs溶液冲洗2-3次。
17、本发明的优点和有益效果为：
18、本发明开发了一种贝类幼虫期快速、高效的壳分离方法，分离时间大大缩短，减少了对壳内结构和成分的破坏，且分离后壳的软体组织污染少。另外，使用本方法分离得到的幼虫期壳能够提取完整的dna，经高通量测序文库库检合格。本发明有效地解决了贝类幼虫期壳分离的技术难题，为幼虫期壳的基因组学、转录组学、蛋白质组学以及代谢组学等相关研究提供基础，为理解软体动物壳的形成及系统发育关系具有重要意义。
1.一种贝类幼虫期快速、高效的壳分离方法，其特征在于：包括以下步骤：
2. 根据权利要求1所述的一种贝类幼虫期快速、高效的壳分离方法，其特征在于：步骤s2中，所述柠檬酸钠溶液的浓度为0.8-1.2 mol/l，每升裂解液加入柠檬酸钠溶液20-30ml。
3. 根据权利要求2所述的一种贝类幼虫期快速、高效的壳分离方法，其特征在于：步骤s2中，所述柠檬酸钠溶液的浓度为1 mol/l，每升裂解液加入柠檬酸钠溶液25ml。
4.根据权利要求1所述的一种贝类幼虫期快速、高效的壳分离方法，其特征在于：步骤s2中，所述裂解液中异硫氰酸胍的浓度为4mol/l、月桂酰基肌氨酸钠的浓度为17mmol/l。
5.根据权利要求1所述的一种贝类幼虫期快速、高效的壳分离方法，其特征在于：步骤s2中，所述裂解的时间为2-4h，裂解温度为3-5℃。
6.根据权利要求5所述的一种贝类幼虫期快速、高效的壳分离方法，其特征在于：步骤s2中，所述裂解的具体操作为：4℃旋转裂解3h。
7.根据权利要求1所述的一种贝类幼虫期快速、高效的壳分离方法，其特征在于：扇贝幼虫和裂解液的体积比为50-100ul：1-2ml。
8. 根据权利要求1所述的一种贝类幼虫期快速、高效的壳分离方法，其特征在于：步骤s3中具体操作为：将装有幼虫壳的离心管静置5-10min，分离后的壳分布在中间层；用吸管吸除上层液体，将中间层幼虫壳吸取到新的离心管中，用3x pbs溶液上下颠倒洗涤幼虫壳；将离心管垂直放置，静置5-10min，幼虫壳聚集在离心管底部，用吸管吸除上层洗涤液，重复洗涤3-5次。
9.根据权利要求1所述的一种贝类幼虫期快速、高效的壳分离方法，其特征在于：步骤s4中，取洗涤后的幼虫期壳于显微镜下观察，检测幼虫壳的分离程度。
10. 根据权利要求1所述的一种贝类幼虫期快速、高效的壳分离方法，其特征在于：步骤s1中，所述洗涤幼虫具体为：用3x pbs溶液洗涤幼虫。
