本发明涉及生物医疗，尤其涉及一种便于胃肠吸收的人源脐带血干细胞组合物的制备方法。
背景技术：
1、干细胞疗法在再生医学和疾病治疗中具有巨大潜力；然而传统的干细胞疗法主要依赖于侵入性手段，如静脉注射或局部注射，限制了其大规模应用，为了实现更便捷的治疗方式，研究者们近年来开始探索通过胃肠道吸收的干细胞制剂，以实现更便捷的口服治疗。
2、现有研究与数据表明，传统口服制剂的胃肠道吸收效率较低，仅约为10-20％，主要是由于胃酸和消化酶对干细胞的破坏作用；而通过包覆技术或添加保护性多肽，可以将吸收率提高至30％以上；
3、此外口服吸收的干细胞其生物活性往往会显著下降，虽然已有研究尝试通过基因修饰提高干细胞的抗逆性和活性，但效果仍有待优化，经过修饰的干细胞在体内的存活率仅提高了约50％；临床效果有限，在小鼠模型中，口服干细胞显示出一定的肠胃损伤修复作用，但修复效率仅提高了约40％；现有方案虽在提升口服干细胞吸收率和生物活性方面取得了一定进展，但仍需进一步优化；因此亟需一种便于胃肠吸收的人源脐带血干细胞组合物的制备方法来解决此类问题。
技术实现思路
1、为此，本发明提供一种便于胃肠吸收的人源脐带血干细胞组合物的制备方法，用以克服现有技术中口服干细胞在胃肠道中的吸收率较低，难以达到有效的治疗剂量，胃酸和消化酶会破坏干细胞，导致其生物活性下降的问题。
2、为实现上述目的，本发明提供一种便于胃肠吸收的人源脐带血干细胞组合物的制备方法，包括：
3、所述干细胞组合物包括以下成分：
4、(i)，seq id no.1、seq id no.2、seq id no.3多肽或与其多肽序列同源性至少为70％的序列；
5、或(ii)，seq id no.1、seq id no.2、seq id no.3编码多肽的多核苷酸序列或与其核苷酸序列同源性至少为85％的序列；
6、所述多肽为小分子肽：seq id no.1：sfhrlhlwkalkk、seq id no.2：veiphsfhvedd、seq id no.3：ffgvrkkpwklak。
7、进一步地，所述干细胞组合物的组合物还包括多功能诱导干细胞系。
8、进一步地，所述多功能诱导干细胞系来源于间充质干细胞。
9、进一步地，所述多肽制备方法为：
10、步骤s1，将鹿茸切碎制成基底纤维粉末；
11、步骤s2，在室温条件下，使用乙醇提取相容性聚合物载体并经过过滤，用水浴和旋转真空蒸发器进行浓缩处理；
12、步骤s3，将浓缩后的溶液与水解酶进行混合反应；
13、步骤s4，通过发酵菌对过滤浓缩的物质进行处理；
14、步骤s5，将浓缩后的发酵液体进行超滤处理，并在得到活性提取物后进行冷冻干燥；
15、步骤s6，对步骤s5中的提取产物用反相高效液相色谱法进行检测，并对多肽进行测序。
16、进一步地，步骤s3中，酶解阶段水解酶质量配比为中胃蛋白酶10-25份、a-胰凝乳蛋白酶5-10份。
17、进一步地，步骤s4中，发酵菌为质量配比为1-5:5-10的酵母菌和乳酸菌。
18、进一步地，步骤s5中，浓缩超滤处理在室温环境下进行，将2,500ml的75％浓度ethanol溶液以1:5(w/v)的稀释比例与粉末混合，并在24小时内进行提取，利用截留分子量为1kda的陶瓷膜进行过滤，接着在40℃的水浴中使用旋转真空蒸发器进行浓缩处理。
19、进一步地，步骤s5中，超滤处理的所述活性提取物为小于1-2kda的馏分。
20、进一步地，步骤s6使用c18柱、以乙腈作为流动相，两种流动相中乙腈的浓度分别为10％和90％。
