本发明涉及疫苗佐剂，特别涉及一种用于新城疫hn基因重组dna核酸疫苗的铝镁水滑石(ldh)-黄秋葵多糖纳米复合佐剂及其制备方法和应用。
背景技术：
1、作为一种由新城疫病毒(newcastledisease virus，ndv)引起的高度致病性的传染病，新城疫(newcastle disease，nd)能引起鸡、火鸡、鸭、鸽子和鹦鹉等多种禽类的感染和死亡，具有发病急、致死率高、传染性性强的特点，给世界养禽业造成巨大损失，属于ⅰ类传染病，也是家禽中第四大问题性疾病，仅次于高致病性禽流感、禽传染性支气管炎和低致病性流感。据报道，除家禽外，ndv至少还可以感染26种其他禽类，其主要通过呼吸道和消化道感染。
2、疫苗仍然是新城疫主要的防控手段，用于防治新城疫的疫苗包括灭活疫苗和减毒活疫苗两种类型。尽管灭活疫苗和减毒活疫苗可以在禽类中起到良好的预防作用，但其都存在一些缺点。灭活疫苗接种后能产生高水平的抗体，但不出现iga和igg，且igg不能转运到肺部。弱毒疫苗经滴鼻、点眼、气雾免疫后不仅能在呼吸道、消化道及哈德氏腺刺激产生分泌型iga和igg，还可产生高水平的igg抗体，但是弱毒疫苗会向环境中排毒，在高度的免疫和消毒下容易产生病毒基因突变。
3、随着基因工程技术发展，利用基因工程技术开发的新型核酸疫苗(dna疫苗)以其无致病性、研制简单、不受母源抗体干扰、能够激活体液与细胞免疫等诸多优点成为现代疫苗的研究热点，但研究也发现核酸疫苗存在着免疫方式有限、免疫原性低，在体内容易被降解，且免疫效果较差常需高剂量多次免疫等问题，选取合适的佐剂作为递送载体以将dna疫苗与佐剂相负载，增强dna疫苗免疫原性，提高免疫效果已成为研究人员亟待解决的问题之一。
技术实现思路
1、本发明的目的是提供一种新城疫dna疫苗纳米复合佐剂，既可以作为载体保护dna疫苗免受降解，又可以增加其免疫活性，能增强动物免疫功能，提高动物的抗病力和疫苗的保护率，因而在预防和控制动物传染性疾病上有很大的推广价值。
2、本发明所采用的技术方案：
3、一种新城疫dna疫苗纳米复合佐剂，包括剂a和剂b,所述剂a是铝镁水滑石纳米颗粒(ldh)溶液，所述剂b是黄秋葵多糖rps-1溶液。
4、优选地，所述铝镁水滑石纳米颗粒与黄秋葵多糖rps-1的质量比为10～15:1。
5、优选地，所述黄秋葵多糖rps-1的分子量为600kda。
6、本发明的另一目的是提供一种上述新城疫dna疫苗纳米复合佐剂的制备方法，包括铝镁水滑石纳米颗粒的合成和黄秋葵多糖rps-1的提取，具体步骤过程如下：
7、s1、铝镁水滑石纳米颗粒的合成
8、s11、配置六水合氯化镁与六水合氯化铝的混合溶液，得到溶液a；配置氢氧化钠溶液，得到溶液b；
9、s12、将溶液a加入溶液b中，混匀后离心，弃上清，重复数次“加入去离子水、离心、弃上清”的过程以纯化体系，然后加入去离子水并转移至水热釜中，在高温条件下反应，得到的ldh溶液。
10、s2、黄秋葵多糖rps-1的提取
11、s21、取新鲜黄秋葵果实，洗净后捣碎，加去离子水搅拌均匀，浸泡过夜，离心，得到上清液和沉淀；沉淀分别用蒸馏水重复提取两次，合并上清液，浓缩，离心后收集上清并加入95％乙醇至乙醇终体积分数为65％，静置过夜，离心，沉淀用蒸馏水复溶，4300r/min离心5min，上清冻干，得黄秋葵水溶总多糖(rps)；
12、s22、取冻干的粗多糖(rps)用sevag试剂进行脱蛋白处理后获得脱蛋白多糖(drps)；脱蛋白多糖用蒸馏水溶解，离心，取上清液上deae-cellulose层析柱(8.0×20cm)，经蒸馏水、0.25m pbs洗脱，收集洗脱液得黄秋葵多糖rps-1溶液。
13、优选地，所述步骤s11中，所述溶液a中六水合氯化镁的含量为60～65mg/ml，六水合氯化铝配的含量为24～25mg/ml；
14、优选地，所述步骤s11中，所述溶液b中氢氧化钠的含量为30～35mg/ml。
15、优选地，所述步骤s12中，所述高温条件下反应是指在110～130℃下反应13～16h。
16、优选地，所述步骤s22中，所述黄秋葵多糖rps-1的分子量为600kda。
17、本发明的再一目的在于提供上述新城疫dna疫苗纳米复合佐剂在防治新城疫方面的应用，尤其是提供新城疫dna疫苗纳米复合佐剂作为负载剂与新城疫核酸疫苗配合使用。
18、本发明以复合的形式将铝镁水滑石与黄秋葵多糖rps-1相结合，可作为新城疫dna疫苗的免疫增强剂，与新城疫疫苗核酸疫苗配合使用，既可以作为载体保护dna疫苗免受降解，又可以增加其免疫活性，能增强动物免疫功能，提高动物的抗病力和疫苗的保护率，在预防和控制动物传染性疾病上有很大的推广价值。
1.一种新城疫dna疫苗纳米复合佐剂，其特征在于：包括剂a和剂b,所述剂a是铝镁水滑石纳米颗粒溶液，所述剂b是黄秋葵多糖rps-1溶液。
2.根据权利要求1所述的新城疫dna疫苗纳米复合佐剂，其特征在于：所述铝镁水滑石纳米颗粒与黄秋葵多糖rps-1的质量比为10～15:1。
3.根据权利要求1所述的新城疫dna疫苗纳米复合佐剂，其特征在于：所述黄秋葵多糖rps-1的分子量为600kda。
4.一种权利要求1所述的新城疫dna疫苗纳米复合佐剂的制备方法，其特征在于，包括铝镁水滑石纳米颗粒的合成和黄秋葵多糖rps-1的提取，具体步骤过程如下：
5.根据权利要求4所述的新城疫dna疫苗纳米复合佐剂的制备方法，其特征在于：所述步骤s11中，所述溶液a中六水合氯化镁的含量为60～65mg/ml，六水合氯化铝配的含量为24～25mg/ml。
6.根据权利要求4所述的新城疫dna疫苗纳米复合佐剂的制备方法，其特征在于：所述步骤s11中，所述溶液b中氢氧化钠的含量为30～35mg/ml。
7.根据权利要求4所述的新城疫dna疫苗纳米复合佐剂的制备方法，其特征在于：所述步骤s12中，所述高温条件下反应是指在110～130℃下反应13～16h。
8.根据权利要求4所述的新城疫dna疫苗纳米复合佐剂的制备方法，其特征在于：所述步骤s22中，所述黄秋葵多糖rps-1的分子量为600kda。
9.权利要求1所述的新城疫dna疫苗纳米复合佐剂在防治新城疫方面的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述新城疫dna疫苗纳米复合佐剂作为负载剂与新城疫核酸疫苗配合使用。
