本发明属于细胞培养，具体涉及一种可用于细胞培养的海藻酸钠基复合物及制备方法。
背景技术：
1、海藻酸钠具有良好的生物相容性和剪切稀化性能，是3d打印的良好材料，然而海藻酸钠本身带有负电荷，不利于细胞的黏附，因此，无法作为细胞支架材料。将海藻酸钠进行改性处理后，使之能实现细胞黏附，对于其在组织工程中的应用具有重要意义，而海藻酸钠表面的羧基具有良好的反应活性，对于材料的复合及相关活性物质的负载具有重要意义。因此，亟待发展一种方法将海藻酸钠作为细胞黏附和生长的基底材料，从而实现海藻酸钠在生物细胞领域的功能化应用。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中的问题，本发明提出以海藻酸钠为基质，以聚赖氨酸为改性剂，利用维a酸作为细胞分化诱导剂，通过合理的调配，实现神经细胞的培养和分化诱导。
2、为了实现上述目的，本发明提供一种可用于细胞培养的海藻酸钠基复合物的制备方法，包括以下步骤：
3、(1)将海藻酸钠均匀分散于水中得到海藻酸钠水凝胶，向所述海藻酸钠水凝胶中加入cacl2水溶液，均质处理，得到海藻酸钠与钙离子的复合凝胶；钙离子的加入能提高水凝胶的机械强度，中和海藻酸钠部分正电荷，防止后续沉淀的形成；
4、(2)将多聚赖氨酸溶于水和dmso的混合溶剂中，并通过醋酸缓冲液调节ph，得到多聚赖氨酸溶液；
5、(3)将步骤(1)中所述的复合凝胶与步骤(2)中所述的多聚赖氨酸溶液混合，加入edc/nhs作为催化剂，得到反应体系，高速搅拌，冰浴反应，反应结束后冷冻干燥去除溶剂，得到固体材料；
6、(4)将所述固体材料复水后加入维a酸，充分混合，冷冻干燥，得到所述海藻酸钠基复合物。
7、优选的，步骤(1)所述海藻酸钠水凝胶中海藻酸钠的质量分数为1-3％。
8、优选的，步骤(1)所述cacl2水溶液的质量分数为0.5-1.5％，cacl2水溶液的体积为海藻酸钠水凝胶体积的1/20-1/10。
9、优选的，步骤(2)中所述的多聚赖氨酸溶液中多聚赖氨酸的质量分数为0.1-0.5％。
10、优选的，步骤(2)中ph为6.0。
11、优选的，步骤(2)的混合溶剂中水和dmso的体积比例为1:1。
12、优选的，步骤(3)中所述复合凝胶和多聚赖氨酸溶液的体积比为1:1。
13、优选的，步骤(3)的反应体系中edc和nhs的浓度均为0.1m。
14、优选的，步骤(3)中冰浴反应2天。
15、优选的，步骤(4)中所述固体材料和维a酸的质量比为100:1～200:1。
16、本发明还提供由上述方法制备得到的海藻酸钠基复合物。
17、本发明还提供所述海藻酸钠基复合物的应用，用于培养细胞，应用方法包括以下步骤：
18、将所述海藻酸钠基复合物于pbs中复水，然后与胶原混合，胶原与海藻酸钠复合物质量比为(1:2)-(1:5)；用培养基替换pbs，反复三次后作为细胞培养基。加入胶原能够提高支架在液体中的强度。
19、本发明所选用的细胞支架材料海藻酸钠表面带负电荷，通过多聚赖氨酸的交联修饰，能够实现细胞的黏附。同时，将含有促进神经细胞分化的成分，利用海藻酸钠和多聚赖氨酸将其包埋起来，为神经细胞的分化提供条件。这一处理极大地提高了细胞的存活率和分化效果。
20、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
21、本发明有效地提高了海藻酸钠的细胞黏附效率，降低多聚赖氨酸和维a酸的毒性。为体外和体内环境中，神经类细胞器的培养提供了条件。
22、按照本发明制备的海藻酸钠基复合材料，具有多聚赖氨酸相似的促进细胞黏附的性能，但其细胞毒性明显低于多聚赖氨酸。同时，维a酸的加入，有利于促进神经细胞的分化，因此本发明所制备的材料可作为良好的神经细胞支架材料。
1.一种可用于细胞培养的海藻酸钠基复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种可用于细胞培养的海藻酸钠基复合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述海藻酸钠水凝胶中海藻酸钠的质量分数为1％-3％。
3.根据权利要求1所述的一种可用于细胞培养的海藻酸钠基复合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述cacl2水溶液的质量分数为0.5-1.5％，cacl2水溶液的体积为海藻酸钠水凝胶体积的(1/20)-(1/10)。
4.根据权利要求1所述的一种可用于细胞培养的海藻酸钠基复合物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的多聚赖氨酸溶液中多聚赖氨酸的质量分数为0.1-0.5％；优选的，步骤(2)中ph为6.0。
5.根据权利要求1所述的一种可用于细胞培养的海藻酸钠基复合物的制备方法，其特征在于，步骤(2)的混合溶剂中水和dmso的体积比例为1:1。
6.根据权利要求1所述的一种可用于细胞培养的海藻酸钠基复合物的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述复合凝胶和多聚赖氨酸溶液的体积比为1:1。
7.根据权利要求1所述的一种可用于细胞培养的海藻酸钠基复合物的制备方法，其特征在于，步骤(3)的反应体系中edc和nhs的浓度均为0.1m；优选的，步骤(3)中冰浴反应2天。
8.根据权利要求1所述的一种可用于细胞培养的海藻酸钠基复合物的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述固体材料和维a酸的质量比为(100-200):1。
9.根据权利要求1-8任一项所述的制备方法制得的海藻酸钠基复合物。
10.根据权利要求9所述的海藻酸钠基复合物的应用，其特征在于，用于培养细胞，应用方法包括以下步骤：