21、进一步地，步骤s6中样品量为2500μl，流速为30ml/min，检测波长为210nm，观察洗脱峰，并将洗脱峰分别进行质谱分析。
22、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
23、本发明，通过使用小分子肽(seq id no.1、seq id no.2、seq id no.3)有效保护干细胞免受胃酸和酶的破坏，显著提升吸收率。
24、本发明，针对口服吸收的干细胞其生物活性会显著下降，即使通过基因修饰，干细胞在体内的存活率提升有限一问题进行优化，通过基因修饰和多肽保护的双重手段，显著增强干细胞的抗逆性和活性，使得干细胞在体内的存活率得以提高，使得干细胞在通过胃肠道吸收后仍能保持较高的生物活性，从而增强其治疗效果。
25、本发明，通过色谱法分析显示采用复合酶和复合发酵菌的组合物在分子量分布上更为均匀，且低分子量蛋白质水解产物(小于1000u)的比例较高，得率大幅提升；采用复合酶和复合发酵菌的组合物苦味显著降低，感官品质得到明显改善；本发明所提供的制备方法不仅提高了产品的得率，还改善了产品的口感，使其更适合口服应用。
26、本发明中所提供方法制备的干细胞组合物具有增强免疫力的效果，尤其是在提升抗氧化酶活性方面表现突出。
27、本发明中所提供的小分子肽能够显著促进成骨细胞的增殖，且其效果随着剂量的增加而增强，在2μmol/l浓度下表现最为显著；干细胞组合物在促进骨组织再生方面具有一定潜力。
28、解决了现有技术中口服干细胞在胃肠道中的吸收率较低，难以达到有效的治疗剂量，胃酸和消化酶会破坏干细胞，导致其生物活性下降的问题。
1.一种便于胃肠吸收的人源脐带血干细胞组合物的制备方法，其特征在于，
2.根据权利要求1所述的一种便于胃肠吸收的人源脐带血干细胞组合物的制备方法，其特征在于，所述干细胞组合物的组合物还包括多功能诱导干细胞系。
3.根据权利要求2所述的一种便于胃肠吸收的人源脐带血干细胞组合物的制备方法，其特征在于，所述多功能诱导干细胞系来源于间充质干细胞。
4.根据权利要求3所述的一种便于胃肠吸收的人源脐带血干细胞组合物的制备方法，其特征在于，所述多肽制备方法为：
5.根据权利要求4所述的一种便于胃肠吸收的人源脐带血干细胞组合物的制备方法，其特征在于，步骤s3中，酶解阶段水解酶质量配比为中胃蛋白酶10-25份、a-胰凝乳蛋白酶5-10份。
6.根据权利要求5所述的一种便于胃肠吸收的人源脐带血干细胞组合物的制备方法，其特征在于，步骤s4中，发酵菌为质量配比为1-5:5-10的酵母菌和乳酸菌。
7.根据权利要求6所述的一种便于胃肠吸收的人源脐带血干细胞组合物的制备方法，其特征在于，步骤s5中，浓缩超滤处理在室温环境下进行，将2,500ml的75％浓度ethanol溶液以1:5(w/v)的稀释比例与粉末混合，并在24小时内进行提取，利用截留分子量为1kda的陶瓷膜进行过滤，接着在40℃的水浴中使用旋转真空蒸发器进行浓缩处理。
8.根据权利要求7所述的一种便于胃肠吸收的人源脐带血干细胞组合物的制备方法，其特征在于，步骤s5中，超滤处理的所述活性提取物为小于1-2kda的馏分。
9.根据权利要求8所述的一种便于胃肠吸收的人源脐带血干细胞组合物的制备方法，其特征在于，步骤s6使用c18柱、以乙腈作为流动相，两种流动相中乙腈的浓度分别为10％和90％。
10.根据权利要求9所述的一种便于胃肠吸收的人源脐带血干细胞组合物的制备方法，其特征在于，步骤s6中样品量为2500μl，流速为30ml/min，检测波长为210nm，观察洗脱峰，并将洗脱峰分别进行质谱分析。
